ttc法测定根系活力为什么用磷酸缓冲液处理植物根系

物根系是活跃的吸收器官和合成器官,根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平.本实验练习测定根系活力的方法,为植物营养研究提供依据.一、原理

氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80 mV的氧化还原色素,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲 （TTF）,如下式：

生成的三苯甲 （TTF）比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体,植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料

水培或砂培小麦、玉米等植物根系.

（二）试剂

乙酸乙酯（分析纯）.

2.次硫酸钠（Na2S2O4,分析纯）,粉末.

3.1％TTC溶液：准确称取TTC 1.0 g,溶于少量水中,定容到100 mL.用时稀释至需要的浓度.

4.磷酸缓冲液（1/15 mol/L,pH7.0）.

5.1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL,边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000 mL.

6.0.4 mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g,溶于水中,定容至100 mL即成.

（三）仪器设备

小烧杯3个,研钵1个,移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支,刻度试管6支,分光光度计,分析天平（感量0.1 mg）,电子顶载天平（感量0.1 g）,温箱,试管架,勺,石英砂适量,滤纸.

三、实验步骤

1.定性测定

（1）配制反应液 把1％ TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合.

（2）把根仔细洗净,把地上部分从茎基部切除.将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1～3 h,以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色,表明该处有脱氢酶存在.

2.定量测定

（1）TTC标准曲线的制作 取0.4％ TTC溶液0.2 mL放入大试管中,加9.8 mL乙酸乙酯,再加少许Na2S2O4粉末摇匀,则立即产生红色的TTF.此溶液浓度为每毫升含有TTF 80 μg.分别取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度试管中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含TTF 20 μg、40 μg、80 μg、120 μg、160 μg的系列标准溶液,以乙酸乙酯作参比,在485 nm波长下测定吸光度,绘制标准曲线.

（2）称取根尖样品0.5 g,放入小烧杯中,加入0.4％ TTC溶液和磷酸缓冲液（pH7.0）各5 mL,使根充分浸没在溶液内,在37℃下暗保温1～2 h,此后立即加入1 mol/L硫酸2 mL,以停止反应.（与此同时做一空白实验,先加硫酸,再加根样品,37℃下暗保温后不加硫酸,其溶液浓度、操作步骤同上）.

（3）把根取出,用滤纸吸干水分,放入研钵中,加乙酸乙酯3～4 mL,充分研磨,以提出TTF.把红色提取液移入刻度试管,并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次,皆移入刻度试管,最后加乙酸乙酯使总量为10 mL,用分光光度计在波长485 nm下比色,以空白试验作参比测出吸光度,查标准曲线,即可求出TTC还原量.

四、结果计算

根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/（g?h）]

式中：C——四氮唑还原量,μg.

W——根重,g.

h——时间,h.

