乙二醇80度下的挥发性如何

细胞的基本共性：1，相似的化学组成，各细胞的基本构成元素都是C, H, O, N, P,S,等几种，这些元素所形成的氨基酸，核苷酸，脂质和糖类是构成细胞的基本构件。

                                2，脂-蛋白体系的生物膜

                                3，相同的遗传装置

                                4，一分为二的分裂方式

整个生物界最基本的类群包括3个域：原核生物界，古核生物界，真核生物界。

与真核细胞相比，原核细胞的基因组很小，仅为10^6~10^7 bp，大部分原核细胞的主要遗传物质仅为一个环装DNA。

最小最简单的细胞--支原体，支原体能寄生于细胞内繁殖，因此是细胞培养中常见又难以去除的污染源。

革兰氏阳性和阴性菌细胞壁如下图

青霉素的抑菌作用主要通过抑制肽聚糖的合成，从而抑制细胞壁的形成阳性菌因此对青霉素敏感，反之，阴性菌因肽聚糖含量极少，对青霉素不敏感。

细菌细胞质膜：选择性交换物质，细胞质膜内侧含有电子传递与氧化磷酸化的酶系，可以进行有氧呼吸，细胞质膜内侧含有一些酶，与核糖体共同执行合成向外分泌蛋白质的功能。细胞质膜还含有细胞色谱酶与合成细胞壁成分的酶。因此，细胞质膜可以完成内质网，高尔基体和线粒体所承担的大部分工作。此外，细菌细胞膜外侧有受体蛋白，参与细菌对周围环境的应答反应。

中膜体又称间体或质膜体，由细胞膜内陷形成的囊泡状，管状，包层状膜结构，每个细胞内有一个或数个中膜体，其功能尚不明确。

人们延用了真核细胞的染色体概念，也把细菌的核区DNA称为染色体，实际上它没有真正的染色体结构。

细菌细胞核外DNA，细菌细胞中，除核区DNA外，还存在可自主复制的质粒。

细菌细胞的核糖体：核糖体充满于细胞中，少部分附着在细胞膜内侧，合成运输到胞外的蛋白。

细菌细胞内生孢子：很多革兰氏阳性菌处于不利环境或耗尽营养时，容易形成内生孢子，又称芽孢，是对不良环境有抵抗力的休眠体。

细菌细胞的增殖及其调控：DnaA蛋白是复制起点(OriC)的结合蛋白，大约10个DnaA蛋白携带ATP结合于OriC, ATP 水解促使此处富含AT碱基对的区域解链，开启DNA复制。

古细菌又称古核生物，常发现于极端特殊环境。

一，生物膜系统

二，遗传信息传递与表达调控

核小体盘绕与折叠成紧密程度不同的常染色质与异染色质，细胞分裂阶段又进一步包装成染色体。核仁主要是转录rRNA与核糖体亚单位装配的场所。

三，细胞骨架系统

细胞骨架系统是由一系列特异的结构蛋白装配而成的网架系统，对细胞形态与内部结构的合理排布起支架作用。细胞骨架可分为胞质骨架与核骨架。胞质骨架主要由微丝，微管与中等纤维等构成。

核骨架包括核纤层( nuclear lamina)与核基质( nuclear matrix)。核纤层的成分是核纤层蛋白，核基质的成分比较复杂。它们与基因表达，染色质构建与排布有关。

细胞的大小及其影响因素：

细胞的尺寸取决于核糖体的活性，因为蛋白质的量由核糖体来决定。

从果蝇到哺乳动物的各种生物，都有一套几乎完全相同的信号网络来调控细胞的大小。哺乳动物中这一网络的中心叫mTOR              ( mammalian target of rapamycin)的蛋白激酶，因其能被雷帕霉素( rapamycin)抑制而得名，果蝇等生物中也存在同源蛋白质TOR。在小鼠或果蝇中，该蛋白质的失活会导致细胞体积变小。

细胞外部氨基酸，葡萄糖等营养物质，以及胰岛素等生长因子—活化—mTOR(或TOR)

活化的mTOR有两个功能：活化核糖体蛋白S6( rpS6)的激酶( S6K)，导致rpS6磷酸化，从而可能加强核糖体的翻译效率，因而使细胞增大。活化的mTOR将翻译抑制因子    4E-BP 磷酸化，解除其对翻译起始因子4E的抑制。增强蛋白质的翻译，促使蛋白质积累。

细胞大小的决定是复杂的，还受到其他多种因素的影响。如DNA含量越大，核糖体越多，因而翻译的蛋白质越多，细胞就越大。

原核细胞与真核细胞的比较：

植物细胞与动物细胞的比较：

植物细胞特有结构：细胞壁，液泡，叶绿体。

非细胞生物——病毒：

病毒很小

遗传载体多样性

彻底的寄生性

病毒以复制和装配的方式进行增殖

病毒在细胞内繁殖：

病毒识别和入侵细胞，病毒表面蛋白质与细胞表面特异受体相互作用，病毒与细胞发生特异性的吸附。动物病毒进入细胞的方式有两种：一是细胞以主动胞饮的方式使病毒进入，二是某些有囊膜的病毒，通过其囊膜与细胞质膜融合呃呃呃方式进入细胞，如HIV，或通过胞饮进入细胞，然后与胞饮囊泡的膜融合进入细胞质中。噬菌体侵染细菌时仅将其核酸注入细胞。植物病毒难以穿越坚韧的细胞壁，常常借住于昆虫进食过程侵染植物细胞。

细胞生物学研究方法

研究特异DNA，RNA片段或蛋白质所常用的Southern杂交，Northern杂交和蛋白免疫印迹等。

光学显微镜：

普通复式光学显微镜，相差显微镜和微分干涉显微镜，荧光显微镜，激光扫描共焦显微镜

电子显微镜：

电镜制样技术：超薄切片技术，负染色技术，冷冻蚀刻技术，电镜三维重构与低温电镜技术。

扫描隧道显微镜

细胞及其组分的分析方法：

超离心技术分离细胞组分：密度剃度离心是将要分离的细胞组分小心地铺放在含有密度逐渐增加的，高溶解性的惰性物质(如蔗糖)形成的密度梯度溶液表面，通过重力或离心力的作用使样品中不同组分以不同的沉降率沉降。各组分的沉降率与它们的大小形状有关，通常以沉降系数表示。

