氢氧化钠等来滴定硫酸，通过指示剂的颜色突变来决定是否达到滴定终点，最终得到硫酸的浓度。 用甲基橙做指

糖类的褐变反应也称为米拉德反应，培养基在灭菌过程中糖类的褐变会对微生物的生长产生影响。

Maillard反应通常译为米拉德反应(过去译为迈勒反应)，是指还原糖和氨基酸在各种不同条件(pH、温度等)下发生的一系列很复杂的化学反应。这些反应常使还原糖分子断裂，生成多种不同的产物，包括有机酸，醛、酮类物质，以及通过进一步的缩聚反应形成分子量较大以至很大的有色物质、甚至胶体物质；反应的后期会分解放出二氧化碳。

这些反应类似还原糖在碱性和高温下发生的分解反应及随后的反应。然而，如果溶液中不存在氨基酸，还原糖的分解只在碱性和高温下才进行得比较快。但在存有氨基酸时，这类反应的速度要增加许多倍，在中性甚至微酸性如pH5左右、以及在较低的温度下都可以发生。反应的过程和产物更为复杂，生成的有色物质和具有胶体性质的产物更多。

这种反应的速度和产物的情况决定于温度和pH值，高温和碱性下反应速度急剧增大，产物色泽更深。氨基酸的种类和数量也有很大影响。某些非氮有机酸如蔗汁中大量存在的乌头酸也有类似的影响。

这种反应的情况还受到并存的氧化剂或还原剂的重要影响。空气中的氧会加速这一反应(催化聚合反应)，并存大量的氧化剂会使反应生成较多的有机酸，较少生成有色物质。还原性物质则减慢这一反应，亚硫酸及亚硫酸盐在这方面都有显著的作用，它们可以阻断羰基化合物与氨基酸的缩合反应。糖汁中的少量亚硫酸可以减少蒸发和煮糖过程的物料色泽加深。

在食品工业中，米拉德反应使食物变为褐色，故亦称为褐变反应；亚硫酸可以防止或减慢多种食品在存放时的色泽变深。

酶工程

发酵工程

基因工程

蛋白质工程

纳米生物材料

纳米管

纳米管矩

分子检测

多元分子标记

量子点，纳米杆和纳米棱镜

纳米诊断学

无标记检测：纳米电容，纳米孔，纳米隧道和纳米机械

转基因食品

克隆

基因组

基因组文库

基因治疗

基因芯片

基因重组

基因打靶

PCR

DNA连接

质粒

细胞因子

抗原

单克隆抗体

植物组织培养

动物细胞培养

胚胎移植

核移植

遗传密码

启动子

终止子

转化子

增强子

SD序列

多克隆位点

单克隆位点

分子杂交

重组DNA

实在多，就写这些了，希望能帮到你

避免使用含糖饮食，使用食物食油，少吃高热量饮食，要少食多餐，多运动，蛋黄和动物内脏如肝、脑、腰等含胆固醇相当高，应尽量少用或不用。禁烟酒，低盐饮食。

===========

APS 还是以下的缩写

abbr.

1. =Academy of Political Science (美国)政治科学院

2. =American Pediatric Society 美国小儿科学会

3. =American Philatelic Society 美国集邮学会

4. =American Philosophical Society 美国哲学学会

==========

2.His horse won by a nose.

他的马以一鼻之差取胜。

3.criteria是criterion的复数

----------

criterion

n.

1. (判断、批评的)标准,准则,尺度[C]

What criteria do you use when judging the quality of a student's work?

你用什么标准来衡量学生的学业?

=======

4.SARS

abbr.

1. = Severe Acute Respiratory Syndrome 【医】严重急性呼吸道综合症 (在中国俗称为“非典”, 即非典型性肺炎 (Atyptical Pneumonia). 2003 年 2 月首次发现于中国广东、香港以及越南的河内等地, 并迅速蔓延到世界 27 个国家和地区. SARS 是一种由变异的冠状病毒引起的高传染性呼吸综合症, 大部分感染者表现出急性呼吸困难综合症 (Acute Respiratory Distress Syndrome) 和急性肺损伤 (Acute Lung Injury). 根据世界卫生组织的统计，截至 2003 年 4 月 23 日, 全球已有 4288 人遭到感染, 其中 251 人死亡)

5.SD娃娃 英语是 Super Dollfie

=========

Super Dollfie 简称SD，是日本volks公司制造生产的1/3球型关节可动人偶，是由圆句昭浩大师开发塑造的。

一般常见的SD高58cm，还有高60cm的13岁SD以及高43cm的mini SD，价格都是不同的，一般都在人民币4500-8500元左右，mini SD一般也在2000-4000元左右。

SD的特色是可以让玩家自行改装，因为SD的眼珠、头发、身体关节、手脚、胳膊、腿都是可以分开的，不会组装的玩家可以购买到组合完成的SD，正是因为这些灵活的关节，所以我们看到的SD娃娃们才能摆出那么多的Pose，或潇洒或优雅，栩栩如生的在镜头前演出一幕幕的故事。还有就是SD的脸部可以让玩家自行化妆，不论是眉毛、睫毛、眼线、唇彩甚至是脸部肤色胭脂等等都能够让玩家将自己的SD装扮成国色天香的美女或貌比潘安的帅哥，塑造你独一无二的SD。