在反应中

处理组中的硫酸起到的是终止反应的作用

在空白组 硫酸主要起对照作用

原因是在加入0.3克根尖后加入硫酸来终止反应是为了杀死根尖来 阻止根尖的尖和ttc反应

在生物帮那里就有这方面的信息，我看到过的，也有丰富的视频教程。蛮不错的琼脂又名卡拉胶系用一种稀有而珍贵的热带海洋红藻—麒麟菜为原料，经科学方法取制而成。它属于关乳糖硫酸脂，含碳水化合物约75%，此外还含有人体不可缺少的无机物质—钙、碘、铁、钠等。 琼脂是一类从石花菜及其它红藻类植物提取出来的藻胶，在我国及日本已有三百多年的历史。因其有特殊的凝胶性质，已被广泛使用于食品、医药、化工、纺织、国防、科研等领域，被国际上称为“新奇的东亚产品”。 成分胰蛋白胨(tryptone) 　17.0g大豆胨 　3.0g葡萄糖 　6.0g氯化钠 　2.5g硫乙醇酸钠 　0.5g琼脂 15.0gL-胱氨酸-盐酸(L-Cys?HCl) 0.25g亚硫酸钠 0.1g1%氯化血红素溶液 0.5mL1%维生素K1溶液0.1mL2，3，5-氯化三苯四氮唑(TTC) 0.4g蒸馏水　 1000mL可以参考：please click to connect www.bio1000.com/zt/focus/agar.html .hope that i can help you制法1　除1%氯化血红素、维生素K1和TTC外，将其他成分混合，加热溶解。L-胱氨酸先用少量氢氧化钠溶解后加入，校正pH7.2，然后加入预先配成的氯化血红素和维生素K1，充分摇匀。装瓶，每瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。2　临用前，溶解基础琼脂，每100mL基础培养基中，加入TTC40mg，充分摇匀，倾注无菌平板。3　说明将可疑空肠弯曲菌接种于平板上，在微氧环境下，于43℃培养48h。阳性菌落呈紫红色，空肠弯曲菌呈阳性反应胎儿和肠道弯曲菌呈阴性反应。1%氯化血红素溶液和1%维生素K1溶液配法：称取氯化血红素1g和1mol/L氢氧化钠5mL混合。再用蒸馏水稀释到100mL，即为1%氯化血红素溶液。称取维生素K11g和纯乙醇99mL混合，或用维生素K1针剂。琼脂卡拉胶不仅广泛应用于食品，具有清热凉肺、开胃健脾，增进食欲等功能，并可防治便秘和治疗高血压病。由于琼脂、卡拉胶溶液的胶凝性的凝胶稳定性而使琼脂广泛应用在食品工业中，可作为食品食品的稳定剂。琼脂、卡拉胶比其它胶类作出的食品味道好得多，口感更隹。琼脂除了可作稳定剂外，还可以防止包装粘连。琼脂的浓度达到0.5%至1.0%时，可作为油饼透明糖衣的稳定剂，同时提高了黏度和表面的黏着力，快速凝固并增加食品柔韧性，减少表面缺陷和裂纹。在凝胶熔化温度提同时，减少了食品的吸液软化倾向。

因为根的生长情况和活力水平直接影响到植物个体的生长情况，营养状况和产量水平，所以要测定根系活力。

植物的根和地上部的生长具有相关性，一方面二者相互依赖，根负责从土壤中吸收水分，矿物质，有机质以及合成少量的有机物，细胞分裂素等等供地上部所用，而地上部则提供给根生长所必需的糖类，维生素等。

根系发达，则地上部分生长良好。另一方面二者又相互制约，主要表现在对水分，营养等的争夺上，并从根冠比的变化上反映出来。

扩展资料：

据科学家研究，根冠中央细胞含有淀粉粒，这些淀粉粒可能起到“平衡石”的作用，在自然情况下，根垂直向下生长，“平衡石”沉积在根冠细胞的下部，水平放置后根冠中“平衡石”受重力影响改变了在细胞中的位置，向下沉积。

这种变化可能导致平衡石本身或通过它影响内质网而释放钙离子运向根的的近地一侧，此处钙离子量的增加又可能加强一种生长素(吲哚乙酸，即IAA)的向顶运输，进入根尖伸长区的近地一侧，使此处细胞生长速率明显下降，而远地部分的生长只受微小影响，从而使根向地弯曲生长。

这种方向性对植物来说是至关重要的，因为根只有向下生长，才能固定植物，才能充分吸收土壤中的水分和营养，而茎只有向上生长，才能使叶子得到光照，进行光合作用，制造自己需要的营养物质并放出氧气。

参考资料来源：百度百科-根系

TTC琼脂培养基：

成分

胰蛋白胨(tryptone) 17.0g

大豆胨3.0g

葡萄糖6.0g

氯化钠2.5g

硫乙醇酸钠 0.5g

琼脂 15.0g

L－胱氨酸－盐酸(L－Cys·HCl) 0.25g

亚硫酸钠 0.1g

1%氯化血红素溶液 0.5mL

1%维生素K1溶液 0.1mL

2，3，5－氯化三苯四氮唑(TTC) 0.4g

蒸馏水1000mL

制法

1 除1%氯化血红素、维生素K1和TTC外，将其他成分混合，加热溶解。L－胱氨酸先用少量氢氧化钠溶解后加入，校正pH7.2，然后加入预先配成的氯化血红素和维生素K1，充分摇匀。装瓶，每瓶100mL。121℃高压灭菌15min，备用。