速度沉降主要用于分离密度相近而大小不一的细胞组分。

等密度沉降用于分离不同密度的细胞组分。

细胞成分的细胞化学显示方法：                            为了测定蛋白质，核酸，多糖和脂质等细胞组分通常利用一些显色剂与所检测物质中一些特殊集团特异性结合的特征。

福尔根反应可以特异显示呈紫红色的DNA的分布。其原理是：酸水解可以去除RNA，仅保留DNA，并去除DNA上嘌呤脱氧核糖核苷键的嘌呤。使脱氧核糖的醛基暴露。所暴露的自由醛基与希夫试剂反应呈紫红色。

PAS反应则利用过碘酸氧化作用生成醛基，醛基与碱性品红反应产生紫红色化合物，用于确定多糖的存在。

四氧化锇与不饱和脂肪酸反应呈黑色，用以证明脂滴的存在。苏丹Ⅲ(深红色)染色则通过扩散进入脂滴中，使脂滴着色。

蛋白质检测方法：米伦反应，氮汞试剂与组织中的蛋白质侧链上的酪氨酸残基反应，形成红色沉淀。重氮反应中，氢氧化重氮与酪氨酸，色氨酸和组氨酸起反应形成有色复合物。蛋白质中的-SH基可用形成硫醇盐共价键的试剂进行检测。

由于大多数固定剂对酶都有失活或钝化作用，所以，在进行细胞中某种酶的定性研究时，样品制备常采用冰冻切片，或以冷丙酮，甲醛进行短时间固定，以尽量保持酶的活性。

特异蛋白抗原的定位与定性：

免疫荧光与免疫电镜是最常见的研究细胞内蛋白质分子定位的重要技术。对蛋白质组分进行体外分析定性通常采用免疫印迹，放射免疫沉淀和蛋白质芯片，质谱分析等技术。

1，免疫荧光技术就是将免疫学方法(抗原-抗体特异结合)与荧光标记技术相结合用于研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法。包括直接和间接免疫荧光技术两种。

2，免疫电镜技术：

免疫电镜技术可分为免疫铁蛋白技术，免疫酶标技术与免疫胶体金技术，其主要区别是与抗体结合的标志物不同。

细胞内特异核酸的定位与定性：

细胞内特异核酸( DNA或RNA)的定性与定位的研究，通常采用原位杂交技术。用标记的核酸探针通过分子杂交确定特异核苷酸序列在染色体上或在细胞中位置的方法称为原位杂交。

定量细胞化学分析与细胞分选技术：

流式细胞术可定量地测定某一细胞中的DNA，RNA或某一特异的标记蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞的数量，它还可将某一特异染色的细胞从数以万计的细胞群体中分离出来，以及将DNA含量不同的中期染色体分离出来，甚至可用于细胞的分选。

细胞培养与细胞工程：

动物细胞培养，原代培养细胞一般传至10代左右就传不下去了，细胞生长出现停滞，大部分细胞衰老死亡。极少数细胞度过危机，又可传代40~50代次，传至50代以后又出现危机。

植物细胞培养：单倍体细胞培养，用花药在人工培养基上进行培养。可以从小孢子(雄性生殖细胞)直接发育成胚状体，然后长成单倍体植株。或者通过愈伤组织诱导分化。

原生质体培养，一般用植物的体细胞，先用纤维素酶处理去掉细胞壁，去壁的细胞称为原生质体。原生质体可以在无菌培养基中生长分裂。

细胞融合与单克隆抗体技术：

两个或多个细胞融合为一个双核或者多核细胞的现象称为细胞融合。介导动物细胞融合常用的促融剂有灭活的病毒或化学物质(如聚乙二醇，PEG)植物细胞融合时，要先用纤维素去掉细胞壁，然后才便于原生质体融合。20世纪80年代又挡发明了电融合技术(electronfusion method)。将悬浮细胞在低压交流电场中聚集成串珠状细胞群，或对相互接触的单层培养细胞，再施加高压电脉冲处理使其融合。

基因型相同的细胞融合称为同核体，基因型不同的融合后称为异核体。

B淋巴细胞杂交瘤技术用于制备单克隆抗体(monoclonal antibody)

制备过程：将小鼠骨髓瘤细胞与经绵阳红细胞免疫过的小鼠脾细胞( B淋巴细胞)在聚乙二醇或灭活的病毒介导下发生融合。由于骨髓瘤细胞缺乏TK或HGPRT,在含氨基蝶呤的培养液内不能成活。只有融合细胞才能在HAT(次黄嘌呤，氨基蝶呤和胸腺嘧啶核苷)的培养液内通过旁路合成核酸而得以生存。通过HAT选择培养和细胞克隆，可以获得大量分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。

为了探明核质相互作用的机制，科学家们创建了细胞拆合技术。所谓细胞拆合技术就是把细胞核与细胞质分离开来，然后把不同来源的胞质体(cytoplast)和核体( karyoplast)相互组合，形成核质杂交细胞。

细胞拆合可以分为物理法和化学法两种类型。物理法就是用机械方法或短波光把细胞核去掉或使之失活，然后用微吸管吸取其他细胞的核，注入去核的细胞质中，组成新的杂交细胞。这种核移植必须用显微操纵仪进行操作。化学法是用细胞松弛B (cytochalasin B)处理细胞，细胞出现排核现象，再结合离心技术，将细胞拆分为核体和胞质体两部分。显微操作技术是在显微镜下，用显微操作装置对细胞进行解剖和向核内注入基因。

荧光漂白恢复技术(fluorescence photobleaching recovery, FPR)技术是使用亲脂性或亲水性的荧光分子，如荧光素，绿色荧光蛋白等与蛋白或脂质藕联，用于检测所标记分子在活体细胞表面或细胞内部的运动及其迁移速率。FPR技术的原理是：利用高能激光束照射细胞的某一特定区域，使该区域内标记的荧光分子发生不可逆的淬灭，这一区域称光漂白( photobleaching)区。随后，由于细胞中脂质分子或蛋白质分子的运动，周围非漂白区的荧光强度逐渐恢复到原有水平。这一过程称为荧光恢复。荧光恢复的速度在很大程度上反映荧光标记蛋白或脂质在细胞中运动速率。