第一项：化学品名称和制造商信息

Section 2. Composition/Information on Ingredients

第二项：化学组成信息

Section 3. Hazards Identification

第三项：危害信息

Section 4. First Aid Measures

第四项：急救措施

Section 5. Fire Fighting Measures

第五项：消防措施

Section 6. Accidental Release Measures

第六项：泄露应急处理

Section 7. Handling and Storage

第七项：操作和储存

Section 8. Exposure Controls/Personal Protection

第八项：接触控制和个人防护措施

Section 9. Physical and Chemical Properties

第九项：理化特性

Section 10. Stability and Reactivity

第十项：稳定性和反应活性

Section 11. Toxicological Information

第十一项：毒理学信息

Section 12. Ecological Information

第十二项：生态学信息

Section 13. Disposal Considerations

第十三项：废弃处置

Section 14. Transport Information

第十四项：运输信息

Section 15. Regulatory Information

第十五项：法规信息

Section 16. Other Information

第十六项：其他信息

1。选择适当浓度的细胞接种。的内贴壁细胞的96孔培养板中，在正常情况下，包括约105个细胞。但由于该地区有很大的不同，在不同的细胞附着在MTT法，预实验检测其贴壁率，倍增时间以及种子细胞的生长曲线的条件下，确定测试孔接种细胞数和温育时间，为了确保列车终止诱导的细胞过满。因此，在为了保证MTT晶体形成的细胞数成比例呈线性关系。否则，细胞的数目的敏感性降低太多，太少没有观察到差异。

2。集合中的药物浓度。请务必看到更多的文献，参考其他人的结果，然后给出一个比较大的范围内的第一次筛选。根据自己的筛选狭窄的浓度和时间范围再细筛的结果。记住！否则，可能会使用的时间和浓度的药物的有效浓度和时间。

3。设置的时间点。 OD值吗？在不同的时间点，输入Excel工作表中，并最终在不同时间点的抑制率变化的测量，绘制图形的变化，当曲线变得平坦（高原）的时间点，应使用最好时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制最明显的表现）。

4。孵化时间。 200UL 10 4-5电源增殖细胞的培养液中是难以维持68H，营养不足，细胞增殖阶段逐渐趋向G0期往往仍影响的结果，我们在48小时介质中被改变了。

5.MTT法只能测定相对细胞数和相对活力，不能绝对数量测定细胞。做MTT，尽量无菌操作，因为细菌也可以导致MTT比色OD值增加。

6。理论未必全是。要根据自己的实际情况进行调整。

实验对照孔加药孔孔应设置为零。零孔加培养基，MTT，二甲亚砜。控制井和计量孔必须加细胞培养基中，MTT法，二甲亚砜，和不同的是添??加到媒体控制井，而溶解该药物中加入不同浓度的药物的给药组。

8。避免血清干涉。含15％FBS培养基中培养的细胞中时，高血清物质会影响试验井的光吸收值。将测试的灵敏度测试增加背景。因此，它通常是优选的是小于10％胎牛血清的培养液中。着色后，尽量吸净培养孔残余的培养基。

实验步骤

贴壁细胞：

1。上收集的细胞数，调整浓度的细胞悬浮液加入到每个孔100ul铺板所测试的细胞调节至密度为1000-10000孔（边缘？孔填充用无菌PBS中）。

2.5％CO2，37℃孵育，直到细胞单层覆盖的底部的孔（96 - 孔平底板），添加药物的浓度梯度，在原则上，细胞的粘附给药或两小时或半天的时间，但我们常在前一天下午铺板第二天早上剂量。一般为5-7梯度，每孔品100μl，位于3-5井。建议设5，否则难以体现

3.5％的CO2，并在37°C孵育16-48小时，倒置显微镜下观察到的真实情况。

4。添加到每个的阱20ulMTT溶液（5mg/mL的，或0.5％的MTT），并培养4小时。用MTT反应的药物可以先离心丢弃培养基，用PBS仔细洗涤2-3次，然后添加到培养基中含有的MTT。

5。终止的文化，并认真吸收孔培养基。

6每孔加入150ul二甲亚砜，设置振动筛在低速振荡10分钟的晶体完全溶解。在OD490nm的酶联免疫吸附检测器测量的每个孔的吸光值。

7。同时置零孔（培养基，MTT，二甲亚砜），对照孔（细胞，相同浓度的药物溶出介质，培养基，MTT法，二甲亚砜）

悬浮细胞：

1）收集对数生长期细胞，调节细胞悬液浓度为1×106互补序列①1640（无血清）介质40ul②加放线菌素D（有毒）10UL稀释培养基升的？克/毫升，需要预先测试，以找到最佳稀释,1:10-1：20）③需要检测对象10UL④细胞悬浮液50μl（即，5×104cell /孔）的100ul加入96 - 孔板（边缘？孔填充用无菌水）。建立控制每块板（加100（原液100 1640）。