2 临用前，溶解基础琼脂，每100mL基础培养基中，加入TTC40mg，充分摇匀，倾注无菌平板。

3 说明

将可疑空肠弯曲菌接种于平板上，在微氧环境下，于43℃培养48h。阳性菌落呈紫红色，空肠弯曲菌呈阳性反应；胎儿和肠道弯曲菌呈阴性反应。

1%氯化血红素溶液和1%维生素K1溶液配法：称取氯化血红素1g和1mol/L氢氧化钠5mL混合。再用蒸馏水稀释到100mL，即为1%氯化血红素溶液。

称取维生素K11g和纯乙醇99mL混合，或用维生素K1针剂。

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1．大球形颗粒：亦称Dane颗粒，它是一种由一个囊膜和一个含有DNA分子的核衣壳组成的病毒颗粒，直径约42nm。核衣壳为20面体对称结构。游离的核衣壳只能在肝细胞核内观察到。血中Dane颗粒浓度以急性肝炎潜伏期后期为最高，在疾病起始后则迅速下降。 Dane颗粒表面含有HbsAg，核心中还含有双股有缺口的DNA链和依赖DNA的DNA多聚酶。目前认为Dane颗粒即完整的HBV。

2．小形球颗粒：直径约22nm的小球形颗粒是HBV感染后血液中最多见的一种。它由HBsAg，即病毒的囊膜组成。化学组成为脂蛋白，可按其特有的密度与正常血清蛋白部分分离。在此颗粒中未检出达DNA多聚酶活性。目前认为HBV的小颗粒不是HBV，可能是它感染肝细胞时合成过剩的囊膜而游离于血循环中。

3.管形颗粒：直径约22nm，长度可在100～700nm之间。实际上它是一串聚合起来的小颗粒，但同样具有HBsAg的抗原性。

（二）基因组结构

目前，已可从感染HBV病人的血清中及感染肝脏提纯的病毒核心中分离出环状双股DNA，从而确定HBV属DNA病毒。

HBV DNA的两链长短不一，长链（L）完整，为负链，长度恒定，约3200个核苷酸。短链（S）为正链，长度可变，约为长链长度的50～100%，链的增生按5′-3′顺序进行。在不同分子中短链3′端的位置是可变的，而短链和长链的5′端位置固定点为粘性末端，通过250～300个核苷酸碱基配对，以维持DNA分子的环状结构。在粘性末端两侧，两链5′端各有一个由11个bp组成的直接重复序列 (Direct repeat，DR)-5′TTCACCTCTCC，该DR位于第1824个核苷酸者称DR1，位于第1590个核苷酸者称DR2，在病毒复制中起作用。

目前，由于克隆化DNA完整核苷酸已经确定，现已证实HBsAg和HBcAg都是由Dane颗粒的DNA所编码，并且二类基因存在同一DNA分子上。有人比较病毒基因编码能力和病毒多少，发现HBV DNA负链能编码全部已知的HBV蛋白质，而其正链开放读码区，不能编码病毒蛋白。

HBV DNA负链有四个开放区，分别称为S、C、P及X，能编码全部已知的HBV蛋白质。S区可分为二部分，S基因和前S基因。S基因（核苷酸155～833）能编码主要表面蛋白。S基因之前是一个能编码163个氨基酸的前S基因，编码Pre S1和Pre S2蛋白。C区基因包括前C基因和C基因，分别编码HBeAg和HBcAg。P区最长，约占基因组75%以上，编码病毒体DNA多聚酶。X区（核苷酸1374～1835）可能编码有154个氨基酸的碱性多肽，长链的裂口位于此区。

（三）HBV的抗原组成

1．HBsAg：HBsAg是由HBV的基因组所特定的，为上述三种形态的颗粒所共有。纯化的HBsAg 含有类脂质、糖类、脂质、蛋白质及糖蛋白。它由8种多肽组成，定名为P1至P8。用紫外分光光度计检查提取的HBsAg，显示有典型的蛋白吸收光谱。蛋白占总量的70～90%以上，广义的HBsAg 由三种蛋白组成：（1）主要表面蛋白（S蛋白，小分子HBsAg），由S基因编码的226个氨基酸组成。（2）中分子蛋白（中分子 HBsAg），由前S2、S基因编码，在S蛋白226个氨基酸的N端附加一个含55个氨基酸的Pre S2蛋白组成，共281个氨基酸。（3）大分子蛋白（大分子HBsAg），由S，前S1和前S2 基因编码，在中分子蛋白281个氨基酸的N端附加一个含119个氨基酸的 Pre S1蛋白组成，共400个氨基酸。

S蛋白即狭义HBsAg，是HBV囊膜的主要表面抗原的主要成份，包括糖基化的GP27和非糖基化的P24两种形式，以二硫键相连形成二聚体，代表HBsAg的结构单位，具备完整的抗原性。如二聚体解离，则HBsAg抗原性将会明显下降。

