硫酸葡聚糖简介

需要看原始浓度是多少，商品给的是mol浓度，还是质量。如果是质量的话，直接将50g的硫酸葡聚糖加到100ml蒸馏水中溶解就可以了。

作用可以有效地提高脂蛋白酶的活力，促进酯酶游离到血液中，分解乳糜微粒，澄清血脂。

降低血清中总胆固醇含量，解除β-脂蛋白及纤维蛋白对血管壁的亲和力；可拮抗玻璃酸酶的作用，降低血管壁的正常代谢。

化学试剂废液算什么废物，液体还是固体怎么回收 ,属于危险废物。

虽然是液态的，但是属于固体废物。

只要交由有回收资质的单位处理就行，似乎不用非得本地的单位。

但是也要看当地的环保要求严不严格

Dxs网络意思硫酸葡聚糖；大学生电竞运动网。   

[例句]Compared with other types of tissue engineered blood vessel, the DXs have several advantages.

同其它类型的组织工程血管相比，脱细胞异种血管支架具备更多优点。

英语翻译技巧：

第一、省略翻译法

这与最开始提到的增译法相反，就是要求你把不符合汉语，或者英语的表达的方式、思维的习惯或者语言的习惯的部分删去，以免使所翻译出的句子沉杂累赘。

第二、合并法

合并翻译法就是把多个短句子或者简单句合并到一起，形成一个复合句或者说复杂句，多出现在汉译英的题目里出现，比如最后会翻译成定语从句、状语从句、宾语从句等等。

血脂包括多种指标，测定方法也因不同的指标而不同，最基本的包括总胆固醇、甘油三酯和血高密度胆固醇（HDL）

l、总胆固醇（TC）

酶法（COD-PAP法）

原理：血清中的胆固醇约1/3为游离胆固醇，2/3为与脂肪酸结合的胆固醇酯。胆固醇酯被胆固醇酯水解酶（CEH）水解成游离胆固醇，后者被胆固醇氧化酶（COD）氧化成胆甾烯酮并产生过氧化氢，再经过氧化物酶催化，使4-氨基安替比林与酚（三者合称PAP）反应，生成红色醌亚胺色素（Trinder反应）。醌亚胺的最大光吸收在500nm左右，吸光度与标本中TC含量成正比。

正己烷抽提L-B反应显色法

原理：用氢氧化钾乙醇液使血清蛋白变性，并使胆固醇酯水解为胆固醇。加水后用正己烷分溶抽提，可从碱性乙醇中定量地提取胆固醇（达99.7%）。提取的胆固醇溶液中除少量其它固醇（人血清中约含胆固醇的1%）以外，基本上不含干扰物。故测定结果与同位素稀释-气相色谱质谱法（决定性方法）接近。

2、甘油三酯

酶法（COD-PAP法）

原理：用脂蛋白酯酶（LPL）使血清中三酰甘油（TG）水溶解成甘油与脂肪酸，将生成的甘油用甘油激酶（GK）及三磷酸腺苷（ATP）磷酸化。以磷酸甘油氧化酶（GOP）氧化3-磷酸甘油（G-3-P），然后以过氧化物酶（POD），4-氨基安替比林（4-APP）与4-氯酚（三者合称PAP）反应显色，测定所生成的H2O2，故本法简称为CPO-PAP法。

变色酸显色法（CDC参考方法）

原理：用二氯甲烷提取血清TG，同时加入硅酸去除磷脂、游离甘油、甘油一酯、部分甘油二酯及蛋白。TG经氢氧化钾皂化生成甘油，酸化后以过碘酸氧化甘油产生甲醛，用亚砷酸还原过剩的过碘酸后，甲醛与变色酸在硫酸溶液中加热产生紫红色反应，然后比色测定。

3、血高密度胆固醇（HDL）

匀相测定法

基本原理有以下几类：PEG修饰酶法（PEG法）、选择性抑制法（SPD法）、抗体法（AB法）、过氧化氢酶法（CAT法）

超速离心结合选择性沉淀法

美国CDC采用本法测定参考血清的靶值，并用于评价常规方法的准确性，被认为是目前测定HDL-C最准确的方法。此法分三步：超速离心—选择性沉淀—HDL-C测定。

硫酸葡聚糖-Mg沉淀法

原理：以硫酸葡聚糖DS50(MW50000±5000)与镁离子沉淀血清中含apoB的脂蛋白[LDL,VLDL,Lp(a)]，测定上清液中的HDL-C。[2]

4、血低密度胆固醇（LDL）

匀相测定法

基本原理有以下几类：增溶法（Sol法）、表面活性剂法（SUR法）、保护法（PRO法）

β-定量法

本法为超离心结合选择性沉淀法。超离心、选择性沉淀二步骤与HDL-C参考方法相同，只是，Chol测定时除测定沉淀后上层的HDL-C外，还同时测定超离心后的下层液（含HDL和LDL）胆固醇。

PVS沉淀法

原理：血清中聚乙烯硫酸盐-聚乙二醇甲醚（PVS）选择性地沉淀LDL，离心后上层液中含HDL,VLDL和CM，用胆固醇测定酶试剂分别测定上层液和血清总胆固醇含量，二者之差即LDL-C含量。

Friedawald公式计算法

Friedawald原公式按旧单位mg/dl计算，假设血清中VLDL-C为血清TG量的1/5量计（以重量计）则：LDL-C=TC-HDL-C-TG/5。按法定计量单位mmol/L计算，则应为LDL-C= TC-HDL-C-TG/2.2。

核酸分子原位杂交中杂交液的基本成分：50%甲酰胺,ssDNA 100 μg/ml,探针20 ng,50 mmol/L DTT,5×Denhardt液,5%硫酸葡聚糖,4×SSC。

阳离子可以极大提高核酸互补链的杂交效率；

甲酰胺分子克隆第三版p510有详细的论述，用甲酰胺进行的杂交比通过调节温度更容易控制杂交的严谨性。

提高核酸杂交率 - 溶液中含10%的硫酸葡聚糖，DNA链的再退火率约增加10倍，这一现象进一步扩大了单链或双链的探针与固定在膜上的DNA/RNA的杂交率。不仅如此，添加10%硫酸葡聚糖也许会增加随机切割的双链DNA探针与固定化核酸的杂交率，高达100倍。

