一酶的提取 要用硫酸铵处理 不会 是外文文献

这相当于是蛋白质胶体发生盐析，从而可以分离出来。

蛋白质分离主要根据五种原理：

分子大小、溶解度、电荷、吸附性质、对配体分子的生物学亲和力等。

一、根据分子大小不同的纯化方法

1.透析和超过滤：

透析是利用蛋白质分子不能通过半透膜的性质，使蛋白质和其它小分子物质分开。常用的半透膜是玻璃纸或称赛璐玢纸、火棉纸和其它改型纤维素材料。

2.密度梯度离心；

3.凝胶过滤；

二、利用溶解度差别的纯化方法

1.等电点沉淀和pH控制；

2.蛋白质的盐溶和盐析；

3.有机溶剂分级分离法；

4.温度对蛋白质溶解度的影响；

三、根据电荷不同的纯化方法

1.电泳；

2.聚丙烯酰胺凝胶电泳；

3.毛细管电泳；

4.等电聚焦；

5.层析聚焦；

6.离子交换层析；

四、利用选择性吸附的纯化方法

1.羟磷灰石层析；

2.疏水作用层析；

五、利用对配体的特异性生物学亲和力的分离纯化

六、高效液相层析和快速蛋白质液相层析

胰蛋白酶原的激活过程如下：

胰蛋白酶原刚合成时,此酶多一个六肽,故其活性中心基团形不成活性中心,酶原无活性。当它进入小肠后,在Ca2+的存在下,受小肠粘膜分泌的肠激酶作用,赖氨酸一异亮氨酸间的肽键被水解打断,失去一个六肽,使构象发生一定的变化,成为有活性的胰蛋白酶。

这时肽链中的组氨酸(40),天冬氨酸(84)、丝氨酸(177)和色氨酸(193) (括号中的序号是失去六肽后的顺序号)在空间上接近起来,形成了催化作用必需的活性中心,酶具有了催化活性。

胰蛋白酶激活过程一般是用稀酸溶液将胰腺细胞中含有的酶原提取出来,然后再根据等电点沉淀的原理,调节pH以沉淀除去大量的酸性杂蛋白以及非蛋白杂质。

再以硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原等(包括大量的酸性杂蛋白以及非蛋白杂质,再以硫酸铵分级盐析将胰蛋白酶原等(包括大量糜蛋白酶原和弹性蛋白酶原)沉淀析出。

胰蛋白酶原trypsinogen 为胰蛋白酶的前体。在胰脏中合成，存在于胰液里，分泌到十二指肠中，通过十二指肠粘膜中的肠激酶的作用，在6位赖氨酸和7位异亮氨酸之间切断。

从N端到第6位置之间的肽链（H-val-Asp4－Lys-OH）切断时便出现活性（如牛）。这种激活作用也可以通过胰蛋白酶的自我催化反应进行。牛胰蛋白酶原氨基酸残基为229，分子量约为2万4千。

以上内容参考 百度百科——胰蛋白酶原

2.盐析法沉淀：硫酸铵分级盐析法，蛋白质疏水集团暴露，沉淀。

3.等电点沉淀法：配置磷酸盐缓冲液，tris盐酸缓冲液等，当pH为等电点时，蛋白质沉淀。

4.有机溶剂：丙酮和乙醚等，加乙醇也会有部分沉淀

5.表面活性剂，去垢剂等：SDS,Tween 100，Span 85等。

6.变性剂：盐酸胍等

由于不同的蛋白质其溶解度与等电点不同，

沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同，

改变盐的浓度与溶液的pH值，

可将混合液中的蛋白质分批盐析分开，

这种分离蛋白质的方法称为分段盐析法(fractional

saltingout)。如半饱和硫酸铵可沉淀血浆球蛋白，

饱和硫酸铵则可沉淀包括血浆清蛋白在内的全部蛋白质。

1.

分段盐析的条件先需要进行小实验探索，如：先进行0%-30%

的硫酸铵沉淀，再进行30%-60%的硫酸铵沉淀，

最后进行60%-80%的硫酸铵沉淀。

2.

每一段盐析静置之后都将离心取沉淀，透析并检测活性。

通过实验结果可以看出哪一段盐析出来的目的产物最多，

相对来说杂质就更少。

3.

比如实验中的活性物质主要在60%-80%这段出来，

在以后的实验中，就可以首先进行0%-60%的硫酸铵沉淀，

这段沉淀物可以抛弃（去处大多数杂质）；然后进行60%-80%

的硫酸铵沉淀，

这段沉淀出来是物质是所需要的目的物质含量比较高的物质，

将其收集进行下一步纯化工作。

1、硫酸铵浓度的计算就根据硫酸铵饱和度表来计算，比如60%的硫酸铵就是指体系中硫酸铵的浓度达到同温度下硫酸铵饱和浓度的60%，这个和硫酸铵的摩尔浓度没有关系。

2、直接根据饱和度表在蛋白溶液中加入适当重量的固体硫酸铵即可。

3、硫酸铵的饱和度随着温度有少许变化：

0度时，每升水可以溶解706.96克硫酸铵（此时重量百分比为41.42%,摩尔浓度为5.35 mol/L，比重1.2428g/cm3）。

25度时，每升水可以溶解769.05克硫酸铵（此时重量百分比为43.46%,摩尔浓度为5.82 mol/L，比重1.2449g/cm3）

至于从某一硫酸铵浓度调节到另一浓度，许多生化手册可以查到表，免去自己计算可能的不准确。

例如：《生物化学制备技术》苏拔贤主编（科学出版社），第58页、59页两个表分别为在25度和0度进行硫酸铵沉淀的表。