2）在37℃，5％CO2孵育16-48小时，并在倒置显微镜下观察。

3）每孔加入10微升MTT溶液（5毫克/毫升，或0.5％的MTT），并培养4 h。 （悬浮细胞推荐WST-1，培养4小时后可以直接跳到步骤4），直接酶联免疫吸附测定的OD570nm 630nm的校准测量每孔的吸光度值）

4）离心（ 1000转x10min）仔细吸掉上清液，每孔加入100微升二甲亚砜中，设置摇动器在低速振荡10分钟，完全溶解的结晶。在酶联免疫吸附测定OD570nm（630nm的校准）测量的吸光度值？为每个孔。

5）设置零孔（培养基，MTT，二甲基亚砜）对照孔（细胞，相同浓度的药物溶出介质中，在培养基中，MTT法，二甲亚砜），每个设置的3个井。

MTT准备

MTT通常情况下，最好使用4℃避光过滤器后两周内，或配制成20,10,5保存在 - 20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量包装，用黑袋或黑纸，铝箔及包装暗，避免分解。我一般都把MTT粉包装EP管，现有的服务直接添加到培养板，不需要一下子有这么多的，特别是当它绝对MTT变为灰绿色不能重复使用。

MTT致癌性，使用时要小心的那种透明薄膜手套的最佳条件。被称为MTT需要无菌，MTT细菌，是非常敏感的到96孔板一个PBS 黑暗中额外的时间并不重要，毕竟，时间是短暂的，你不用担心时，你可以把关了灯手术台。

制备MTT溶解，还配备用盐水在60℃水浴中进行增溶。

PBS配方：

氯化钠8克

KCL0.2克

磷酸氢二钠1.44克

>KH2PO40.24克

调pH值7.4

给定容量1L

细胞接种（平台）

细胞30代不要使用，因为状态并不好，培养板中使用一个很好的（最好是进口板），坏板或重复使用的板仅做预实验。

最佳接种密度计算出来的按照预实验接种后，细胞生长抑制率（或增值率），因为关于OD值吗？细胞密度10000/ml的测量时间间隔呈直线关系最好的，最可靠的结果。如果店铺是太稀细胞的杀伤不会很明显，可能都过于密集的细胞凋亡，细胞生长速度过快的营养是不够的，最后导致死亡。过密或过少的细胞，细胞增殖将是过快或过慢，差线性关系，其增值率。因此，MTT细胞的密度使用更10000/ml的，100ul /孔。

细胞密度的特点，不同的细胞，如果细胞刺激作用的药物，那么细胞浓度为小点，如果你这样做对细胞有抑制作用的药物，然后取更大一点细胞浓度，因此，与对照的差异，该数据是更好。悬浮细胞的各孔中的细胞数达到105，贴壁细胞103-104。

其他的声音：

第一个单元格播种密度不能太一般每孔1000就足够了，我想，宁少勿多。特别是对肿瘤细胞。 10000 /孔是太高，所以，即使药物，MTT法不能表达的最佳点板浓度在4000-5000 /孔，太少的SD值。

2.MTT本身是一个相当厚的实验约10％，增殖率的波动也就不足为奇了。特别是新手，有20％的波动也是常见的，因此它可能是由于技术原因，特别是种板技术必须过关的。

我MTT法检测肿瘤细胞，这些细胞长一开始我100000/ML浓度的疫苗接种，结果细胞长的太满，结果梯度也没有线性关系。调整后的浓度使用了40000?80000/ML浓度MTT法，做的好点的是60000?70000/ML组的浓度。 40000 / M的基团的浓度，是因为这些细胞是以下，药物作用或只是没有一个有良好的线性关系的梯度，根据细胞生长速度，以及药物的特性（的时间依赖关系，并的浓度依赖性的药物），以确定培养的时间是48小时或72小时。

一定要注意避免细胞的细胞悬液混合沉淀下来，在每个孔中的细胞数的范围，收到了一些必要再混合均匀。移液管操作要熟练，避免人为错误。虽然更准确比移液管移液管，但如果操作不熟悉，CV将在8％左右。此外，吹了太多的时间，也影响细胞活力。因此，熟练的鞋，尽快在黑板上。

让我谈谈我的一点经验：

1。狗新花样不能太多悬挂的总的3-4倍，吸液管液量可能会比较容易混合。 10毫升优选地安装的悬浮液中3?4毫升：该悬浮液的离心管太少容易吹气泡，悬浮液的特定也是不容易被风吹到单细胞悬浮液。 。 。

移液管移液管最好在1毫升左右：吸入过量的液体，看起来液管余下的数，如吹打容易起泡吸管吸了很多量过小，强度移液是不够的，将移液不均匀。如果吸液量1毫升稻草，总液量，在约5ml的好处

吸气时，悬挂在底部，然后抬起，但吹了下来，不留液体的表面，否则容易一拳砸的气泡。

4。狗新花样，你可以数100吹打均匀（前约30-50倍的吹打加细胞基本上差不多均匀。加细胞分别接种2孔反复移液管移液3次3次后，他们把他们的枪挂在5秒内的细胞悬液，然后划出一定的速度悬浮液）。

