乙醇,冰醋酸为什么能固定细胞

流式pi单染检测细胞周期为什么用乙醇固定细胞

测细胞周期就可以用PI单独染色，也可以用PI加上BrdU/EdU。不论何种方法，都需要固定细胞。使用BrdU还要做细胞膜和核膜的通透，以利于抗体的进入。

一般常见的，只用PI染色的方法，都是使用酒精固定。优点是快速。而BrdU的方法则可以使用多聚福尔马林。测细胞周期就可以用PI单独染色，也可以用PI加上BrdU/EdU。不论何种方法，都需要固定细胞。使用BrdU还要做细胞膜和核膜的通透，以利于抗体的进入。 一般常见的，只用PI染色的方法，都是使用酒精固定。

根据你所购买的试剂盒而定,一般是先用70%乙醇先固定,然后加RNA酶和PI,半个小时左右上机检测就可以了.需要注意的就是加酒精固定的时候要用四度预冷的酒精,缓慢的加,边加边晃动细胞,避免细胞黏连在一起. （1）细胞培养 取对数生长期的细胞，按1X10。

一

般来说都是将细胞悬液离心并弃上清后加入固定液，我们加的是70％的冰乙醇，加的量根据你细胞的多少。你这个涉及的测蛋白，那么加多聚甲醛的量和时间可能

要控制得严一些才能保证最低限度不破坏a－SMA的结构。如果单测细胞凋亡和周期的话固定液多一点和固定时间长一点都影响不是太大。

其实无论是做细胞周期

的乙醇固定，还是做蛋白染色的多聚甲醛固定，固定液加1mL就可以了，一般每个样品的细胞数都在106左右。固定液太少了不好，因为固定液的实际作用浓

度一定程度上受弃上清后管内残留液体量的影响，但太多了也没有意义。也正是这个原因，实际上多聚甲醛的浓度用4%的多一些，而且因其有挥发性，时间长浓度

会有所降低。至于固定时间，一般4度30min固定作用就已经比较完全了，但是也可以放置过夜，这样有时有利于时间安排。

染色是提高标本显微观察效果的关键措施：：由于活体的微生物个体的颜色在显微镜下差别很小，同时所观察样本中所含的微生物种类繁多，个体微小，形态千差万别。每一种的组织结构、内含物质复杂多变，相互间交织贯穿在一起。如果不加染色显然是很难在显微镜的视野中把它们相互区别出来。正是因为这样，由于标本内部的微生物种类、形态、组织结构、物质大分子的成分染色剂的化学反应（着色）各有不同。通过染色，它们之间就会形成各自不同的颜色梯度，从而产生不同的视觉对比度。这样便有利于在显微镜下把它们的个体形态、着色差别、内含物、组织结构区分出来。所以大多数的标本都需要染色才能更好地在显微镜进行下观察。染色是制作永久标本的必须步骤和措施：在制作永久保存标本时，必须对标本进行固定和染色，通过固定和染色才能把标本的外部形态和内部结构层次永久固定下来，使之得以长久保存不分解变质。不是所有的观察标本都需要染色：染色的标本虽然能够增加标本的色度和色差，但在固定、染色过程中由于化学作用的缘故，也会使一些内部物质的形态和分子结构发生变性而失真，从而影响观察的真实性。再者，一些活体观察是不需要或不能使用染色剂的。

选择最佳固定液标准是：（1）最好地保持细胞和组织的形态结构；（2）最大限度地保存抗原的免疫活性。一些含重金属的固定液在免疫组化和细胞化学技术中是禁用的；（3）不要用可能带有自发荧光的固定剂，如带有苦味酸的固定剂，还有甲醛升汞固定液，会使上皮细胞产生非特异性荧光；（4）固定剂的选择、固定时间、温度和PH值都会影响实验结果。单纯固定液（1）4%中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作（Job）。中性甲醛是以PH7.2-7.4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4%甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不超过一个月。甲醛（40%） 100ml无水磷酸氢二钠 6.5g磷酸二氢钠 4.0g蒸馏水 900ml（2）乙醇固定液：使用时以80%-95%的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，假如用于证实尿酸结晶和保存糖原，可用于100%乙醇固定组织。（3）4%多聚甲醛固定液：主要用于培养细胞的固定。混合固定液（1）乙醇-甲醛（乙醇-福尔马林，AF）固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95%乙醇脱水。甲醛（40%） 100ml95%乙醇 900ml（2）B5（醋酸钠-升汞-甲醛）固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱汞沉淀处理。无水醋酸钠 1.25g升汞 6.0g蒸馏水 90ml使用前加入甲醛 10ml（3）Bouin固定液：非凡适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。饱和苦味酸水溶液（约1.22%） 75ml甲醛 25ml冰醋酸 5ml（4）Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，非凡适用于固定外膜致密的组织，也适用于糖原及尼氏小体的固定。无水乙醇 60ml氯仿 30ml冰醋酸 10ml（5） Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清楚，但成本较高且需非凡处理汞。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。升汞 5.0g重铬酸钾 　2.5g蒸馏水（加至）100ml

用酒精的的话，不是用来固定的，是脱水用的，脱水后是要放100%的乙醇中冻与-20度的。固定式用4%的多聚甲醛4度过夜。你想保存细胞的话收集后离心，用PBS洗一次，去血清，再离心，去上清，将沉淀保存液氮中，或是直接冻到-80度就可以了。