免疫球蛋白的使用已成功应用于研究、诊断、医学应用和生物技术的不同领域。卵黄免疫球蛋白（IgY）可以成功地与哺乳动物血液中产生的免疫球蛋白（IgG）相竞争。最近，日本在IgY技术产业化方面取得了巨大的进步。使用IgY已被证实可以提供一种更安全、更有效和更经济的方法来管理致病病原体。幽门螺杆菌，一种螺旋形革兰氏阴性微需氧病原体，它感染了全球超过一半的人口，被认为是胃炎、消化性溃疡的病原体，并与胃腺癌和黏膜相关淋巴组织淋巴瘤的发展有关。脲酶是幽门螺杆菌中含量最高的蛋白质，是胃粘膜生物定植的重要因素。通过口服抗微生物药根除油门螺杆菌并不总能成功，这可能与不良反应有关，因此，出现了多种治愈油门螺杆菌感染的方案，已被报道的有一种预防和减少幽门螺杆菌感染的新方法，该方法基于脲酶特异性免疫球蛋白的产生，该免疫球蛋白可以通过抗幽门螺杆菌的脲酶IgY来抑制细菌定植。使用IgY对抗幽门螺杆菌的致病因子将是抑制感染的慎重方案。

1.   介绍

幽门螺杆菌是一种存在于胃中的革兰氏阴性微需氧细菌。1982年澳大利亚科学家Barry Marshall和Robin Warren发现了幽门螺杆菌，他们发现慢性胃炎和胃溃疡患者中存在这种物质，而这些疾病以前不被认为是由微生物引起的。幽门螺杆菌也与十二指肠溃疡和胃癌的发展有关，但是超过80%的个人感染这个细菌是无症状的，据推测，它可能在自然的胃部生态中发挥着重要作用。

多大85%的幽门螺杆菌感染者从未出现任何症状或并发症，急性感染可能表现为伴有腹痛（胃痛）或恶心的急性胃炎。当着发展为慢性胃炎时，症状（如果存在）通常是非溃疡性消化不良的症状：胃痛、恶心、腹胀、嗳气，有时还会出现呕吐或黑便。

感染幽门螺杆菌的人体一生中患消化性溃疡的风险为10%-20%，患胃癌的风险为1%-2%。油门窦部的炎症更容易导致十二指肠溃疡，而胃体的炎症更容易导致胃溃疡和胃癌。

然而，关于接近生物体的最佳诊断和治疗方案仍然存在许多问题。几种非抗生素方法，包括益生菌、噬菌体和植物药物，已被证明可有效治疗或预防某些传染病。蛋黄是一种廉价的抗体来源，最近研究了蛋黄免疫球蛋白（IgY）在口服被动免疫中的治疗作用。免疫显性幽门螺杆菌蛋白对幽门螺杆菌特异性IgY具有反应性于2003年已被证实。2004年，据报道成功生产抗幽门螺杆菌蛋白脲酶特异性IgY。脲酶特异性IgY的口服给药抑制了幽门螺杆菌感染沙鼠的幽门罗杆菌疾病活动，并防止其在尚未感染的沙鼠中定植。17名经C13尿素呼气试验诊断为幽门螺杆菌阳性的无症状志愿者口服尿素酶特异性IgY四周，然后呼气试验值显著降低。在一名53岁女性中，脲酶特异性IgY与抗酸剂联合使用时，减轻了胃部炎症。本篇将聚焦于开发有效、安全和天然的抗幽门螺杆菌的新方案，可以在未来根除该生物体作为重要的人类病原体。

2.  流行病学

许多研究试图评估幽门螺杆菌感染的发生率和流行率、其传播方式以及导致感染发展的任何风险因，发达国家的3项成人研究报告的年发病率为0.3%-0.5%。患病率估计差异很大，这取决于研究组的位置和研究人群的特征。一般而言，患病率随着年龄的增长而增加，并且与童年时期的地社会经济呈正相关。全世界特别是发达国家，幽门螺杆菌的感染正在下降，在儿童时期发生的幽门螺杆菌感染，最常见的是通过粪口或口口途径。

一些研究还表明了肠胃道传播途径的作用。其他因素所起的作用，包括ABO血型、酒精和烟草使用、饮食和营养影响以及感染的遗传易感性，也已被研究，但结果并不一致。有趣的是，最近的一个对来自罗马一家教学医院的655名受试者的研究发现，总体感染率为40%，护士和辅助人员的感染率高于医生。

3.  致病性和毒力因子

对该生物的最早描述将其主要分为细胞外的、革兰氏阴性的、有鞭毛的和能动的（图1）。随着生物技术的进步，有关幽门螺杆菌致病性和毒力因子的新信息不断涌现，表明幽门螺杆菌感染需要细菌和宿主因子之间复杂的相互作用。

研究人员已经确定了幽门螺杆菌在胃粘膜定植所必须的几种细菌蛋白质，包括将生物体运输到黏膜表面时具有活性的蛋白质（例如，鞭毛蛋白，由基因flaA和flaB编码）。

一旦进入胃粘膜，细菌就会通过未知机制诱导短暂的胃酸过少。细菌产生脲酶改变生物体的微环境以促进定植，然后通过细胞表面糖脂和幽门螺杆菌特异性粘附素之间的相互作用发生粘附。