用吸头，每孔加入到细胞中不要太猛了，否则你会发现细胞在想要添加的移液管尖中的孔的底部的势头由于收集了一堆，一般在这种不均匀的分散液接触抑制周围的孔的底部的中心，影响细胞的生长。因此，速度不能太快，也不能太慢。我习惯了增加每块板水平握手后，左一个右其次，移动的答复中，细胞可以均匀地分散这些。 （铺板技术是MTT法的关键，也是基础，我们必须练好，一旦学生振荡器和混合与旋涡细胞，最后一个单元格都死了，使用这种方法是不建议混合细胞

BR />加入MTT

个人认为MTT最关键的是你的手机号码和MTT适当的比例补充说，真正起作用的，和具体的细胞数量之间的关系和真正的工作真的不好确定，我认为MTT支付超过最低量好一些

MTT各种报告的MTT，一般是过度10UL不够的，如果你不使用96孔板， MTT按照10％的比例超过100ul培养基地。，加入MTT振荡让MTT和媒介组合，但这个应该不大。

有个别的孔，如立即加入MTT变蓝黑色，污染的可能性是很大的，另一个在前面的MTT摊薄细胞仍然需要适当的方法来过滤消毒。可以加MTT前显微镜下才能看到，如果有一个孔染菌，染菌孔附近往往是 />

血清白蛋白对大多数的药物的组合的效果，它是可能的分开的药物和MTT一起看到的将反应MTT法不能反应，不必除去水培的含有药物的溶液，直接加。

上层清液

争：

1加DMSO液体吸掉，但培养液，紫色晶体吸收之前，该第一的平板离心机，2000转，5分钟，然后吸掉上清液（如果是悬浮细胞，此方法建议在2500rpm 10分钟离心分离的悬浮细胞，并做MTT的最好的圆底96孔板中的96 - 孔板，注意不要结晶颗粒吸掉上层清液后，建议每孔吸出150-160ul）

2。每次我都会MTT和孵育4小时，然后离心1000G 5分钟枪小心吸去上清液，或将一小部分蓝水晶吸出，所以还是建议翻转颠倒了！

另外，我们可以直接在板翻转颠倒（垫层滤纸）2-3倍的方式“吸”是不容易使细胞脱离出来。轻拍，或倾斜一点帮助吸液管，紫色晶体几乎没有可见的列，但你自己的细胞贴壁的前提下，比较监狱，半贴壁生长的细胞容易脱落。药物作用时间长，阴性对照组的细胞可能是由于过多离开MTT加入后形成的结晶漂起来，所以不能直接排放

MTT，这一步必须小心，不要使用贴在墙上倒立的方式，因为是不强大的单元格将被倒掉，从而影响OD值吗？悬浮细胞，不拍打上清液。 ，离心后，不拍打这种方法杀了人。

5。加入MTT反应完成后3-4h后，在96孔板的作用是从孵化器中删除要轻柔，避免振荡结晶，它溜了。您可以尝试在96孔板倾斜30度角，然后的枪口慢慢吸一些细胞排球吸，有些人会用移液器吸头吸病人，枪口下的强度和方向，以确保每个孔是不要让吸头接触到孔??底，一次后倾斜孔板，不反复倾斜的平直，这样也会使晶体脱落。

6。移液与医用注射器登上教训针对角线的经验教训沿着培养基MTT的墙壁，好像我1毫升针小心地吸可靠的比其他的方法，一般不吸紫色晶体。

避免上层清液和改进的方法

一般容易发现，即使贴壁细胞在96孔板离心式离心机，的MTT溶解在DMSO，结果是没有好，不能得到预期的结果重复性差。

解决方法1：以下文献方法：周建军等，评价抗癌物质活性的改良MTT法，中国期刊的药品，1993,24（10）:455-457 BR />

具体方法如下：

三溶解液：10％SDS，溶于蒸馏水中，5％异0.012mol/LHCL的。

三联溶解解决方案：SDS10g，异丁醇5毫升的10M盐酸0.1毫升双蒸水溶解配成100mL溶液

操作：细胞悬浮在培养板中，加一定密度的解决方案，90ul /孔管理，然后（悬浮细胞）在同一时间或4h后（贴壁细胞）通过加入不同浓度的药物10UL /空穴，位于三井。另外，每块板另一个没有零孔（仅添加到培养基中，无细胞和药物）培养2d后加入MTT溶液20ul /孔，和文化继续4小时，然后加入上述的三重液体品100μl/孔，在37℃静置过夜，用酶测定的标准仪器孔A570值？

