提取RNA时,最后为什么要用75%乙醇洗涤
前面提取的rna经异丙醇沉淀后,总会含有一些未除去的蛋白和其它杂质分子,这些蛋白和杂质分子如果不除尽的话,就会直接影响所提取的rna的纯度和稳定性。为此,就需要用70%乙醇洗涤沉淀(因为在70%乙醇里rna是不溶的,而一些蛋白和其它杂质分子却可溶),并且最好是洗涤2次,然后高速离心后,倒去上清,即可得到较纯的rna沉淀。用无水乙醇则达不到这个目的
RNA在冷的无水乙醇里溶解度低,而蛋白溶解度高,因此可以用冷的无水乙醇把RNA沉淀下来从而达到提纯的目的。
2倍无水乙醇的是用来沉淀DNA的,也可以用2/3体积的异丙醇来沉淀DNA,NaAc则是提供钠盐环境,促进DNA沉淀,效果明显。
提取DNA时加入NaAc pH5.2和2倍体积的无水乙醇的作用是什么,主要是因为DNA在一定的盐浓度条件下才能更好地沉淀下来.如果你不急用其实可以沉淀过夜的。这样就可以少了75%乙醇洗涤的那一步,那一步主要是洗去多余的盐。急用的话就加吧,但是一定要用75%乙醇洗涤。
接着用异丙醇进行二次沉淀,随后用乙醇洗涤沉淀,可去除所有残留的蛋白质和无机盐. RNA样品中如果含有无机盐, 有可能对后续实验操作中的一些酶促反应产生抑制作用。