由幽门螺杆菌产生并抑制竞争性生物体生长的称为天蚕素的蛋白质似乎也发挥了作用，以及有助于防止微环境过度碱化的P型三磷酸腺苷酶尿素酶。一旦附着在胃粘膜上，幽门螺杆菌就会通过一些列复杂的事件引起组织损伤，这取决于生物体和宿主。与所有革兰氏阴性细菌一样，幽门螺杆菌的细胞壁中含有脂多糖，可破坏粘膜完整性。此外，该生物体会释放几种诱导细胞损伤的致病蛋白。例如，由细胞毒性相关基因A（CagA）产生的CagA蛋白是一种高危疫原性蛋白，可能与更严重的临床综合征有关，如十二指肠溃疡和胃腺癌（尽管这个问题远未解决）。越来越多的证据表明CagA阳性与远端而非近端胃腺癌的风险增加有关。此外，已知空泡细胞毒素A基因（VacA）与上皮接触诱导的A基因（IceA）的蛋白质产物与粘膜损伤有关。

一旦发生胃黏膜定植，幽门螺杆菌的免疫原性会诱发中性粒细胞性胃炎的炎症反应，最终导致感染的临床表现（图2）。该过程由宿主因子介导，包括白介素1、2、6、8和12、干扰素γ、肿瘤坏死因子-a、T和B淋巴细胞、吞噬细胞，这些因素通过释放活性氧和炎性细胞因子介导损伤。此外，幽门螺杆菌似乎会增加粘膜程序性细胞死亡（也称细胞凋亡）的速度。

4.  一般治疗原则

确定幽门螺杆菌感染的最佳治疗方法很困难，因为该生物生活在许多药物不易接触的环境中，而且新出现的细菌耐药性提出了额外的挑战。此外，许多推荐的方案对患者来说难以接受，导致依从性问题；具体而言，必须每天至少服用两次大量药丸并应对令人不快的不良反应，这很难获得患者的合作。尽管存在这些障碍，目前的治疗方案在大多数患者人群中可以获得超过85%的治愈率。

基于抗生素的疗法，尤其是基于质子泵抑制剂的三联疗法，一直是过去20年的主要疗法。抗生素耐药性是一个众所周知的问题，据报道某些地区的甲硝唑耐药率高达60%-70%。克拉霉素最初非常有效，但随着克拉霉素的使用在过去十年变得越来越流行，它的耐药性也日益严重。即使采用最新的基于左氧氟沙星的方案，耐药病例的平均根除率也仅有80%。为了防止抗生素耐药性的出现，人们提倡对传染病的治疗进行范式转变。几种非抗生素方法，包括益生菌、噬菌体和植物药物，已被证明可有效治疗或预防某些传染病。管理幽门螺杆菌的替代方法也是必要的。

5.  使用免疫球蛋白根除幽门螺杆菌的新趋势

5.1. 蛋黄免疫球单边

蛋黄免疫球蛋白（IgY）是鸡蛋中的主要抗体。1893年，Klemperer通过证明对破伤风毒素的免疫力从母鸡转移到小鸡，首次描述了鸟类获得被动免疫的情况。三种免疫球蛋白类类似于哺乳动物免疫球蛋白类，IgA、IgM和IgG已被证明存在于鸡中。在鸡蛋中，IgA和IgM 存在于蛋清中，而 IgG存在于蛋黄中。蛋黄中的免疫球蛋白G（IgG）被称为 IgY，以区别于其哺乳动物对应物。

在卵母细胞成熟过程中，蛋黄中IgY的浓度基本恒定（10-20毫克/毫升）。大约100-400毫克IgY被包装在一个鸡蛋中。蛋黄中IgY的浓度是血清浓度是1.23倍。在母鸡血清中首次出现了特异性IgG后，观察到卵黄中特异性IgY的出现延迟了3至4天。

5.2. 禽类IgY与哺乳动物IgG的结构和特征

IgY分子的一般结构与哺乳动物IgG相同，具有2条分子量为67-70kDa的重链和两条分子量为25kDa的轻链。主要区别在于H链中恒定区（C）的数量，IgG有3个C区（Cy1-Cy3），而IgY有4个C区（Cv1-Cv4）。由于一个额外的C区与两条相应的碳水化合物链的出现，IgY的分子量（180kDa）大于哺乳动物IgG（150kDa）。由于Cy1和Cy2之间没有铰链，IgY不如哺乳动物IgG灵活。IgY中的一些区域（靠近Cv1-Cv2和Cv2-Cv3的边界）含有脯氨酸和甘氨酸残基，仅具有有限的灵活性。IgY的等电点为5.7-7.6，比IgG更疏水。

大多数生物效应子的免疫球蛋白功能是由Fc区激活的，Fc区是IgG 和IgY 之间的主要结构差异所在。

大多数生物效应子的免疫球蛋白功能是由Fc区激活的，Fc区是IgG和IgY之间的主要结构差异所在。因此，IgY的Fc依赖性功能与哺乳动物IgG的功能有本质上的不同。 首先，IgY 不激活哺乳动物补体系统，其次，IgY不与蛋白A和G结合，第三，IgY不被哺乳动物抗体识别，即类风湿因子（RF，一种与IgG的Fc部分反应的自身抗体）或HAMA（人抗鼠抗体），第四，它不与细胞表面Fc受体结合。这些分子间相互作用的差异给IgY抗体的应用带来了很大的优势。然后，IgY 已成功应用于研究、诊断和医学领域不同领域的各种方法。对于这些应用，IgY可以成功地与从哺乳动物血液中分离的抗体（IgG）竞争。

使用免疫母鸡的优点是其可以产大量的蛋，每年可以从一只母鸡的鸡蛋中收集大约40g的IgY，而从一只兔子的血液中收集的IgY为1.3g。由于大量养鸡场的可用性以及鸡蛋破碎和加工的自动化，IgY的工业规模化生产是可能的。

5.3.  IgY的应用

这些发现为抗HP脲酶IgY在食品工业中预防幽门螺杆菌的应用打开了新的大门。最近，一种特别设计的含有抗HP脲酶IgY的鸡蛋在日本生产了出来，这种鸡蛋在日本市场上以“胃友好鸡蛋”的商品名出售。此外最近抗HP脲酶IgY被纳入在日本、中东和欧盟市场推出的营养制剂配方，旨在预防和减少幽门螺杆菌的感染。