优点：简化操作，提高了可靠性。

解决方法2：日本同事有一个新的试剂CCK-8试剂，CCK -8试剂可用于简单和准确的细胞的增殖和毒性分析其基本原理是：含有的试剂WST-8 [化学名称：2 - （2 - 甲氧基 - 4 - 硝基苯基） - 3 - （4 - 硝基苯基）-5 - （2,4 - 二磺酸苯基）-2H-四唑单钠盐]，这在电子载体1 - 甲氧基-5 - 甲基硫酸盐吩嗪二甲基（1 - 甲氧基PMS）线粒体脱氢酶的作用降低的高度水溶性的黄色染料（甲臜染料）A的产生与活细胞的数目的数目成正比，所以此功能可以用于直接的细胞增殖和毒性分析CCK-8试剂已预先装入的细胞增殖和毒性分析所需的组件，未经稀释，然后缓冲区或中等，没有任何放射性同位素和有机溶剂的CCK-8试剂。因此，没有特别的技能，你可以让每一个用户准确，可重复的实验结果。

★优势 / a>

1，简单的一个步骤的结果

2，节省时间，不需要预制开放

3，安全没有必要放射性同位素，有机溶剂

>

4，迅速消除溶解除沉操作

5，高灵敏度，灵敏度比MTT

6，重复性几个不错的步骤，无损，准确

是比较昂贵的，如果充分的资金，这是件好事。

★细胞增殖实验使用：

1，接种细胞悬液100μL96孔板，预先放置在37℃，在5％CO 2培养箱培养。

2在每个孔中引入CCK-8试剂10μl的。

培养板在孵化器1-4个小时。

4，测定吸光度在450nm波长为600nm或600nm的波长参考。

解决方法3：使用MTS / a>

解决方案4：

加入DMSO

放弃孔内液体，最好不要更换相同数量的实验DMSO加入DMSO清洁，直接加入到DMSO首先，除去上清液，沉淀将难溶于培养基颜色检测测量时，将影响最终的结果，但前提是不能使细胞与吸掉，因为错误是远大于培养基中没有放弃一个干净的错误，所以，以确保细胞的前提下，尽可能不虹??吸的培养液虹吸如果培养溶液不是一次性清洁空白孔应留下的培养液相同量的，所以检测时的培养液的影响，可以除去尽可能多的DMSO的量为100ul或150ul

1。添加的DMSO后使用振荡器轻轻振摇5 - 10分钟时间控制密切越好，放置时间长了会影响结果，该值将过大，其结果是不可靠的。

2。后加入DMSO排球反复抽吸溶，尽快解散后检测。实验孔是小的，它建议，这种方法，因为其更好的效果比振荡溶解。

3，或者在37度把培养箱中培养15分钟，溶解结晶

振荡，让甲溶解，以便更好地测量的吸光度振荡96孔板具体地说，振荡器，目的：凿孔泡沫。气泡的存在下，由于其光的反射和折射效果（原则读者是通过特定波长的测量样品中的特定物质样品的吸光度推测）的浓度，会导致结果抵消了测定OD值吗？

至于测定给出的波长是不同的颜色溶液，DMSO，溶解紫（红）色，490nm处的最大吸收值，而在ATCC的MTT试剂盒使用的是不DMSO，它的测定波长为570（在ELISA实验，OPD为底物测得的波长为492，选择的TMB底物溶液是450）SDS和酸化异丙醇选择570nm的，并建议作为参照波长等于655nm。

DMSO溶解经过10分钟内测，越放颜色越深，SDS溶解液测定吸光值，其值在三天内保持不变。

细胞密度太大测定吸光度细胞密度过大，吸光率也小另一个细胞状态的关系，细胞状态不好的吸光度值低少量的细胞，或短的时间内培养的OD值会比较低。每个洞之间的差异尤为明显说明可能存在的污染，空白孔的OD值过高，很可能是细菌的污染。

井直接OD值差别一般应在0.1-0.15不同的考虑：1。种子细胞不统一或疫苗接种时，应保证每一个孔一般为1000-10000元以及细胞细胞计数，加入细胞悬液培养基中定容，轻轻吹打几次，使细胞均匀分布的，因此，这是更好的不是直接加入预定体积的细胞悬浮液，接种疫苗应加入含有血清的介质2。粘附时间:18-24小时，如果没有，而不是悬浮细胞可虹吸

/>一般，为了实验的精度，和各浓度可提供5-6井可以最终的统计，可以除去的最大值和最小值，或荒谬的值？其特征在于，所述数据被除去，这些离谱数字细胞污染，是否在培养过程中细胞的死亡，文化，蒸发过度的附加组件的MTT溶液是不准确的，在5％二氧化碳培养箱中培养，在37°C，无论是时间常数（1-4小时）有密切的关系，当然的OD值的测定仪器状态是正常的，是非常重要的！（一般热身20分钟）。

MTT吸光度误差在0.2至0.8之间。分析化学相关的兰伯特Beer定律，朗伯 - 比尔定律骨密度分析偏差，通常在标准曲线的情况下是不是线性的，尤其是吸光物质的浓度较高时，可以清楚地看出通过原点到浓度轴弯曲的现象（吸光度轴弯曲）情况称为朗伯 - 比尔定律的偏离定量的曲线的弯曲部，将产生较大的误差。骨密度分析仪测量不准确的误差的主要来源。光度计具有一定程度的测量误差。这些错误可以是来自于光源不稳定，变化的实验条件下偶然不准确的读数。