HBsAg 能刺激机体产生相应抗体—抗HBS，它是HBV的中和抗体，具有免疫保护作用，HBsAg的检出是HBV感染的标志之一。前S蛋白2(Pre S2)，的C端HBsAg端相连，PreS2暴露于HBV囊膜外层，具有多聚人血清白蛋白 (Polymenized Human Serum Albumin,PHSA)的受体（PHSA-R），能与PH-SA结合。由于肝细胞表面也有PHSA-R，HBV能通过血循环中存在的PHSA的介导，吸附到肝细胞表面，最后经胞饮作用进入肝细胞内。如病人血清中检出PreS2，表示HBV在肝细胞中复制。PreS2有良好的免疫原性，能刺激机体产生相应抗体—抗PreS2。此抗体出现于急性感染恢复早期，比抗HBs出现早而维持时间与抗HBs一样。抗Pre S2具有中和作用，可作为机体康复的指标之一。

PreS1有较强免疫原性，并能增强PreS2和HBsAg 的免疫原性；PreS1刺激机体产生相应抗体—PreS1。该抗体有lgM和lgG两种，其中抗Pre S1在HBV感染潜伏期，也就是在抗HBV～lgM出现前已产生，故可作为HBV早期感染的特异性指标。而抗PreS1 lgG出现稍晚，在体内维持时间较长，具有中和作用。

HBsAg对一些促进变性的化合物，如乙醚、1：1氯仿一尿素、十二烷基硫酸钠、吐温30以及各种蛋白水解酶都很稳定。表面的类脂质可能对于一些主要由蛋白组成的抗原决定簇起保护作用。HBsAg具有几种特异性抗原组分，包括各亚型共同抗原特异决定族a和二组互相排斥的亚型决定簇d/y和 w/r。HBsAg的主要亚型有adr、adw、ayr及ayw四种。欧美各国adr、为主，我国汉族以adr居多中区地区及我国少数民族地区以ayw为主（西藏、新疆、内蒙等）。

2．HBcAg：HBcAg存在于Dane颗粒的核心和乙型肝炎患者的肝细胞核内。

HBcAg一般从HBcAg阳性尸检肝或实验感染的黑猩猩肝脏提取。在乙型肝炎的急性期、恢复期和HBcAg携带者中常可测出抗～HBc。此抗体对病毒无中和作用。体内如发现HBcAg或抗～HBc表示HBV在肝内持续复制。

3．HBeAg：有关e抗原的本质还不十分清楚，但多数认为它是潜藏存在于Dane颗粒的核心部分。到目前为止，尚未在HbsAg阴性的血清中出现过。

物根系是活跃的吸收器官和合成器官,根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平.本实验练习测定根系活力的方法,为植物营养研究提供依据.一、原理

氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80 mV的氧化还原色素,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲 （TTF）,如下式：

生成的三苯甲 （TTF）比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体,植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原,可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强,而被丙二酸、碘乙酸所抑制.所以TTC还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标.

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料

水培或砂培小麦、玉米等植物根系.

（二）试剂

1.乙酸乙酯（分析纯）.

2.次硫酸钠（Na2S2O4,分析纯）,粉末.

3.1％TTC溶液：准确称取TTC 1.0 g,溶于少量水中,定容到100 mL.用时稀释至需要的浓度.

4.磷酸缓冲液（1/15 mol/L,pH7.0）.

5.1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL,边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中,冷却后稀释至1000 mL.

6.0.4 mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g,溶于水中,定容至100 mL即成.

（三）仪器设备

小烧杯3个,研钵1个,移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支,刻度试管6支,分光光度计,分析天平（感量0.1 mg）,电子顶载天平（感量0.1 g）,温箱,试管架,药勺,石英砂适量,滤纸.

三、实验步骤

1.定性测定

（1）配制反应液 把1％ TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合.

（2）把根仔细洗净,把地上部分从茎基部切除.将根放入三角瓶中,倒入反应液,以浸没根为度,置37℃左右暗处放1～3 h,以观察着色情况,新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色,表明该处有脱氢酶存在.

2.定量测定

（1）TTC标准曲线的制作 取0.4％ TTC溶液0.2 mL放入大试管中,加9.8 mL乙酸乙酯,再加少许Na2S2O4粉末摇匀,则立即产生红色的TTF.此溶液浓度为每毫升含有TTF 80 μg.分别取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度试管中,用乙酸乙酯定容至刻度,即得到含TTF 20 μg、40 μg、80 μg、120 μg、160 μg的系列标准溶液,以乙酸乙酯作参比,在485 nm波长下测定吸光度,绘制标准曲线.