基于这些事实，IgY 已被用于抑制食源性病原体的生长和繁殖。 它是由先前用特定抗原免疫过的母鸡的鸡蛋制成的。与使用传统哺乳动物抗体治疗致病病原体的方法相比，这些 IgY 治疗已被证明提供了一种更安全、更有效和更便宜的方法。

最近，日本在IgY的产业化方面取得了成功，将IgY作为生物活性成分应用于食品、保健品、化妆品等领域。

5.4. 抗幽门螺杆菌IgY

在日本，研究人员开发了两种 IgY，一种抗脲酶IgY和一种抗VacA IgY，希望能控制幽门螺杆菌问题。

5.5. 抗幽门螺杆菌脲酶IgY

为了使幽门螺杆菌在胃粘膜中定植，它会大量产生脲酶，将尿素降解为氨。该生物体使用产生的氨来中和胃粘膜中的微环境。因此，抗幽门螺杆菌脲酶IgY已被开发为治疗幽门螺杆菌感染的新方案，据报道，口服抗幽门螺杆菌脲酶IgY可以抑制细菌定植。今天，消费者更新喜欢能促进身体健康并能降低疾病风险的食物，乳制品是生产一系列复合当前消费者对功能性食品需求的产品的绝佳媒介。

越来越多的科学和临床证据证实了消费者对酸奶健康的看法，设计一种添加了可以提供被动免疫的抗幽门螺杆菌脲酶IgY，通过自然和特异性的尝试来减少幽门螺杆感染。已经进行了三项临床研究用来检验专门设计的含有抗幽门螺杆菌脲酶IgY的功能性酸奶的功效，以抑制人类中的幽门螺杆菌。含有抗幽门螺杆菌脲酶IgY的酸奶已经制备并在日本、韩国和台湾上市。

一项临床研究已被实施，以确定抗幽门螺杆菌脲酶IgY酸奶对减少人类幽门螺杆菌的影响。为了评估为重幽门螺杆菌的存在，已广泛使用UBT方法，该方法基于对幽门螺杆菌脲酶活性产生的C13标记二氧化碳的侵入性检测。

使用C13尿素呼吸实验（UBT）筛选了174名志愿者，选择并招募了重度感染的志愿者（UBT值超过30/1000,，16名受试者）。每位志愿者每天两次饮用1杯酸奶（4g/天的蛋黄，含有40mg抗幽门螺杆菌脲酶IgY），持续12周。志愿者在4、8和12周后接受了测试，在第8周和第12周获得的UBT值与在第0周获得的值显著不同（P<0.001），显示在第8周和第12周后UBT值分别降低了55.1%和57.2%（图4）。

在其他临床研究上，使用含抗幽门螺杆菌脲酶的饮用酸奶，在台湾和韩国进行的研究显示出几乎相同的结果。

这三项不同的研究表明，使用专门设计的含有来自蛋黄的高度特异性抗体的酸奶对幽门螺杆菌具有显著效果，因为它能够抑制幽门螺杆菌粘附在人体胃粘膜上。在三项临床研究的研究期间，摄入方案的耐受性良好，未观察到任何不良反应或任何并发症。

此外，由于抗幽门螺杆菌脲酶IgY仅结合脲酶，观察到的功能功效可能是通过捕获胃粘液层内的细菌相关脲酶，从而通过肠道的持续洗涤作用导致细菌聚集和清除。通过这样的机制，消耗抗幽门螺杆菌脲酶IgY酸奶可能在抑制和预防人类幽门螺杆菌方面发挥双重作用（图5）。

这些发现为抗幽门螺杆菌脲酶IgY在食品工业中用来预防幽门螺杆菌的应用打开了新的大门。最近，日本产生了一种特别设计的含有抗幽门螺杆菌脲酶IgY的鸡蛋。这种鸡蛋在日本市场上以“胃友好鸡蛋”的商品名出售，此外，最近在日本、中东和欧盟市场推出的营养食品配方中加入了抗幽门螺杆菌脲酶IgY，旨在预防和减少幽门螺杆菌感染。

另一方面，Siriya等人更关注经济观点。他们应用了一项研究，旨在建立一种从蛋鸡的鸡蛋中生产抗HP脲酶IgY的有效程序。在硫酸葡聚糖、异丙醇和水溶性部分（WSF）的三种提取方法中，WSF法是回收和纯化总蛋白质的最佳方法。此外，通过硫酸铵沉淀可以获得高纯度的IgY，他们可以找到一些简单且廉价的方法，结合WSF方法、硫酸钠沉淀和亲和色谱法，获得90%纯度的抗幽门螺杆菌IgY，通过这种方法生产的高纯度化的IgY不仅可以用于营养品，还可用于诊断用途。

5.6.  抗幽门螺杆菌Vaca IgY

幽门螺杆菌分泌许多蛋白质因子，这些因子对于初始定植和随后在宿主胃中的持续存在很重要。幽门螺杆菌分泌的主要蛋白质毒素之一是 VacA。它是幽门螺杆菌产生的最重要的毒力因子之一，尽管其作用和作用机制均未完全了解。VacA最初被认为是一种仅诱导细胞空泡形成的毒素，它通过靶向线粒体引起胃上皮细胞凋亡。关于VacA作用的一个激烈争论的问题是它与氨的关系，氨是由幽门螺杆菌尿素酶在体内产生的。

通过V型自转分泌系统从细菌分泌VacA后，88kDa VacA毒素与宿主细胞结合并被内化，导致严重的“空泡化”，其特征是具有晚期内体和早期溶酶体特征的大囊泡积聚，“液泡”的发展归因于VacA阴离子选择性通道的形成。

据报道，缺乏受体样蛋白酪氨酸磷酸酶（RPTP，VacA受体之一）的小鼠对VacA诱导的胃溃疡具有抵抗力。这表明VacA在幽门螺杆菌引起的胃病中具有重要作用。

在日本的一项研究中，研究人员开发了针对VacA的IgY，希望能控制幽门螺杆菌。研究小组报告说，抗VacA IgY降低了VacA活性、细胞空泡化（图6）和细胞凋亡（细胞死亡），从而显著提高了他们的活力。此外，来自与VacA孵育的细胞的炎性细胞因子被抗VacA IgY抑制。由于对感染幽门螺杆菌的沙鼠施用抗VacA IgY，胃的炎症得到改善。最近，在韩国，一种含有抗VacA IgY的商业酸奶上市，目的是抑制胃中由幽门螺杆菌引起的炎症。

