为何实际操作中较少使用乙醇作展开剂或洗脱剂?
可以做展开剂,但是性特别大时才会用到乙醇,一般的情况下,是不会使用乙醇的。
展开剂
提取分离时,用来分离极性不同的两种物质的溶剂叫做展开剂,选择适当的展开剂是首要任务。一般常用溶剂按照极性从小到大的顺序排列大概为:石油醚<己烷<苯<乙醚
展开剂的比例要靠尝试.一般根据文献中报道的该类化合物用什么样的展开剂,就首先尝试使用该类展开剂,然后不断尝试比例,直到找到一个分离效果好的展开剂。展开剂的选择条件:
①对的所需成分有良好的溶解性;
②可使成分间分开;
③待测组分的Rf在0.2~0.8之间,定量测定在0.3~0.5之间
④不与待测组分或吸附剂发生化学反应;
⑤沸点适中,黏度较小;
⑥展开后组分斑点圆且集中;
⑦混合溶剂最好用新鲜配制。
用途
一般来说,弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成,再根据需要加入甲醇、乙醇,编辑乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性,以达到好的分离效果,适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离;中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成,由甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于蒽醌、香豆素,以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离;强极性溶剂,由正丁醇和水组成,也靠甲醇、乙醇,乙酸乙酯等来调节,适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。
小檗碱洗脱剂用乙醇溶液是因为这种溶剂称为洗脱剂.如果原来用于溶解样品的溶剂冲洗柱不能达到分离的目的,可以改用其他溶剂,一般极性较强的溶剂影响样品和氧化铝之间的吸附,容易将样品洗脱下来,达不到分离的目的.
乙醇洗脱物具有很强的清除自由基的能力,可以作为抗氧化剂应用在食品,化妆品,药品等,用量越多作用越大,效果越好。
7O%乙醇洗,洗脱液中主要为皂苷,但也含有酚性物质、糖类及少量黄酮,实验证明30%乙醇不会洗下大量的黄酮类化合物。
洗脱过程中改变洗脱剂的极性:反相色谱的固定相极性小,极性大的溶剂应该会使极性物质更快地洗脱出来。
利用化合物在两种互不相溶(或微溶)的溶剂中溶解度或分配系数的不同,使化合物从一种溶剂内转移到另外一种溶剂中。经过反复多次萃取,将绝大部分的化合物提取出来。
先用非极性溶剂洗,一般使用石油醚,实验室合成的产物都是极性比较大的,所以洗不出来,在产物中的大分子类似于色素的东西也不会出来。
洗脱液的选择:
洗脱液可选择水、甲醇、乙醇、丙酮、不同浓度的酸碱液等。
根据吸附作用的强弱可选择不同的洗脱液或不同浓度的同一溶剂对各类成分进行粗分。其一般方法如下:用适量水洗,洗下单糖、鞣质、低聚糖、多糖等极性物质,用薄层色谱检识,防止极性大的皂苷被洗下。7O%乙醇洗,洗脱液中主要为皂苷,但也含有酚性物质、糖类及少量黄酮,实验证明30%乙醇不会洗下大量的黄酮类化合物。
以上内容参考:百度百科-洗脱液
阴性菌的细胞壁薄,交联度低,其中的类脂物质被乙醇溶解,使得结晶紫和碘的络合物被洗出,复染的时候显红色。
不存在脱不脱水的问题,确切说是“脱脂”。
革兰氏染色的关键步骤就是乙醇洗脱的时间,15-20s比较好,因试剂而异,最多不超过30s。