单分子技术与细胞生命活动的研究：

与生命科学相关的单分子技术是在细胞内实时观测单一生物分子运动规律的技术。

酵母双杂交技术：

酵母双杂交技术( yeast two-hybrid system)是一种利用单细胞真核生物酵母在体内分析蛋白质-蛋白质相互作用的系统。细胞基因转录起始需要转录激活因子的参与，转录激活因子一般由两个或两个以上相互独立的结构域构成，即DNA结合域( DNA binding domain, DB)和转录激活域( activation domain, AD)。前者可以识别DNA上特异转录调控序列并与之结合；后者可与其他成分作用形成转录复合体，从而启动它所调节基因的转录。如果要证明蛋白A是否与蛋白B在细胞内相互作用，则可分别制备DB与蛋白A的融合蛋白(又称"诱饵"，bait)，以及AD与蛋白B的融合蛋白(又称猎物，prey)。如果蛋白A与蛋白B在细胞内相互结合，则可形成与转录激活因子类似的具有DB和AD结构域的复合物，从而启动报告基因的表达。反之，则报告基因不表达。

荧光共振能量转移技术:

荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer, FRET)技术是用来检测活细胞内两种蛋白质分子是否直接相互作用的重要手段。其基本原理是：在一定波长的激发光照射下，只有携带发光集团A的供体分子可被激发出波长为A的荧光，而同一激发光不能激发携带发光集团B的受体分子发出波长为B的荧光。然而，当供体所发出的荧光光谱A与受体上的发光集团的吸收光谱相互重叠，并且两个发光集团之间距离小到一定程度时，就会发生不同程度的能量转移，即受体分子的发光集团吸收了供体所发出的荧光，结果受体分子放出了波长为B的荧光，这种现象称为FRET现象。如下图：

如果两个蛋白质分子的距离在10nm之内，就可能发生FRET现象，由此认为这两个蛋白质存在着直接的相互作用。

放射自显影技术：

利用放射性同位素的电离射线对乳胶(含AgBr或AgCl)的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性，定位与半定量研究的一种细胞化学技术。对细胞或生物体内生物大分子进行动态研究和追踪(pulse-chase)是这一技术独具的特征。放射自显影技术包括两个主要步骤：即同位素标记的生物大分子前体的掺入和细胞内同位素所在位置的显示。

生物信息学( bioinformatics)

细胞生物学常用模式生物：大肠杆菌，酵母，线虫，果蝇，斑马鱼，小鼠，拟南芥

突变体制备：DNA和RNA两个水平制备，从RNA水平主要是RNA干扰技术。RNAi技术是指利用一段特异的双链RNA或单链反义RNA通过注射，转染或转基因的方法导入到细胞或模式生物体中，这样的RNA可以启动一套信号通路来最终降解与这段RNA对应的，通常是包含这段序列的mRNA，使该mRNA无法翻译成相关的蛋白质。

基因敲除(knock out)是在DNA水平制备突变体的一种方法。通常DNA水平突变体的制备方法有三种(以果蝇为例)：化学诱变法(给果蝇喂食化学诱变剂，造成随机的点突变或者DNA片段丢失)，P因子介导的突变(利用转座子的转座特性及转座子的移动过程中可以带走部分基因组DNA序列的特性)和基于同源重组的定点突变。

蛋白质组学技术：

1，双向凝胶电泳

双相凝胶电泳的第一相是等电聚焦( IEF)电泳，采用pH梯度，根据蛋白质等电点不同进行分离。第二相是SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳( SDS-PAGE)，根据蛋白质相对分子质量大小进行分离。

2，色谱技术

3，质谱

4，蛋白质芯片

5，生物信息学

细胞质膜(plasma membrane)曾称细胞膜( cell membrane)。真核细胞，细胞内的膜系统与细胞质膜统称为生物膜

流动镶嵌模型主要强调：1，膜的流动性 2，膜蛋白分布的不对称性，有的分布于膜表面 ，有的嵌入或横跨脂双分子层。

近些年提出的脂筏模型 ( lipid raft model)是对膜流动性的新的理解。该模型认为甘油磷脂为主体的生物膜上，胆固醇，鞘磷脂等富集区域形成相对有序的脂相，如同漂浮在脂双层上的"脂筏"一样载着执行某些特定生物学功能的各种膜蛋白。脂筏最初可能是在高尔基体上形成，最终转移到细胞质膜上。有些脂筏可以在不同程度上与膜下细胞骨架蛋白交联。据推测，一个直径100nm的脂筏可载有600个蛋白质分子

目前对生物膜结构的认识可归纳如下：

1，具有极性头部和非极性尾部的磷脂分子在水相中具有自发形成封闭的膜系统的性质，磷脂分子以疏水性尾部相对，极性头部朝水相形成脂双分子层，每层磷脂分子称为一层小叶( leaflet)。

2，蛋白质分子以不同的方式镶嵌在脂双层分子中或结合在其表面，蛋白质的类型，蛋白质分布的不对称性及其与脂分子的协同作用赋予生物膜各自的特性与功能。

3，生物膜可看成是蛋白质在双层脂分子中的二维溶液。然而膜蛋白与膜脂之间，膜蛋白与膜蛋白之间及其与膜两侧其他生物大分子的复杂的相互作用，在不同程度上限制了膜蛋白和膜脂的流动性。同时也形成了赖以完成多种膜功能的脂筏，纤毛和微绒毛等结构。

4，在细胞生长和分裂等整个生命活动中，生物膜在三维空间上可出现弯曲，折叠，延伸等改变，处于不断地动态变化中。从而保证了诸如细胞运动，细胞增殖等代谢活动的进行。

膜脂：主要包括甘油磷脂(glycerophosphatide),鞘脂(sphingolipid)和固醇( sterol)三种基本类型。生物膜上还有少量的糖脂( glycolipid),鉴于绝大多数的糖脂都属于鞘氨醇的衍生物，因此，目前人们多将糖脂归于鞘脂质。