制备了抗HP重组VacA特异性IgY，并在特异性IgY中加入适当比例的硫糖铝，以增加其对酸和胃蛋白酶的耐受性。此外，利用硫糖铝与胃粘膜表面粘液的粘附性，充分发挥特异性IgY对幽门螺杆菌感染的保护作用。通过比较硫糖铝和碳水化合物之间的稳定性，在体外和胃内评估了硫糖铝对特定 IgY 的保护作用。结果表明，硫糖铝和许多碳水化合物都可以增加酸性环境中IgY的稳定性，硫糖铝对IgY的保护作用明显优于碳水化合物，也优于脂质体包装的IgY和壳聚糖-海藻酸盐微胶囊包装的IgY。30%～50%硫糖铝在pH 2、含0.02mg/ml胃蛋白酶的模拟胃液环境中可有效保护IgY活性，提高抗冻融能力。体内实验表明0.5mg IgY加30%硫糖铝/天可有效预防幽门螺杆菌感染引起的胃黏膜损伤，效果比无硫糖铝组提高8倍。

6.  未来的研究方向

该综述表明IgY可以有效抑制幽门螺杆菌感染和炎症。因此，IgY将是替代或帮助抑制和/或预防幽门螺杆菌的重要天然食品成分。

对于上述所有情况，IgY可能是克服抗生素耐受性的良好候选者，用于治疗幽门螺杆菌介导的胃溃疡和其他病原体。

此外，还需要进一步研究以找到更简单、更便宜的IgY制备方法，并获得更纯化的成分。

翻译自：Adham M. Abdou, Manal M.E. Ahmed,Yusuke Yamashita, Mujo Kim, Immunoglobulin: A Natural Way to Suppress Helicobacterpylori in Humans

IgY的性质与哺乳动物的IgG相似。正常鸡IgY的分子量约为180KDa，由两条轻链(2L)和两条重链(2H)组成，分子量分别为60-70KDa和22-30KDa。其等电点约为5.2。

IgY与一般哺乳动物IgG相比，IgY具有较强的耐热、耐酸、抗离子强度和一定的抗酶降解能力。

在低于75℃条件下，IgY具有良好的热稳定性。IgY制剂在4℃贮存5年或在室温贮存6个月其活性仍无明显变化或下降，65℃时可保持24h以上，70℃时加热90min后其活性才明显下降60℃，30min条件下巴氏消毒不影响IgY；高于80℃，大部分IgY失去活性。

IgY在pH4.0-11.0时比较稳定，pH3.0-3.5时活性迅速下降，pH12时活性亦有所下降。

IgY对胃蛋白酶有较高的抵抗力，但对胰蛋白酶十分敏感。将胃蛋白酶和IgY在pH2.0温育1h后，几乎所有活性丧失，但在pH4.0时1h后可保持91%的活性，甚至温育10h后仍有63%活性。IgY分别与胰蛋白酶和胰凝乳酶温育8h，活性分别保持39%和41%。 卵黄中的主要成分是蛋白质和脂肪，其比例为1：2。大部分蛋白质都是脂蛋白，存在于卵黄颗粒中，不溶于水，只有卵黄球蛋白(α、β、γ)是水溶性的，而IgY是γ卵黄球蛋白。因此IgY的分离纯化首先需要有效地去除卵黄中的脂类，从水溶性蛋白中分离IgY。

多年来，已建立了许多较为高效而经济的方法，这些方法大多以PEG、硫酸葡聚糖、天然胶，如藻酸钠、角叉聚糖或乙醇沉淀等方法初步纯化蛋白质。

1980年，Polson首先提出聚乙二醇(PEG)两步沉淀法，分别用终浓度为3.5%和12%的PEG分步沉淀，用硫酸铵盐析法去除PEG。1985年，在此基础上提出了冷乙醇沉淀的改进方法，使产量提高，而且能有效地去除残留PEG。1981年Jensensius等提出了硫酸葡聚糖沉淀法(DS法)，PEG法和DS法的产量相当，但提取的IgY制品含有一定量的杂蛋白。Bade和Stegemann(1984)用预冷的丙烷和丙酮(-20℃)沉淀蛋白质并去除脂质，经DEAE柱层析进一步纯化，其IgY抗体活性与用Polson法提纯的IgY之间无明显差别，且稳定性好，经3次以上冻融，抗体活性未见改变。1992年Akita等用水稀释法(WD)提纯IgY，每个卵黄可获得100mg以上的IgY。此后，Akita等比较了WD法、PEG法、DS法和黄原胶法(Xanthan法)的提纯效果，结果表明：WD法产量最高，其次为DS法，WD法更适合大规模生产。

1993年，Horikoshi提出了冷乙醇分级离心的方法，分别用60%、30%、25%的冷乙醇沉淀离心，得到纯度达99%以上的IgY。此法适用于大规模制备IgY。

工业上大规模生产IgY的方法有：超临界二氧化碳气体抽提法、卡拉胶法、硫酸铵盐析法。

微生物来源活性多糖的研究进展

【关键词】 多糖；,,,微生物；,,,药用；,,,生物合成

摘要： 活性多糖是新药研发中的一个热点，其中研究相对较多的是来源于微生物的多糖。近年来，关于微生物多糖的研究有了进一步的发展，本文对药用微生物多糖在生物合成、作用机制和构效关系等各方面的最新研究进展进行了综述。

关键词： 多糖； 微生物； 药用； 生物合成

Advances in the research of active polysaccharides derived from microbes

ABSTRACT Over the past few years, many advances have been made toward research on active polysaccharides especially microbial polysaccharides, it becomes a hot spot in new drug research and development. This review will focus on recent studies that illustrate the biological activities, mechanisms of action and structurefunction relationships of microbial polysaccharides for drug use.