光度计透射的标尺刻度是均匀的。吸光度标尺刻度不均匀。波动对传动比一定值时，读出的相同的工具吸光度读数波动不再是一个固定的值。吸收更大的错误读数波动而引起的透光率或大或小，浓度测量误差大，更大的吸光度，最好的光度当选的吸光度读数不下降在中间规模的要被测量的透射率T在15％至65％的范围内的溶液，或在两端时的吸光度，A是在0.2?0.8之间，为了确保较小的相对误差的甲= 0.434（或透射比T = 36.8％），最小相对误差的测量。

其他的声音：

最好的570nm波长过滤器，MTT吸光度测量。在此波长的峰值，在其他词语具有大致490nm处与其他波长的高灵敏度，但我的经验的灵敏度降低了一半。

2 BIO-TEK，我们使用ELx800，一般值2是可靠的，如果该值是要考虑它是否是一个错误在实验过程中，我已经看到了花园的一些职位OD值可能与活细胞数在0.2-1.2范围内具有良好的线性关系，复孔太大的区别，但OD值在0.3-0.9范围内的好，如果你的OD值？此范围之外的，做实验，细胞计数可能不适合，你应该调整细胞的数量。边缘效应

/>

孔一般只有空白，非培养细胞，或这四条线中的数据将是高或低的由圆圈包围的96孔板，96孔板的培养箱中因为缺乏湿度，和孵化器具有一定的温度，由于温度梯度，使得边缘的孔蒸发更快，导致的各个组成部分中的培养基中的浓度增加，导致这种现象的不同的细胞状态，它是必要的，以保证湿度的培养箱中，并以降低的频率和持续时间的开关培养箱。方法：所有周围的圆形孔的孔板，“否”，的影响是非常大的，最外面的圆必须添加水，PBS或培养液中，只要你能防止水分蒸发。

如何计算的IC50后的寇方法：

（1）lgIC50 = XM-I（P- （3-PM-PN）/ 4）

XM：LG的最大剂量

I：LG（最大剂量/相邻剂量）

P ：正反应速率和

PM：最大的阳性率

PN：最小阳性率

例如：各组浓度0.1,0.01， 0.001,0.0001,0.00001,0.000001，稀释10倍，与最大浓度为0.1的抑制率分别为0.95，0.80，0.65,0.43,0.21,0.06到

计算公式：

PM =在

Pn的0.95

= 0.06

P = 0.95 +0.80 +0.65 +0.43 +0.21 +0.06 = 3.1

XM = lg0.1 = -1

LGI = lg0.1/0.01 = 1

lgIC50 = -1-1 *（3.1-（3-0.95- 0.06）/ 4）= -3.6025

IC50 = 0.00025

（2）Bliss法：自己的检查书

（3）IC50计算软件，请参阅下文附件

（4），使用EXCEL趋势线寻求IC50约LD50的方法与此类似！

（5）网上寻求IC50或EC50： HREF =“htt??p://chiryo.phar.nagoya-cu.ac.jp/javastat/JavaStat-j.htm”目标=“_blank”>http://chiryo.phar.nagoya-cu.ac.jp/javastat / JavaStat-j.htm

结果统计

数值应用SPSS软件进行方差分析，P <0.05显著差异（P <0.01）的差异是非常显著的时间为横轴，吸光度值上的垂直轴绘制以x±s行细胞生物学，具体评价式IC50的细胞死亡的抑制率％= OD控制基团-OD实验组/ OD控制组

可以做excel表格两两比较，T-测试，你可以参考你的数据应该是指多个样本T检验，方差分析软件SPSS或SAS。

/>口复用：

板使用一个很好的（最好是进口板），坏板或重用板仅做预实验。一般贴壁细胞生长的重用培养板效果不是很好，因为培养板表面涂了一层的贴壁细胞的物质，在生产，可能会失去清洁后悬挂或半悬浮培养细胞的生长也建议不要使用太多次，甚至进口的板子，次数不超过3次，最终测量值的1/3，什么最好的价值。

板块强烈建议不要重复使用：泡沫酸，但泡完酸板是非常有利于细胞的生长，会有不良帖子壁，细胞生长缓慢，等.2，非常彻底的消毒有关的董事会，如果存在的话，那么运行的风险.3重复使用洗板。不干净，在训练过程中容易出现杂质

再利用的做法：

洗涤2％的NaOH浸泡4小时，然后浸泡4小时1％盐酸，水为15倍，用蒸馏水洗涤三次，干燥，UV照射过夜（UV多于两个小时消毒罐）

实践：

气泡酸2-4小时，老师让我们做了四个多小时（普通玻璃仪器过夜）。捞出，冲洗，干燥，紫外线照射过夜。估计收集在一起与其他钴60辐照灭菌。

/>做法：

做MTT用水和清洁剂的水冲洗板，然后用洗衣粉水（注意最好让清洁剂的第一打开）几个小时。，冲洗

ZHAO Ping, DONG Lei, LUO Jin�Yan, MA Hui, GUAN Hai�Tao, SHANG He�Ling

1Department of Gastroenterology, 2Department of Oncosurgery, Second Hospital, Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710004, China, 3Tangyu Convalescent Hospital, Lantian 710516, China