1，甘油磷脂

甘油磷脂构成了脂膜的基本成分，占整个脂膜的50%以上。甘油磷脂为3-磷酸甘油的衍生物，包括磷脂酰胆碱(卵磷脂，phosphatidylserine , PS),磷脂酰乙醇胺(phosphatidylethanolamine, PE)和磷脂酰肌醇( phosphatidylinositol, PI)等，主要在内质网上合成。组成生物膜的甘油磷脂分子主要特征是：1，具有一个与磷酸基团相结合的极性头和两个非极性的尾(脂肪酸链)，但存在于线粒体内膜和某些细菌脂膜上的心磷脂除外，它具有4个非极性的尾部。2，脂肪酸碳链为偶数，多数碳链由16或18个碳原子组成。3，除饱和脂肪酸外，常常还含有1~2个双键的不饱和脂肪酸。

2，鞘脂

3，固醇

胆固醇及其类似物统称为固醇，它是一类含有4个闭环的碳氢化合物，其亲水的头部为一个羟基，是一种分子刚性很强的两性化合物。

膜蛋白：

根据膜蛋白分离的难易程度及其与脂分子的结合方式，膜蛋白可分为3种基本类型：外在膜蛋白(extrinsic membrane protein)或称外周膜蛋白(peripheral membrane protein)，内在膜蛋白或称整合膜蛋白(intergral membrane protein)，脂锚定膜蛋白( lipid anchored protein)。

外在膜蛋白为水溶性蛋白质，靠离子键或其他较弱的键与膜表面的膜蛋白分子或膜脂分子结合，因此只要改变溶液的离子强度甚至提高温度就可以从膜上分离下来，但膜结构并不被破坏。磷脂酶就是其中一例。它也是蛇毒的活性成分。

脂锚定膜蛋白是通过与之共价相连的脂分子(脂肪酸或糖脂)插入膜的脂双分子中，而锚定在细胞质膜上，其水溶性的蛋白质部分位于脂双层外。

内在膜蛋白与膜结合比较紧密，只有用去垢剂处理使膜崩解后才可分离出来。内在膜蛋白占整个膜蛋白的70%~80%，据估计人类基因中，1/4~1/3基因编码的蛋白质为内在膜蛋白。

内在膜蛋白与膜脂结合的方式：

目前所了解的内在膜蛋白均为跨膜蛋白，跨膜蛋白在结构上可分为：胞质外结构域，跨膜结构域和胞质内结构域等3个组成部分。它与膜结合的主要方式有：

1，膜蛋白的跨膜结构域与脂双层分子的疏水核心相互作用，这是内在膜蛋白与膜脂结合的最主要和最基本的结合方式。

2，跨膜结构域两端携带正电荷的氨基酸残基，如精氨酸，赖氨酸等与磷脂分子带负电的极性头部形成离子键，或带负电的氨基酸残基通过Ca2+，Mg2+等阳离子与带负电的磷脂极性头部相互作用。

3，某些膜蛋白通过自身在胞质一侧的半胱氨酸残基共价结合到脂肪酸分子上，后者插入脂双层中进一步加强膜蛋白与脂双层的结合力。

去垢剂( detergent)是一端亲水，一段疏水的两性小分子，是分离与研究膜蛋白的常用试剂。去垢剂可以插入膜脂，与膜脂或膜蛋白的跨膜结构域等疏水部位结合，形成可溶性的颗粒。去垢剂分为离子型去垢剂和非离子型去垢剂两种类型。常用的离子型去垢剂如十二烷基硫酸钠( SDS)具有带电荷的基团，其分子式如下：

SDS可使细胞膜崩解，与膜蛋白疏水部分结合并使其与膜分离，高浓度的SDS还可以破坏蛋白质中的离子键和氢键等非共价键，甚至改变蛋白质亲水部分的构象。这一特性常用于蛋白质成分分析的SDS凝胶电泳。由于SDS对蛋白质的作用较为剧烈，可引起蛋白质变性，因此在纯化膜蛋白时，特别是为获得有生物活性膜蛋白时，常常采用不带电荷的非离子去垢剂。

常用的非离子去垢剂Triton X-100分子式如下：

非离子去垢剂也可使细胞膜崩解，但对蛋白质的作用比较温和，它不仅用于膜蛋白的分离纯化，也用于除去细胞的膜系统，以便对细胞骨架蛋白和其他蛋白质进行研究。

膜脂的流动性主要指脂分子的侧向运动，它在很大程度上是由脂分子本身的性质决定的，一般来说，脂肪酸链越短，不饱和程度越高，膜脂的流动性越大(猜想植物油和动物油，手动滑稽)

膜蛋白的流动性

膜脂和膜蛋白运动速率的检测

荧光漂白恢复技术( FPR)是研究膜蛋白或膜脂流动性的基本实验技术之一。

膜脂和膜蛋白在生物膜上呈不对称分布，糖蛋白和糖脂的糖基部分均位于细胞质膜的外侧。

为了便于研究个了解细胞质膜以及其他生物膜的不对称性，人们将细胞质的各个膜面命名如下：与细胞外环境接触的膜面称质膜的细胞外表面(extrocytoplasmic surface, ES)，这一层脂分子和膜蛋白称细胞膜的外小叶( out leaf),与细胞质基质接触的膜面称质膜的原生质表面(protoplasmic surface, PS)。

膜蛋白的不对称性

细胞质膜相关的膜骨架

细胞质膜特别是膜蛋白常常与膜下结构(主要是细胞骨架系统)相互联系，协同作用，并形成细胞表面的某些特化结构以完成特定的功能。这些特化结构包括膜骨架( membrane associated cytoskeleton)，鞭毛和纤毛，微绒毛及细胞的变形足等，分别与细胞形态的维持，细胞运动，细胞的物质交换和信息传递等功能有关。

膜骨架：膜骨架是指细胞质膜下与膜蛋白相连的由纤维蛋白组成的网架结构，它从力学上参与维持细胞质膜的形状并协助质膜完成多种生理功能。

红细胞质膜蛋白及膜骨架

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析血影的蛋白质成分显示：红细胞膜蛋白主要包括血影蛋白或称血膜肽(spectrin),锚蛋白( ankyrin),带3蛋白，带4.1蛋白，带4.2蛋白和肌动蛋白( actin)，此外还有一些血型糖蛋白(glycoprotein)。

膜骨架蛋白主要成分包括血影蛋白，肌动蛋白，锚蛋白和带4.1蛋白等。

细胞质膜的基本功能

1，为细胞的生命活动提供相对稳定的内环境

2，选择性的物质运输

3，提供细胞识别位点，并完成细胞内外信息跨膜传导

4，为多种酶提供结合位点，使酶促反应高效而有序地进行

5，介导细胞与细胞，细胞与胞外基质之间的连接

6，质膜参与形成具有不同功能的细胞表面特化结构

7，膜蛋白的异常与某些遗传病，恶性肿瘤，自身免疫病甚至神经退行性疾病相关，很多膜蛋白可作为疾病治疗的药物靶标。

增加溶解度，还有加压，压缩体积，等等 但是都不一定的。

ADA缺乏是第一个运用基因治疗的遗传性疾病.2年随访证实T细胞,B细胞,髓细胞以及粒细胞可长期表达转入的ADA基因,患者的体液免疫和细胞免疫趋于正常.由于多数病儿在接受基因治疗后,仍需PEG-ADA替代治疗,对基因治疗的疗效评估尚有困难.