KEY WORDS Polysaccharide Microorganism Drug use Biological activities

多糖广泛分布于高等植物、地衣、海藻、动物和微生物中。微生物来源的多糖是至今研究得比较详细的一类多糖，其广泛的生物活性使得其已成为微生物药物一个重要的组成部分，且在新药研发中越来越受到重视。本文对迄今为止所发现的微生物多糖的药用生物活性进行了综述，并总结了近年来关于多糖构效关系和作用机理方面的研究成果。

1 免疫调节功能

免疫调节剂在疾病治疗中的作用越来越受到重视。多糖免疫调节剂于40余年前被首次发现，近二十年来，有更多微生物来源的多糖被确认对机体免疫反应的调节有着极为重要的意义。这些多糖的免疫调节作用涉及到免疫系统的各个方面，对于其免疫调节机制的研究也体现在各个层次上，对这些多糖分子决定它们与宿主免疫系统相互作用的结构特征也已经进行了更为深入的研究。以下对几种比较典型的免疫调节剂分别进行介绍。

1.1 两性离子多糖 两性离子多糖(zwitterionic polysaccharides,Zps)是有同时含有阳离子和阴离子结构以实现其生物功能的一类多糖。多糖A(PS A)是Zps的分类原型。PS A是从革兰阴性厌氧菌脆弱拟杆菌中分离得到的两种荚膜多糖中的一种。Zps在菌体表面组装成荚膜多糖复合物(CPC)。早期研究证明，CPC能调节腹腔内脓毒症伴随性脓肿的形成〔1〕。CPC的腹膜内给药能诱导脓肿形成，而皮下和肌肉的预防性给药则能防止宿主在细菌感染后形成脓肿。一方面，在诱导脓肿形成过程中，Zps扮演了多重角色，它能诱导细菌在腹腔间皮表面的粘附，并能刺激某些促免疫细胞因子和化学增活素，进而诱导宿主细胞CAMs的表达，完成腹腔内多形核白细胞的募集。另一方面，Zps预防脓肿形成、保护机体免于免疫反应的作用，并非是作为一种经典的免疫原去介导特异性的免疫反应，而是对宿主的免疫系统进行调节，从而对导致脓肿形成的免疫反应实现全面抑制。其具体机制是Zps对CD4+T细胞活性和IL2生成的调节〔2〕，而IL2似乎是Zps调节机体免疫以预防脓肿的中心环节〔3〕。对于其构效关系的研究表明，Zps同时含有阴阳电荷基团的重复单元是其免疫调节作用的关键性结构，破坏多糖的电荷结构能使其活性显著降低〔4〕。

1.2 β(13)葡聚糖从酵母和真菌中纯化得到的β(13)葡聚糖是另一类免疫调节剂。沿着β(13)葡聚糖主链随机分布着β(16)葡聚糖基支链。Williams等证明β(13)葡聚糖能显著增加动物体内嗜中性粒细胞水平并增加骨髓细胞的增殖。PGG是Williams研究组经高度纯化已获专利的一种β(13)葡聚糖。PGG给药后，嗜中性和嗜酸性粒细胞的比例增加，从给药小鼠体内得到的嗜中性粒细胞，在体外对大肠埃希菌的吞噬作用增加〔5〕；巨噬细胞的形态发生改变，巨噬细胞同时表现出磷酸酶活性增加和脂多糖(LPS)刺激的NO生成的特征〔6〕。研究表明，β(13)葡聚糖能调节淋巴细胞和单核细胞中促免疫细胞因子的产生〔7〕。β(13)葡聚糖对NFκB样和NFIL6样转录因子的调节作用具有时间和浓度依赖性〔8〕。其所涉及的信号转导通路与超抗原LPS不同。PGG用于预防治疗也获得了肯定的实验结果。能显著降低腹腔内脓毒症的致死率。Williams在脓毒症小鼠模型试验中研究了β(13)葡聚糖对转录激活、细胞因子表达的影响，发现与对照动物相比，NFκB和NFIL6的核结合活性降低，TNFα和IL6的mRNA水平也有所下降。转录因子活性和细胞因子表达的下调和败血症动物的存活率升高是正相关〔10〕。β(13)葡聚糖的免疫调节生物活性基于它们与巨噬细胞和多形核中性粒细胞(PMNs)的直接作用。Muller等的工作表明，磷酸葡聚糖，一种水溶性的(13)βD葡聚糖，能够与人或鼠的单核/巨噬细胞结合。这种结合特异地导致了外来细菌的内在化和增加的胞浆空泡化〔11〕。β(13)葡聚糖的免疫调节还涉及到补体途径。补体受体3(CR3)也已经被确认是某些葡聚糖的受体〔12〕。CR3介导的吞噬作用和脱颗粒作用需要CR3结构域上一个iC3b结合位点和一个葡聚糖结合位点同时与配基的结合。用抗PGG葡聚糖受体的单克隆抗体对中性白细胞处理，可以抑制NFκB样因子的激活〔13〕。将酵母菌株煮沸和酶处理得到可溶和不可溶的葡聚糖粗品。不可溶的葡聚糖可通过磷酸化、硫酸化和氨基化等方式进行衍生化修饰以提高其溶解性。可溶性葡聚糖在水溶液中主要以线形的三螺旋结构存在。研究表明，糖链的螺旋结构构象是其生物活性存在的必要条件，而糖链中的亲水性基团(多羟基)应位于螺旋体的表面〔14〕。微粒酵母葡聚糖的免疫调节活性还受其分子量和β(16)糖苷键数目的影响。同样的情况也发生在其他的一些β(13)D葡聚糖上，如真菌多糖pestalotan等。另外，支链长度也会影响多糖的活性。从真菌Phytophthoraparasitica中分离得到的活性β(13)D葡聚糖，其具有葡聚三糖支链的组份，活性大大高于具有葡聚二糖支链的组分〔16〕。

