乙醇 醋酸钠沉淀质粒要多长时间
用70%的酒精是因为这个浓度对沉淀DNA效果最好,并且异丙醇能溶于酒精,去除异丙醇,然后挥发酒精,似乎还能除盐.个人见解.
异丙醇沉淀以后不必用70%乙醇洗.只有醋酸钠 乙醇沉淀之后才需要70%乙醇洗,目的是洗去加入的盐,乙醇浓度太高达不到脱盐效果,浓度太低DNA会溶掉
异丙醇沉淀以后有人用无水乙醇洗一遍,目的是加速DNA的干燥,因为异丙醇的挥发性没有乙醇好
主要目的还是为了除盐,前面沉淀DNA时加入的盐会影响你后续的克隆操作,如酶切和PCR.
醋酸钠乙醇沉淀法用于pcr产物的纯化
加1/10的3N醋酸钠,再加3倍量无水乙醇,冰浴30min,13600rpm离心20min,弃上清.加75%乙醇,再离心20min,弃上清,真空干燥,加水溶解。
哈哈哈 ethanol precipitation讲究太多了你摸不透的。
在ethanol precipitation里面可使用的盐有以下:
使用CH3COONa
使用最多的最普遍的。添加终浓度0.3M
使用CH3COONH4
可去除dNTP或糖类,蛋白质的混入。
注意NH4离子阻碍DNAligase等酶活性。
使用LiCl
适合RNA precipitation。
注意Cl-离子阻碍reverse transcription。
使用NaCl
溶液中如有SDS,为了避免沉淀将需要用NaCl盐。
使用MgCl2
沉淀7-100bp的DNA时用。
没什么特别的就用CH3COONa吧。
至于你的收量问题我推荐你加长离心时间。4度离心一小时试试。
如果DNA的量很大,醋酸钠和氯化钠是不必要的.它们的作用就是增强沉淀,纯化极少量的DNA时,它们就起很大的作用了. 要使用什么样的盐沉淀,要看下一步做什么了.
其实沉淀用的乙醇都可以使用室温的, 分子克隆上就写到了, 我用的效果也的确如此. 很多抽提DNA,RNA的KIT的PROTOCOL上也是这么用的 但大家好象都习惯用预冷的了, 也没什么坏处. 阳离子的存在是为了中和DNA上磷酸基团的负电荷, 以便于其沉淀.
钠与水反应的现象:
1、钠浮在水面上
2、钠在水面上迅速游动,并有轻微的嘶嘶声
3、钠融成一个小球
4、反应后溶液中滴入酚酞,变红
5、生成的气体可点燃,有爆鸣声
拓展资料:
钠与乙醇反应的现象:
1、钠下沉(钠的密度比乙醇的大)
2、有气泡出现,但无爆鸣声(有气体产生,虽然该气体为氢气,但由于被乙醇隔绝,不与空气接触,不与氧气反应,故没有爆鸣声,1mol乙醇中的1mol-OH羟基上的氢参加了反应)
3、反应结束后,试管壁变热,但钠不熔化(反应放热,但热量没达到钠的熔点,反应慢,放热,羟基上的氢不如水活泼)
4、反应结束后往试管滴加酚酞,溶液变红(证明反应生成碱性物质(乙醇钠))2H3CH2OH+2Na==2H3CH2ONa+H2(气体)也叫取代反应(Na取代H)氧化反应(加氧去氢都叫氧化反应,生成H2)
乙醇 和 醋酸钠 不能发生反应
乙醇 和 醋酸 可以发生反应,但要在浓硫酸加热催化下进行:
酯化反应:
H3C-CO - OH + H - O-CH2-CH3 =(△、浓硫酸)=H3C-CO - O-CH2-CH3 + H2O
此反应为可逆反应,根据勒沙特列原理,如果改变某种条件,可逆反应就有向着减少这种影响的方向进行的趋势
(1)浓硫酸具有脱水性,可作为反应催化剂,
(2)浓硫酸具有吸水性,可促使反应不断地向右进行,生成更多的乙酸乙酯,
原理是浓硫酸与醋酸钠反应生成醋酸,醋酸再与乙醇发生酯化反应
CH3COONa + H2SO4 = NaHSO4 + CH3COOH(写生成Na2SO4也可)
CH3CH2OH + CH3COOH ==浓硫酸加热可逆== CH3CH2OOCCH3 + H2O