乙二醇对动物有毒性，人类致死剂量约为1.6 g/kg。

乙二醇是无色无臭、有甜味液体。乙二醇能与水、丙酮互溶，但在醚类中溶解度较小。

可用作溶剂、防冻剂以及合成涤纶的原料。乙二醇的高聚物聚乙二醇（PEG）是一种相转移催化剂，也用于细胞融合；其硝酸酯是一种炸药。由于分子量低，性质活泼，可起酯化、醚化、醇化、氧化、缩醛、脱水等反应。

扩展资料

乙二醇是防冻液的主要成分，约占防冻液原液的92%～98%，防冻液原液可以根据各地气温的高低，按一定比例与水混合，将冰点控制在适当范围内。有效的防冻剂是各种有机醇。

各国从50年代以来几乎全部采用乙二醇作为防冻剂。乙二醇是一种无色、透明、稍有甜味和具有吸湿性的粘稠液体，它能以任何比例与水相溶。

乙二醇的浓度不同时。冰点亦不同。在中国江南，一般采用乙二醇质量分数为40

%的配比，而在寒冷的北方，需取乙二醇质量分数50%左右的配比比较适宜。

参考资料来源：百度百科-乙二醇

1．生物体具有共同的物质基础和结构基础。

2． 从结构上说,除病毒以外,生物体都是由细胞构成的。细胞是生物体的结构和功能的基本单位。 3．新陈代谢是活细胞中全部的序的化学变化总称，是生物体进行一切生命活动的基础。 4．生物体具应激性，因而能适应周围环境。

5．生物体都有生长、发育和生殖的现象。

6．生物遗传和变异的特征，使各物种既能基本上保持稳定，又能不断地进化。

7．生物体都能适应一定的环境，也能影响环境。

第一章 生命的物质基础

8．组成生物体的化学元素，在无机自然界都可以找到，没有一种化学元素是生物界所特有的，这个事实说明生物界和非生物界具统一性。

9．组成生物体的化学元素，在生物体内和在无机自然界中的含量相差很大，这个事实说明生物界与非生物界还具有差异性。

10．各种生物体的一切生命活动，绝对不能离开水。

11．糖类是构成生物体的重要成分，是细胞的主要能源物质，是生物体进行生命活动的主要能源物质。

12．脂类包括脂肪、类脂和固醇等，这些物质普遍存在于生物体内。

13．蛋白质是细胞中重要的有机化合物，一切生命活动都离不开蛋白质。

14．核崾且磺猩�锏囊糯�镏剩�杂谏�锾宓囊糯�湟旌偷鞍字实纳�锖铣捎屑�匾�饔谩?

15．组成生物体的任何一种化合物都不能够单独地完成某一种生命活动，而只有按照一定的方式有机地组织起来，才能表现出细胞和生物体的生命现象。细胞就是这些物质最基本的结构形式。

第二章 生命的基本单位——细胞

16．活细胞中的各种代谢活动，都与细胞膜的结构和功能有密切关系。细胞膜具一定的流动性这一结构特点，具选择透过性这一功能特性。

17．细胞壁对植物细胞有支持和保护作用。

18．细胞质基质是活细胞进行新陈代谢的主要场所，为新陈代谢的进行，提供所需要的物质和一定的环境条件。

19．线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。

20．叶绿体是绿色植物叶肉细胞中进行光合作用的细胞器。

21．内质网与蛋白质、脂类和糖类的合成有关，也是蛋白质等的运输通道。

22．核糖体是细胞内合成为蛋白质的场所。

23．细胞中的高尔基体与细胞分泌物的形成有关，主要是对蛋白质进行加工和转运；植物细胞分裂时，高尔基体与细胞壁的形成有关。

24．染色质和染色体是细胞中同一种物质在不同时期的两种形态。

25．细胞核是遗传物质储存和复制的场所，是细胞遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。

26．构成细胞的各部分结构并不是彼此孤立的，而是互相紧密联系、协调一致的，一个细胞是一个有机的统一整体，细胞只有保持完整性，才能够正常地完成各项生命活动。

27．细胞以分裂是方式进行增殖，细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。

28．细胞有丝分裂的重要意义（特征），是将亲代细胞的染色体经过复制以后，精确地平均分配到两个子细胞中去，因而在生物的亲代和子代间保持了遗传性状的稳定性，对生物的遗传具重要意义。