1.3 甘露聚糖从白念珠菌中分离得到了有一定免疫调节活性的甘露聚糖。巨噬细胞递呈的甘露糖结合凝集素(MBL)能与甘露聚糖结合，并通过一种非自身识别机制激活宿主免疫系统。甘露聚糖包裹感染性抗原并介导了内吞和吞噬作用，甘露聚糖受体识别多糖里的一个重复单位，这种识别导致了细胞信号转导、细胞因子产生和补体的激活。研究表明，白念珠菌甘露聚糖在皮下注射给药后对宿主的免疫抑制作用与用药后迟发型超敏反应被抑制有关〔17〕。IL4是介导甘露聚糖特异性诱导免疫下调的关键性细胞因子。另外也有研究表明，IL12p40、IL10和IFNγ对CD+T细胞(下调效应细胞)的产生也有一定作用〔18〕。

1.4 蛋白结合多糖从真菌蘑菇中分离得到了蛋白结合多糖PSK和PSP。这些化合物在结构上比较相近，分子量约为100kDa〔19〕。其单糖间以α(14)和β(13)糖苷键连接，蛋白部分则以天门冬氨酸和谷氨酸为主，蛋白含量约为15%。这类多糖能够抑制体外肿瘤细胞系的生长并具有体内的抗肿瘤活性。对食道癌、胃癌、肺癌、卵巢癌和子宫颈癌等有肯定的防治效果。这类多糖的免疫调节作用机制尚不清楚。有研究表明，小鼠在PSK给药处理后，PSK能结合并抑制免疫抑制细胞因子TGFβ〔20〕。PSK还能够激活嗜中性粒细胞，这些可能是PSK抗癌活性的部分原因。PSK和PSP是生物反应调节剂，能刺激T细胞的激活和诱导IFNγ和IL2的生成。也有研究发现PSK和PSP能增强小鼠体内的超氧化物歧化酶(SOD)的活性〔21〕。

1.5 透明质酸透明质酸(HA)可以由链球菌产生，同时也是组成哺乳动物组织胞外基质的一种主要的糖类成分，在皮肤、关节、眼和大多数其它的器官和组织中都有存在。透明质酸是一个二糖的重复。该二糖是一种最简单的阴离子氨基葡聚糖。透明质酸是通过与真核细胞CD44受体的结合来完成对免疫系统的调节作用。这种配体受体间的相互作用对于T细胞胞间通信和白细胞外渗的调节是至关重要的〔22〕。低分子量HA则可被用于阻断T淋巴细胞CD44和真核细胞来源HA之间的相互作用。这在临床上可被用于防止同种异体移植的排斥反应以保护机体器官的功能。另外，HA能促使创伤愈合，并能在眼睛和关节外科中被用作人体HA的替代品〔9〕。

2 抗肿瘤活性微生物

多糖的抗肿瘤活性多与其免疫调节功能密切相关。多糖能激活免疫细胞，并诱导多种免疫细胞因子和细胞因子受体基因的表达，增强机体的抗肿瘤免疫力。从担子菌门真菌中得到的香菇多糖、裂褶多糖、云芝多糖、茯苓多糖等抗肿瘤多糖，在国内外临床上已普遍应用，都具有上述免疫调节剂的特征结构。从香菇子实体和深层发酵菌丝体中得到的两种具抗肿瘤活性的多糖分别为β(13)葡聚糖和含少量肽的α甘露糖。云芝多糖PSK则具有蛋白结合多糖结构。裂褶多糖和茯苓多糖也是β(13)葡聚糖，但当茯苓多糖含有β(16)葡聚糖侧链时没有活性，而用高碘酸盐氧化反应将侧链除去后，却表现出显著的抗肿瘤活性。免疫调节多糖的抗肿瘤作用需要宿主免疫系统的参与，但有些微生物多糖在体外也表现出对肿瘤细胞生长的抑制作用。除了免疫调节外，近年来对多糖抗肿瘤活性的其它作用机制也有所研究。主要有以下几个方面〔23〕：(1)影响细胞的生化代谢：茯苓多糖对肉瘤S180细胞的增殖有抑制作用，可导致S180细胞膜唾液酸(SA)含量增加，而膜磷脂、花生四烯酸和豆蔻酸的含量下降，细胞膜的PI转换被显著抑制，影响了肿瘤细胞转移和相关抗原的表达。香菇、猪苓、茯苓多糖能抑制人早幼粒细胞白血病HL60细胞酪氨酸蛋白激酶(TPK)的活性，激活磷酸酪氨酸蛋白磷酸酶(PTPP)，可降低细胞酪氨酸蛋白的磷酸化程度；(2)影响细胞周期：某些多糖可能作用于肿瘤细胞的细胞周期。Kamei等将云芝多糖与结肠癌细胞AGS一起培养4d后，肿瘤细胞的数量比对照组明显减少，流式细胞术检测表明，肿瘤细胞的生长被阻滞于S期和G2/M期〔15〕。(3)抗氧化作用：机体内过量的超氧化自由基和脂质过氧化物(LPO)对DNA的持续损伤，会导致细胞的癌变。动物和临床试验表明云芝多糖PSK能增强超氧化物歧化酶(SOD)的活性，缓解肿瘤宿主体内的氧化应激状态。Kariya等在联氨氧化反应体系中观察到云芝多糖有自由基清除剂作用，并通过电子自旋共振检测，证明其有拟SOD的作用。又有报道云芝多糖能增强正常小鼠和正常迟发型超敏感性(DH)小鼠淋巴细胞、脾及胸腺中SOD的活力，而对肿瘤组织中SOD则有明显的抑制作用。(4)其它：香菇、云芝和灵芝等多糖均能抑制鼠肝细胞对致癌物苯并芘的吸收。香菇多糖能使肿瘤部位的血管扩张和出血，造成肿瘤组织坏死。有些微生物来源的多糖与肿瘤细胞表面的糖类分子很相似，能抑制肿瘤细胞的粘附，从而抑制了肿瘤细胞的侵袭与转移〔24〕。