（2）称取根尖样品0.5 g,放入小烧杯中,加入0.4％ TTC溶液和磷酸缓冲液（pH7.0）各5 mL,使根充分浸没在溶液内,在37℃下暗保温1～2 h,此后立即加入1 mol/L硫酸2 mL,以停止反应.（与此同时做一空白实验,先加硫酸,再加根样品,37℃下暗保温后不加硫酸,其溶液浓度、操作步骤同上）.

（3）把根取出,用滤纸吸干水分,放入研钵中,加乙酸乙酯3～4 mL,充分研磨,以提出TTF.把红色提取液移入刻度试管,并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次,皆移入刻度试管,最后加乙酸乙酯使总量为10 mL,用分光光度计在波长485 nm下比色,以空白试验作参比测出吸光度,查标准曲线,即可求出TTC还原量.

四、结果计算

根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/（g?h）]

式中：C——四氮唑还原量,μg.

W——根重,g.

h——时间,h.

物根系是活跃的吸收器官和合成器官，根的生长情况和活力水平直接影响地上部的营养状况及产量水平。本实验练习测定根系活力的方法，为植物营养研究提供依据。

一、原理

氯化三苯基四氮唑（TTC）是标准氧化电位为80 mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲 （TTF），如下式：

生成的三苯甲 （TTF）比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，可因加入琥珀酸、延胡索酸、苹果酸得到增强，而被丙二酸、碘乙酸所抑制。所以TTC还原量能表示脱氢酶活性，并作为根系活力的指标。

二、实验材料、试剂与仪器设备

（一）实验材料

水培或砂培小麦、玉米等植物根系。

（二）试剂

1. 乙酸乙酯（分析纯）。

2. 次硫酸钠（Na2S2O4，分析纯），粉末。

3. 1％TTC溶液：准确称取TTC 1.0 g，溶于少量水中，定容到100 mL。用时稀释至需要的浓度。

4. 磷酸缓冲液（1/15 mol/L，pH7.0）。

5. 1 mol/L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55 mL，边搅拌边加入盛有500 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后稀释至1000 mL。

6. 0.4 mol/L琥珀酸：称取琥珀酸4.72 g，溶于水中，定容至100 mL即成。

（三）仪器设备

小烧杯3个，研钵1个，移液管：0.5 mL 1支、10 mL 1支、5 mL 3支，刻度试管6支，分光光度计，分析天平（感量0.1 mg），电子顶载天平（感量0.1 g），温箱，试管架，药勺，石英砂适量，滤纸。

三、实验步骤

1. 定性测定

（1）配制反应液 把1％ TTC溶液、0.4 mol／L的琥珀酸和磷酸缓冲液按1:5:4比例混合。

（2）把根仔细洗净，把地上部分从茎基部切除。将根放入三角瓶中，倒入反应液，以浸没根为度，置37℃左右暗处放1～3 h，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及细侧根都明显地变成红色，表明该处有脱氢酶存在。

2. 定量测定

（1）TTC标准曲线的制作 取0.4％ TTC溶液0.2 mL放入大试管中，加9.8 mL乙酸乙酯，再加少许Na2S2O4粉末摇匀，则立即产生红色的TTF。此溶液浓度为每毫升含有TTF 80 µg。分别取此溶液0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL置10 mL刻度试管中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含TTF 20 µg、40 µg、80 µg、120 µg、160 µg的系列标准溶液，以乙酸乙酯作参比，在485 nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线。

（2）称取根尖样品0.5 g，放入小烧杯中，加入0.4％ TTC溶液和磷酸缓冲液（pH7.0）各5 mL，使根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～2 h，此后立即加入1 mol/L硫酸2 mL，以停止反应。（与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，37℃下暗保温后不加硫酸，其溶液浓度、操作步骤同上）。

（3）把根取出，用滤纸吸干水分，放入研钵中，加乙酸乙酯3～4 mL，充分研磨，以提出TTF。把红色提取液移入刻度试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2～3次，皆移入刻度试管，最后加乙酸乙酯使总量为10 mL，用分光光度计在波长485 nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC还原量。

四、结果计算

根系活力= C/(1000*W*h) [mg TTF/（g•h）]

式中：C——四氮唑还原量，μg。

W——根重，g。

h——时间，h。