29．细胞分化是一种持久性的变化，它发生在生物体的整个生命进程中，但在胚胎时期达到最大限度。

30．高度分化的植物细胞仍然具有发育成完整植株的能力，也就是保持着细胞全能性。

第三章 生物的新陈代谢

31．新陈代谢是生物最基本的特征，是生物与非生物的最本质的区别。

32．酶是活细胞产生的一类具有生物催化作用的有机物，其中绝大多数酶是蛋白质，少数酶是RNA。

33．酶的催化作用具有高效性和专一性；并且需要适宜的温度和pH值等条件。

34．ATP是新陈代谢所需能量的直接来源。

35．光合作用是指绿色植物通过叶绿体，利用光能，把二氧化碳和水转化成储存能量的有机物，并且释放出氧的过程。光合作用释放的氧全部来自水。

36．渗透作用的产生必须具备两个条件：一是具有一层半透膜，二是这层半透膜两侧的溶液具有浓度差。

37．植物根的成熟区表皮细胞吸收矿质元素和渗透吸水是两个相对独立的过程。

38．糖类、脂类和蛋白质之间是可以转化的，并且是有条件的、互相制约着的。

39．高等多细胞动物的体细胞只有通过内环境，才能与外界环境进行物质交换。

40．正常机体在神经系统和体液的调节下，通过各个器官、系统的协调活动，共同维持内环境的相对稳定状态，叫稳态。稳态是机体进行正常生命活动的必要条件。

41．对生物体来说，呼吸作用的生理意义表现在两个方面：一是为生物体的生命活动提供能量，二是为体内其它化合物的合成提供原料。

第四章 生命活动的调节

42．向光性实验发现：感受光刺激的部位在胚芽鞘尖端，而向光弯曲的部位在尖端下面的一段。

43．生长素对植物生长的影响往往具有两重性。这与生长素的浓度高低和植物器官的种类等有关。一般来说，低浓度促进生长，高浓度抑制生长。

44．在没有受粉的番茄（黄瓜、辣椒等）雌蕊柱头上涂上一定浓度的生长素溶液可获得无子果实。

45．植物的生长发育过程，不是受单一激素的调节，而是由多种激素相互协调、共同调节的。

46．下丘脑是机体调节内分泌活动的枢纽。

47．相关激素间具有协同作用和拮抗作用。

48．神经系统调节动物体各种活动的基本方式是反射。反射活动的结构基础是反射弧。

49．神经元受到刺激后能够产生兴奋并传导兴奋；兴奋在神经元与神经元之间是通过突触来传递的，神经元之间兴奋的传递只能是单方向的。

50．在中枢神经系统中，调节人和高等动物生理活动的高级中枢是大脑皮层。

51．动物建立后天性行为的主要方式是条件反射。

52．判断和推理是动物后天性行为发展的最高级形式，是大脑皮层的功能活动，也是通过学习获得的。

53．动物行为中，激素调节与神经调节是相互协调作用的，但神经调节仍处于主导的地位。

54．动物行为是在神经系统、内分泌系统和运动器官共同协调下形成的。

第五章 生物的生殖和发育

55．有性生殖产生的后代具双亲的遗传特性，具有更大的生活能力和变异性，因此对生物的生存和进化具重要意义。

56．营养生殖能使后代保持亲本的性状。

57．减数分裂的结果是，新产生的生殖细胞中的染色体数目比原始的生殖细胞的减少了一半。 58．减数分裂过程中联会的同源染色体彼此分开，说明染色体具一定的独立性；同源的两个染色体移向哪一极是随机的，则不同对的染色体（非同源染色体）间可进行自由组合。 59．减数分裂过程中染色体数目的减半发生在减数第一次分裂中。

60．一个精原细胞经过减数分裂，形成四个精细胞，精细胞再经过复杂的变化形成精子。

61． 一个卵原细胞经过减数分裂，只形成一个卵细胞。

62． 对于进行有性生殖的生物来说，减数分裂和受精作用对于维持每种生物前后代体细胞中染色体数目的恒定，对于生物的遗传和变异，都是十分重要的

63． 对于进行有性生殖的生物来说，个体发育的起点是受精卵。

64． 很多双子叶植物成熟种子中无胚乳，是因为在胚和胚乳发育的过程中胚乳被胚吸收，营养物质贮存在子叶里，供以后种子萌发时所需。

65． 植物花芽的形成标志着生殖生长的开始。

66．高等动物的个体发育，可以分为胚胎发育和胚后发育两个阶段。胚胎发育是指受精卵发育成为幼体。胚后发育是指幼体从卵膜孵化出来或从母体内生出来以后，发育成为性成熟的个体。

第六章 遗传和变异

67．DNA是使R型细菌产生稳定的遗传变化的物质，而噬菌体的各种性状也是通过DNA传递给后代的，这两个实验证明了DNA 是遗传物质。

68．现代科学研究证明，遗传物质除DNA以外还有RNA。因为绝大多数生物的遗传物质是DNA，所以说DNA是主要的遗传物质。

69．碱基对排列顺序的千变万化，构成了DNA分子的多样性，而碱基对的特定的排列顺序，又构成了每一个DNA分子的特异性。这从分子水平说明了生物体具有多样性和特异性的原因。

70．遗传信息的传递是通过DNA分子的复制来完成的。

71．DNA分子独特的双螺旋结构为复制提供了精确的模板；通过碱基互补配对，保证了复制能够准确地进行。

72．子代与亲代在性状上相似，是由于子代获得了亲代复制的一份DNA的缘故。

73．基因是有遗传效应的DNA片段，基因在染色体上呈直线排列，染色体是基因的载体。 74．基因的表达是通过DNA控制蛋白质的合成来实现的。

75．由于不同基因的脱氧核苷酸的排列顺序（碱基顺序）不同，因此，不同的基因含有不同的遗传信息。（即：基因的脱氧核苷酸的排列顺序就代表遗传信息）。

76．DNA分子的脱氧核苷酸的排列顺序决定了信使RNA中核糖核苷酸的排列顺序，信使RNA中核糖核苷酸的排列顺序又决定了氨基酸的排列顺序，氨基酸的排列顺序最终决定了蛋白质的结构和功能的特异性，从而使生物体表现出各种遗传特性。

77．生物的一切遗传性状都是受基因控制的。一些基因是通过控制酶的合成来控制代谢过程；基因控制性状的另一种情况，是通过控制蛋白质分子的结构来直接影响性状。

78．基因分离定律：具有一对相对性状的两个生物纯本杂交时，子一代只表现出显性性状；子二代出现了性状分离现象，并且显性性状与隐性性状的数量比接近于3：1。

79．基因分离定律的实质是：在杂合子的细胞中，位于一对同源染色体，具有一定的独立性，生物体在进行减数分裂形成配子时，等位基因会随着的分开而分离，分别进入到两个配子中，独立地随配子遗传给后代。

80．基因型是性状表现的内存因素，而表现型则是基因型的表现形式。

81．基因自由组合定律的实质是：位于非同源染色体上的非等位基因的分离或组合是互不干扰的。在进行减数分裂形成配子的过程中，同源染色体上的等位基因彼此分离，同时非同源染色体上的非等位基因自由组合。

82．基因的连锁和交换定律的实质是：在进行减数分裂形成配子时，位于同一条染色体上的不同基因，常常连在一起进入配子；在减数分裂形成四分体时，位于同源染色体上的等位基因有时会随着非姐妹染色单体的交换而发生交换，因而产生了基因的重组。

