巯基乙醇在电泳中的作用
作用:抗氧化。巯基乙醇能够提供还原力,保护二硫键,从而使蛋白质不被氧化掉而失活,此外在骨髓间充质干细胞向神经细胞诱导培养时使用2-巯基乙醇可以进行预诱导。
这是个还原剂,可以打开二硫键,破坏二级结构。SDS电泳是根据蛋白质的线性大小来看分子量大小的。SDS包裹,全部带负电,所以不考虑蛋白质本身的电荷情况。二级结构破坏后,唯一影响分子量的就是线性大小了,除了巯基乙醇, 还可以用DTT,目的是一样的。
电泳现象
在确定的条件下,带电粒子在单位电场强度作用下,单位时间内移动的距离(即迁移率)为常数,是该带电粒子的物化特征性常数。不同带电粒子因所带电荷不同,或虽所带电荷相同但荷质比不同,在同一电场中电泳,经一定时间后,由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。
以上内容参考:百度百科-电泳
是有效的杀虫剂。为20世纪上半叶防止农业病虫害,减轻疟疾伤寒等蚊蝇传播的疾病危害起到了不小的作用。
DDT又叫滴滴涕,二二三,化学名为双对氯苯基三氯乙烷(Dichlorodiphenyltrichloroethane),化学式(ClCH)CH(CCl),是有机氯类杀虫剂。中文名称从英文缩写DDT而来,为白色晶体,不溶于水,溶于煤油,可制成乳剂,是有效的杀虫剂,也是不易分解的有机农药。
应用
DTT的用途之一是作为巯基化DNA的还原剂和去保护剂。巯基化DNA末端硫原子在溶液中趋向于形成二聚体,特别是在存在氧气的情况下。这种二聚化大大降低了一些偶联反应实验(如DNA在生物感应器中的固定)的效率;而在DNA溶液中加入DTT,反应一段时间后除去,就可以降低DNA的二聚化。
DTT也常常被用于蛋白质中二硫键的还原,可用于阻止蛋白质中的半胱氨酸之间所形成的蛋白质分子内或分子间二硫键。
但DTT往往无法还原包埋于蛋白质结构内部(溶剂不可及)的二硫键,这类二硫键的还原常常需要先将蛋白质变性(高温加热或加入变性剂,如6M 盐酸胍、8M 尿素或1% SDS)。反之,根据DTT存在情况下,二硫键还原速度的不同,可以判断其包埋程度的深浅。
DTT和2-ME(2-mercaptoethanol的简称,下同)都属于巯基试剂。
也就是说DTT和2-ME的作用是一样的:可以防止蛋白质或酶等分子中的巯基氧化成二硫键,维持体系的还原性环境。
β-巯基乙醇和DTT都是还原剂,防止蛋白质被氧化,β-巯基乙醇常用浓度为5-20MMOL/L,DTT为0.5-1MMOL/L。因为β-巯基乙醇加入缓冲液后24小时易被氧化,其后加速蛋白质的失活,而DTT氧化后形成稳定的分子内二硫健,并不危及蛋白的巯基,所以在蛋白制备中常用β-巯基乙醇,而长期储存用DTT。还有其上提到的试剂浓度均指终浓度。
至于使用浓度,DTT和2-ME的工作浓度一般为1-5mM,如果2-ME的浓度是1mM,由于DTT的氧化能力强于2-ME,DTT的浓度用0.5-1mM就可以了。
巯基乙醇有毒性,呼吸多了会中毒,滴到了手上有致命危险。
巯基乙醇:危险品,经皮肤、吞咽吸收有致命危险;刺激眼睛、呼吸道粘膜,引起慢性咽炎。水白色易流动液体,具有少许硫醇气味。
应用领域:用作增塑剂及杀虫剂,也用于染料的制造。
扩展资料:
用途:
α-巯基乙醇主要用于血清学检查凝集试验。其临床意义:当其实验值>1∶50为阳性健康搜索,布氏杆菌病符合率为93.88%。
β-巯基乙醇主要用于生产低聚合度聚氯乙烯的链转移剂,腈纶的终止剂。也可用于合成高分子材料的调聚剂、聚合催化剂、交联剂及树脂固化剂等,也可用于合成橡胶、照相、医药、油漆、纺织、金属钝化剂等行业。
β-巯基乙醇在生物实验上的意义:二硫键被打开后可以使蛋白质的四级或三级结构被破坏。由于β-巯基乙醇能够打开蛋白质的结构,它常常被用于蛋白质分析。而β-巯基乙醇也常常被用于保护蛋白质中自由的半胱氨酸巯基之间不会错误形成二硫键。
作为还原剂,2-巯基乙醇常常可以与二硫苏糖醇(DTT)或三(2-甲酰乙基)膦盐酸盐(TCEP)互换使用。β-巯基乙醇是少数几种被发现可以延长小鼠寿命的化合物。在微克量级水平上,2-巯基乙醇被观察到对实验鼠的生命具有多种可能的正面效应。
参考资料来源:百度百科-巯基乙醇
如核糖核酸酶A经巯基乙醇(还原剂)和尿素(蛋白质变性剂)处理后,发生变性作用,4对二硫键断裂,多肽链伸展开来,高级结构发生变化,失去生物活性。二抗有标记物,标记的酶是为了让底物显色的,以表示是否检测到了抗体,显色表明阳性,不显色表明阴性,有时还可以定量。中文名2-巯基乙醇外文名2-Hydroxy-1-ethanethiol别名巯基乙醇、β-巯基乙醇化学式C2H6OS分子量78.133
常用还原剂,有抗氧化作用,进口分装。DTT和巯基乙醇相比,作用相似,但DTT的刺激性气味要小很多,毒性也比巯基乙醇低很多。而且DTT比巯基乙醇的浓度低7倍时,两者效果相近。但DTT价格略高一些。产品来源:上海浩然生物技术有限公司
1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液
【配制方法】用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
【注意】DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g
DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
注意:DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
2、SDS-样品缓冲液:SDS100mg,巯基乙醇0.1ml,甘油1ml,溴酚蓝2mg,加入0.2mol/lpH7.2磷酸盐缓冲液0.5ml溶解;
含二硫键蛋白加1-2mMDTT。
DTT是一种硫醇还原剂,当其浓度达到50mM时可促进大多数蛋白的半胱氨酸残基被还原。一般1-2mM起到保护蛋白-SH的作用,10mM以上就可以破坏已经形成的二硫键。
还原剂可以使蛋白质的二硫键打开,比如2-巯基乙醇(beta-ME)、二硫苏糖醇(DTT),二硫键是2个-SH基被氧化而形成的-S-S-形式的硫原子间的键。
功能
二硫键与蛋白质高级结构的生物活性有关,同时与蛋白质的复性也有关联。如核糖核酸酶A经巯基乙醇(还原剂)和尿素(蛋白质变性剂)处理后,发生变性作用,4对二硫键断裂,多肽链伸展开来,高级结构发生变化,失去生物活性。
如果用透析法将大量还原剂和变性剂除去,在微量还原剂存在下,4对二硫键在原来的位置重新形成,伸展开的多肽肽链会自发折叠成天然构象,生物活性得到恢复。此试验也证明蛋白质高级结构的信息存在于一级结构中。
以上内容参考:百度百科-二硫键