【Abstract】 AIM: To establish the rat model of ulcerative colitis (UC). METHODS: The rats were first given 40 g/L dextran sulfate sodium (DSS) in drinking water for 7 d and then given only water for 10 d. The disease activity index (DAI) of all the rats was evaluated daily. The rats were killed on day 8, 13 and 18 and the lesion score and histological score of colon were evaluated. Segments of distal colon were adequately prepared for transmission electron microscopic observations. The weight index of cecum, colon, thymus and spleen were calculated and the myeloperoxidase (MPO) activity of rectum was measured. RESULTS: Rats receiving 40 g/L DSS solution for 7 d developed diarrhea and positive fecal occult blood. Inflammation of colon mainly involved the mucous membrane and submucosa. Focal erosions of the epithelium, goblet cells depletion, destruction of crypt and neutrophil infiltration were observed. The increase of MPO activity 〔(8.84±3.67) nkat/g tissue vs (127.19±27.84) nkat/g tissue, P<0.01〕 and weight of spleen 〔(3.45±1.00) mg/g vs (5.07±1.31) mg/g, P<0.05〕 was also observed. After replacing the DSS solution with water, the symptoms and colonic pathological changes of rats were gradually disappeared and the MPO activity significantly decreased（P<0.05）. CONCLUSION: This colitis model in rats appears to share nearly all the morphological characteristics with human UC.

【Keywords】 disease models, animalcolitis, ulcerativedextra sulfate sodium

【摘要】 目的: 建立大鼠溃疡性结肠炎（UC）模型. 方法： 给SD大鼠饮用40 g/L DSS溶液7 d，然后改正常饮水10 d. 每日进行疾病活动指数(DAI)评分. 于实验8,13和18 d分别处死4～5只，行组织学大体评分、组织病理评分及透射电镜观察. 计算盲肠、回盲部至肛门段结肠、胸腺、脾脏质量指数并测直肠髓过氧化物酶（MPO）含量. 结果：大鼠饮用40 g/L的DSS 7 d均出现腹泻、隐血试验阳性. 可见炎症主要累及黏膜和黏膜下层，部分表面上皮脱落，上皮内杯状细胞减少，隐窝破坏，浸润的炎症细胞以中性粒细胞为主. 伴有MPO升高〔(8.84±3.67) nkat/g vs (127.19±27.84) nkat/g, P<0.01〕及脾脏增大〔(3.45±1.00) mg/g vs (5.07±1.31) mg/g, P<0.05〕. 停药后症状及结肠病变逐渐恢复， MPO活性显著降低（P<0.05）. 结论：此模型病理改变类似人UC.

【关键词】 疾病模型，动物；结肠炎，溃疡性；葡聚糖硫酸钠

0引言

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis, UC）在我国的发病率逐渐增高. 其确切的病因和发病机制至今尚不完全清楚,缺乏有效的根治方法. 因此建立UC动物模型,对研究UC的病因、病理机制及新药开发具有重要意义. 葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium,DSS)诱导的UC动物模型与人类UC的病理形态极为近似，但不同物种及不同浓度DSS所诱导的UC的病变特征不同. 我们选用SD大鼠建立UC动物模型，并观察该模型不同时期的症状、病理等改变如下.

1材料和方法

1.1材料

健康雄性SD大鼠26只，体质量180～200 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供. 葡聚糖硫酸钠Sigma公司生产,Mr 5000,硫磺含量150～200 g/kg. 髓过氧化物酶（myeloperoxidas，MPO）检测试剂盒购自南京建成生物研究所. H�600透射式电子显微镜由日本日立公司生产.

1.2方法

大鼠随机分为DSS模型组（n=20）和正常对照组（n=5），DSS模型组饮用40 g/L DSS溶液7 d诱发急性结肠炎,然后改正常饮水10 d. 正常对照组大鼠正常饮水. DSS模型组每日记录大鼠体质量、大便性状、隐性或显性出血情况, 进行疾病活动指数(DAI)评分〔1〕. 于实验8（n=5）, 13（n=5）和18 d（n=4）用200 g/L乌拉坦7 mL/kg ip麻醉，剖腹观察结肠外观，延系膜侧剖开结肠，行组织学大体评分〔2〕. 取盲肠、回盲部至肛门段结肠、胸腺、脾脏称质量，计算体质量指数. 取升结肠、横结肠、远段结肠各1.5 cm,用40 g/L甲醛溶液固定,切片,HE染色，行组织病理评分〔3〕. 取距肛门3 cm处直肠黏膜行透射电镜观察. 称取直肠黏膜100 mg，-80℃保存，按MPO试剂盒说明进行检测.

统计学处理： 使用SPSS 10.0软件行统计学处理. 数据以x±s表示，采用One�way ANOVA分析. P<0.05为差异有显著性.