83．生物的性别决定方式主要有两种：一种是XY型，另一种是ZW型。

84．可遗传的变异有三种来源：基因突变，基因重组，染色体变异。

85．基因突变在生物进化中具有重要意义。它是生物变异的根本来源，为生物进化提供了最初的原材料。

86．通过有性生殖过程实现的基因重组，为生物变异提供了极其丰富的来源。这是形成生物多样性的重要原因之一，对于生物进化具有十分重要的意义。

第七章 生物的进化

87．生物进化的过程实质上就是种群基因频率发生变化的过程。

88．以自然选择学说为核心的现代生物进化理论，其基本观点是：种群是生物进化的基本单位，生物进化的实质在于种群基因频率的改变。突变和基因重组、自然选择及隔离是物种形成过程的三个基本环节，通过它们的综合作用，种群产生分化，最终导致新物种的形成。

第八章 生物与环境

89．光对植物的生理和分布起着决定性的作用。

90．生物的生存受到很多种生态因素的影响，这些生态因素共同构成了生物的生存环境。生物只有适应环境才能生存。

91．保护色、警戒色和拟态等，都是生物在进化过程中，通过长期的自然选择而逐渐形成的适应性特征。

92．适应的相对性是遗传物质的稳定性与环境条件的变化相互作用的结果。

93．生物与环境之间是相互依赖、相互制约的，也是相互影响、相互作用的。生物与环境是一个不可分割的统一整体。

94．在一定区域内的生物，同种的个体形成种群，不同的种群形成群落。种群的各种特征、种群数量的变化和生物群落的结构，都与环境中的各种生态因素有着密切的关系。

95．在各种类型的生态系统中，生活着各种类型的生物群落。在不同的生态系统中，生物的种类和群落的结构都有差别。但是，各种类型的生态系统在结构和功能上都是统一的整体。

96．生态系统中能量的源头是阳光。生产者固定的太阳能的总量便是流经这个生态系统的总能量。这些能量是沿着食物链（网）逐级流动的。

97．对一个生态系统来说，抵抗力稳定性与恢复力稳定性之间往往存在着相反的关系。

高中生物复习归纳

一、常现生物：

1．细菌：原核类：具细胞结构，但细胞内无核膜和核仁的分化，也无复杂的细胞器，包括：细菌（杆状、球状、螺旋状）、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体。

①细菌：三册书中所涉及的所有细菌的种类：

乳酸菌、硝化细菌（代谢类型）；

肺炎双球菌S型、R型（遗传的物质基础）；

结核杆菌和麻风杆菌（胞内寄生菌）；

根瘤菌、圆褐固氮菌（固氮菌）；

大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌（为基因工程提供运载体，也可作为基因工程的受体细胞）；

苏云金芽孢杆菌（为抗虫棉提供抗虫基因）；

假单孢杆菌（分解石油的超级细菌）；

甲基营养细菌、谷氨酸棒状杆菌、黄色短杆菌（微生物的代谢）；

链球菌（一般厌氧型）；

产甲烷杆菌（严格厌氧型）等

②放线菌：是主要的抗生素产生菌。它们产生链霉素、庆大霉素、红霉素、四环素、环丝氨酸、多氧霉素、环已酰胺、氯霉素和磷霉素等种类繁多的抗生素（85%）。繁殖方式为分生孢子繁殖。

③衣原体：砂眼衣原体。

2．病毒：病毒类：无细胞结构，主要由蛋白质和核酸组成，包括病毒和亚病毒（类病毒、拟病毒、朊病毒）① 动物病毒：RNA类（脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、麻疹病毒、腮腺炎病毒、流感病毒、艾滋病病毒、口蹄疫病毒、脑膜炎病毒、SARS病毒）

DNA类（痘病毒、腺病毒、疱疹病毒、虹彩病毒、乙肝病毒）

②植物病毒：RNA类（烟草花叶病毒、马铃薯X病毒、黄瓜花叶病毒、大麦黄化病毒等）

③微生物病毒：噬菌体。

3．真核类：具有复杂的细胞器和成形的细胞核，包括：酵母菌、霉菌（丝状真菌）、蕈菌（大型真菌）等真菌及单细胞藻类、原生动物（大草履虫、小草履虫、变形虫、间日疟原虫等）等真核微生物。

① 霉菌：可用于发酵上工业，广泛的用于生产酒精、柠檬酸、甘油、酶制剂（如蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等）、固醇、维生素等。在农业上可用于饲料发酵、生产植物生长素（如赤酶霉素）、杀虫农药（如白僵菌剂）、除草剂等。危害如可使食物霉变、产生毒素（如黄曲霉毒素具致癌作用、镰孢菌毒素可能与克山病有关）。常见霉菌主要有毛霉、根霉、曲霉、青霉、赤霉菌、白僵菌、脉胞菌、木霉等。

4．微生物代谢类型：

① 光能自养：光合细菌、蓝细菌（水作为氢供体）紫硫细菌、绿硫细菌（H2S作为氢供体，严格厌氧）2H2S＋CO2 [CH2O]＋H2O＋2S

② 光能异养：以光为能源，以有机物（甲酸、乙酸、丁酸、甲醇、异丙醇、丙酮酸、和乳酸）为碳源与氢供体营光合生长。阳光细菌利用丙酮酸与乳酸用为唯一碳源光合生长。

③ 化能自养：硫细菌、铁细菌、氢细菌、硝化细菌、产甲烷菌（厌氧化能自养细菌）CO2＋4H2 CH4＋2H2O

④ 化能异养：寄生、腐生细菌。

⑤ 好氧细菌：硝化细菌、谷氨酸棒状杆菌、黄色短杆菌等

⑥ 厌氧细菌：乳酸菌、破伤风杆菌等

⑦ 中间类型：红螺菌（光能自养、化能异养、厌氧[兼性光能营养型]）、氢单胞菌（化能自养、化能异养[兼性自养]）、酵母菌（需氧、厌氧[兼性厌氧型]）

⑧ 固氮细菌：共生固氮微生物（根瘤菌等）、自生固氮微生物（圆褐固氮菌）

5.植物：C3和C4植物、阳生和阴生植物、豌豆、荠菜、玉米、水稻（2×12）、洋葱（2×8）、香蕉（3n）、普通小麦（六倍体）、八倍体小黑麦、无籽西瓜（3n）、无籽番茄、抗虫棉、豆科植物等。