3 抗病毒活性

多糖的抗病毒作用已引起医药界的高度重视。尤其在抗HIV方面，硫酸酯化多糖因为其活性明确，已成为近年来的研究热点〔26〕。研究表明，其作用机制除了多糖的免疫激活作用外，该类聚合物可以通过阻断HIV病毒gp120与宿主细胞CD4受体的结合而发挥作用，这可以阻断病毒对宿主细胞的吸附，防止合细胞的形成〔25〕。某些硫酸多糖还能够抑制HIV逆转录酶活性，硫酸化侧链与RNA模板引物上的某些酶有相同的结合位点，从而产生竞争性抑制作用。最近的研究又发现，硫酸多糖与HIV1反式激活因子tat的结合能阻止tat蛋白进入胞内，使HIVLTR的转录激活受到抑制，从而抑制了HIV1的复制和整合。硫酸多糖的抗病毒活性首先源于其聚阴离子特性，因此硫酸基团是该类多糖活性的必要条件。分子中硫酸基团的含量越高，其抗HIV的作用越强。但硫酸根过多会产生抗凝血等不良反应〔27〕。硫酸基团分布的空间构象对抗病毒活性也有影响，如Tat蛋白与肝素的结合要求至少有2O、6O和N位置的硫酸化〔28〕。糖链柔性的降低能升高硫酸多糖的抗病毒活性。分子大小是多糖抗病毒活性的另一个影响因素。硫酸葡聚糖抗HIV的活性随着相对分子质量的增加而增加，相对分子质量在1×104～5×105的范围内能保持最大活性。除了抗HIV外,多糖对其他类型病毒也有抑制作用，如单纯疱疹病毒(Herpes simplex virus，HSV1，HSV2)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus，CMV)、流感病毒(Influenza virus)、囊状胃炎病毒(Vesicular stomatitis virus，VSV)等〔29〕。香菇多糖具有抗肿瘤作用，硫酸酯化后则具有显著的抗艾滋病作用，在浓度为100mg/L时能完全抑制RT活性，10～100mg/L时能抑制合体细胞的形成，10mg/L时能强烈抑制HIV抗原的合成，并能保护被HIV感染的MT4细胞。但硫酸酯化后的多糖却失去了原有的抗肿瘤活性。由此推测硫酸酯化多糖和非硫酸化多糖的免疫调节作用机制是不同的。通过13CNMR、苯胺蓝荧光法及粘度法测定证明，硫酸基团的引入造成多糖理化性质及其空间立体构象的变化，而这正是多糖活性的决定因素。

4 其它活性

多糖的免疫调节功能使其在临床上具有抗感染和抗炎活性。免疫调节剂的使用相对于常规药物治疗具有其独特的优点。对宿主免疫系统的先天抗感染能力的增强可能会有效地解决抗生素耐药的问题。吴倩等应用重组sIL1 RⅠ为靶点建立抑制剂筛选模型，从链霉菌的代谢产物中得到IL1的拮抗剂139A，动物模型的研究表明它们具有抗类风湿性关节炎的作用〔30〕。对139A生物合成中引导糖基转移酶基因的克隆和鉴定工作也已经完成〔31〕。对中药植物多糖降血糖活性的研究较为普遍，近年来，从微生物中也发现了一些有明显降血糖作用的多糖。从Cordyccps sinensis中提取得到的多糖CSF10能增强葡萄糖激酶活性，加速葡萄糖的代谢；并可以降低GLUT2蛋白水平从而抑制肝脏葡萄糖的输出，最终达到降低血糖的目的〔32〕。另外，发现某些微生物来源多糖(如银耳多糖)和一些多糖的硫酸化衍生物，具有肝素样抗凝血作用，其抗凝活性与多糖分子量和硫酸化程度相关；木耳多糖、银耳多糖等对血栓的形成有抑制作用，这可能与它们降低血栓纤维蛋白原含量，降低血小板数目及其粘附力的能力有关；香菇多糖可促进胆固醇代谢而降低血清胆固醇含量，从而达到降血脂的目的；灵芝多糖能抑制人嗜中性粒细胞自发和Fas介导的细胞凋亡，这与抗衰老活性相关；灵芝中的一种小分子多糖能增加蛋白和核酸的合成；而某些微生物多糖对RNase有抑制作用，可减少RNA降解，对RNA治疗可起到协同作用。5 结语

多糖类药物具有多效性、低毒性、来源广泛、天然绿色等优点，多糖与现有药物的联合用药可以提高药物的作用范围和效力，减少用药量，并可防止或推迟耐药的出现。但由于多糖结构太复杂，所以不易控制其质量标准，结构测定及合成难度较大；缺乏明确的作用机制研究；而有些多糖在天然产物中含量很低且不易分离得到。这使它们在临床上的应用受到限制。近年来，随着结构分析技术的进步和作用机制研究的不断积累和深入，人们对多糖如何作用于细胞因子网络、协调生物学功能的结构特征有了更多的了解，发现了一些多糖的特异受体，为新活性化合物的开发提供了基础。对于多糖构效关系的认识也更为丰富，为提高活性而进行的结构改造工作也有很大进展。多糖的结构研究是多糖研究中亟待解决的薄弱环节。在确保多糖纯度的前提下，现有二维核磁技术的结合(如：COSY谱、NOESY谱、HOHAHA谱、TOCSY谱等)使我们有可能推导出部分多糖完整的一级结构〔33〕。而质谱由于其高度的灵敏性，在多糖尤其是极少量多糖的结构分析中，也发挥了越来越重要的作用，FABMS和液质联用技术已越来越广泛地用于多糖的结构分析中。多糖的高级结构分析也有所发展，但还无法做到像核酸和蛋白质结构测定那样自动化、微量化和标准化。关于药用微生物多糖生物合成的研究也逐渐开展起来。对这些微生物菌株进行的多糖合成基因分析发现有共同的操作子结构，暗示了这些多糖的生物合成拥有相同的分子机制。对于多糖合成基因簇及其生物合成途径更深入的了解，能为进一步的组合生物学研究，以及最终获得新结构多糖、改变天然多糖理化性质、提高多糖的活性和产量提供理论基础。

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