2结果

大鼠饮用40 g/L DSS 3~7 d出现急性结肠炎症状，腹泻、隐血试验阳性最早于3 d出现，肉眼血便最早于4 d出现. 动物体质量明显下降， 5 d除血便极轻的2只大鼠体质量稍增加和1只大鼠明显增加外，其余17只体质量仍减轻. 饮用DSS过程中大鼠出现毛发色泽灰暗,精神萎靡,食量下降等. 停药后1～2 d，腹泻、血便迅速好转. 模型组DAI值由2 d的0.56±0.41迅速升至7 d的2.04±0.77，差异有显著性（P<0.01）. 7～9 d死亡6只，1只死于肠坏死，1只死于衰竭，4只死于肠道出血. 实验8 d见大肠缩短，肠壁明显增厚,管壁僵硬，肠黏膜广泛充血、水肿，局部有糜烂、出血，可见明显溃疡面. 病变以回盲部及远段结肠为重. 远段结肠的不规则溃疡及糜烂多见于距肛门缘3～4 cm内,病变自下向上逐渐减轻. 实验13 d，结肠病变有所恢复，仍有局部充血、水肿和溃疡. 实验18 d，结肠病变基本恢复，溃疡愈合，仍有局部充血、水肿，结肠损伤评分较8 d显著减低（P<0.01,Tab 1）.表1DSS所致结肠炎恢复过程中结肠损伤及组织损伤评分（略）

2.1组织病理改变实验8 d越近肛门侧病理改变越明显，与肉眼观察一致. 光镜下可见炎症主要累及黏膜、黏膜下层，部分表面上皮脱落，上皮内杯状细胞减少，隐窝破坏，浸润的炎症细胞以中性粒细胞为主,符合急性炎症的组织病理改变（Fig 1A）. 实验13 d，光镜下可见较局限的隐窝破坏伴上皮再生修复及腺体增生，隐窝变形、排列紊乱. 实验18 d，黏膜基本恢复正常，仍有少量炎细胞浸润. 升结肠、横结肠组织损伤评分各时间段差异无显著性(Tab 1). 电镜观察发现正常对照组结肠上皮细胞微绒毛完整，细胞连接和细胞器未见损伤，杯状细胞分泌旺盛. DSS模型组结肠上皮细胞有坏死脱落，细胞受损严重，表现为微绒毛稀疏、紊乱、断裂乃至脱落，线粒体肿胀，粗面内质网扩张，核染色体边集明显. 杯状细胞明显减少，残留的杯状细胞水肿明显，线粒体肿胀、嵴突减少、嵴断裂，内质网扩张（Fig 1B）.

2.2脏器体质量指数和MPO活性改变实验7 d后，盲肠、结肠、脾脏体质量指数显著增加，停药后逐渐恢复（Tab 2）. 在DSS致大鼠急性肠炎过程中胸腺体质量指数无明显变化. 实验7 d后，MPO活性显著升高，停药5 d后显著降低（Tab 2）.表2DSS结肠炎恢复过程中脏器体质量指数及MPO活性（略）

3讨论

大鼠饮用40 g/L DSS 7 d均出现急性结肠炎症状，腹泻、隐血试验阳性最早于3 d出现，肉眼血便最早于4 d出现. 大体观察见肠壁明显增厚，管壁僵硬，肠黏膜广泛充血、水肿，局部有糜烂、出血，可见明显溃 疡面. 病变以盲肠及远段结肠为重. 光镜下可见炎症主要累及黏膜、黏膜下层，部分表面上皮脱落，上皮内杯状细胞减少，隐窝破坏，浸润的炎症细胞以中性粒细胞为主,符合急性炎症的组织病理改变. 这些改变与人类的UC相似〔1,2〕. DSS致大鼠UC模型简便易行，让实验动物自由饮用DSS配成水溶液即可，重复性好,成模率达100%，成功率高. 以往研究表明，人为反复运用DSS刺激，可诱导大鼠出现类似人类的急性期和缓解期交替出现的变化，与人类病变、病程相似〔1〕. 因此，DSS致大鼠UC模型是较为成功的UC动物模型. 我们观察到单次给DSS，停药后结肠病变逐渐好转，至停药后10 d，结肠病变基本恢复，溃疡愈合，仅有局部充血、水肿. 故如应用该模型进行药物干预治疗，应注意治疗时机的选择.

DSS诱导大鼠结肠炎模型与人类UC的症状及病理改变均相似. 该模型制作简单、重复性好，除可用于UC发病机制的研究外，还可用于开发新型UC治疗药物的研究，如黏膜保护剂、抗TNF抗体〔3,4〕等有潜在治疗作用的药物.

【参考文献】

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〔3〕 Iba Y, Sugimoto Y, Kamei C, et al. Possible role of mucosal mast cells in the recovery process of colitis induced by dextran sulfate sodium in rats 〔J〕. Int Immunopharmacol, 20033(4): 485-491.

〔4〕 Murakami A, Hayashi R, Takana T, et al. Suppression of dextran sodium sulfate�induced colitis in mice by zerumbone, a subtropical ginger sesquiterpene, and nimesulide: Separately and in combination 〔J〕. Biochem Pharmacol, 200366(7): 1253-1261.