6．动物：人（2×23）、果蝇（2×4）、马（2×32）、驴（2×31）、骡子（63）等。

二、常用物质和试剂：

1．常用物质：

ATP、PEP（磷酸烯醇式丙酮酸）、PEG（聚乙二醇）、灭活的病毒、NADPH（还原型辅酶Ⅱ）、过敏原、植物激素、生长素、生长素类似物、动物激素、丙酮酸、少数特殊状态的叶绿素a分子、质粒、限制性内切酶、DNA连接酶等。

2．常用试剂：

斐林试剂、苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ、双缩脲试剂、二苯胺、50%的酒精溶液、15%的盐酸、95%的酒精溶液、龙胆紫溶液、醋酸洋红、20%的肝脏、3%的过氧化氢、3.5%的氯化铁、3%的可溶性淀粉溶液、3%的蔗糖溶液、2%的新鲜淀粉酶溶液、5%的盐酸、5%的氢氧化钠、碘液、丙酮、层析液、二氧化硅、碳酸钙、0.3g/mL的蔗糖溶液、硝酸钾溶液、0.1g/mL的柠檬酸钠溶液、2mol/L和0.015mol/L的氯化钠溶液、95%的冷酒精溶液、75%的酒精溶液、胰蛋白酶、秋水仙素、氯化钙等。

三、重要的名词、观点、结论

（一）重要的名词：

1．应激性、细胞、自由水、结合水、肽键、多肽、真核细胞、原核细胞、自由扩散、协助扩散、主动运输、细胞的分化、细胞的癌变、细胞的衰老、致癌因子、有丝分裂、细胞周期、无丝分裂

2．酶、ATP、高能磷酸化合物、高能磷酸键、渗透作用、原生质、原生质层、质壁分离、质壁分离复原、选择性吸收、光反应、暗反应、光合作用效率、有氧呼吸、无氧呼吸、内环境、稳态、脱氨基作用、氨基转换作用、化能合成作用

3．向性运动、神经调节、体液调节、激素调节、顶端优势、反馈调节、协同作用、拮抗作用、反射、反射弧、非条件反射、条件反射、突触、高级神经中枢、先天性行为、后天性行为

4．有性生殖、无性生殖、营养生殖、双受精、受精作用、减数分裂、性原细胞、初级性母细胞、次级性母细胞、染色体、染色单体、同源染色体、非同源染色体、四分体、染色体组、性染色体、常染色体、个体发育、胚的发育、胚乳的发育、顶细胞、基细胞、胚胎发育、胚后发育、卵裂、囊胚期、原肠胚、动物极、植物极

5．DNA、RNA、碱基互补配对、半保留复制、基因、转录、翻译、显性性状、隐性性状、相对形状、基因型、表现型、等位基因、基因的分离定律、基因的自由组合定律、正交、反交、伴性遗传、交*遗传、基因突变、基因重组、染色体变异、杂交育种、人工诱变育种、单倍体育种、多倍体育种、花药离体培养、单基因遗传病、多基因遗传病、染色体异常遗传病、优生学

6．自然选择学说、基因库、基因频率、隔离、地理隔离、生殖隔离

7．生物圈、生态学、生态因素、互利共生、寄生、竞争、捕食、种群、种群密度、种群数量增长曲线、生物群落、生态系统（森林、海洋、草原、农业、湿地、城市）、食物链、食物网、营养级、物质循环、能量流动、生态系统稳定性、生物多样性、生物圈的稳态、碳循环、氮循环、硫循环、生态农业

8．人体的稳态、人体的平衡及调节、糖尿病、营养物质、营养、特异性免疫、免疫系统、抗原、抗体、抗原决定簇、体液免疫、细胞免疫、过敏反应、自身免疫病、免疫缺陷病

9．生物固氮、共生固氮微生物、自生固氮微生物

10．细胞核遗传、细胞质遗传、母系遗传、编码区、非编码区、RNA聚合酶结合位点、外显子、内含子、人类基因组计划、基因工程、质粒

11．生物膜、细胞的生物膜系统、细胞工程、植物组织培养、植物体细胞杂交、细胞的全能性、愈伤组织、脱分化、再分化、动物细胞培养液、原代培养、传代培养、细胞株、细胞系、单克隆抗体

12．微生物、菌落、衣壳、核衣壳、囊膜、刺突、碳源、氮源、生长因子、选择培养基、鉴别培养基、初级代谢产物、次级代谢产物、组成酶、诱导酶、微生物的生长曲线、接种、发酵罐、发酵工程、单细胞蛋白

（二）重要的观点、结论：

1．生物体具有共同的物质基础和结构基础。细胞是一切动植物结构的基本单位。病毒没有细胞结构。细胞是生物体的结构和功能的基本单位。

2．新陈代谢是生物体进行一切生命活动的基础，是生物最基本的特征，是生物与非生物的最

本质的区别。

3．生物遗传和变异的特征，使各物种既能基本上保持稳定，又能不断地进化。生物的遗传特

性，使生物物种保持相对稳定。生物的变异特性，使生物物种能够产生新的性状，以致形

成新的物种，向前进化发展。

4．生物体具应激性，因而能适应周围环境。生物体都能适应一定的环境，也能影响环境。

5．组成生物体的化学元素，在无机自然界都可以找到，没有一种化学元素是生物界所特有 的，这个事实说明生物界和非生物界具统一性。生物界与非生物界还具有差异性。组成生物体的化学元素和化合物是生物体生命活动的物质基础。

6．糖类是细胞的主要能源物质，葡萄糖是细胞的重要能源物质。淀粉和糖元是植物、动物细胞内的储能物质。蛋白质是一切生命活动的体现者。 脂肪是生物体的储能物质。核酸是一切生物的遗传物质。

7．组成生物体的任何一种化合物都不能够单独地完成某一种生命活动，只有这些化合物按照一定的方式有机地组织起来，才能表现出细胞和生物体的生命现象。细胞就是这些物质最基本的结构形式。

8．细胞膜具一定的流动性这一结构特点，具选择透过性这一功能特性。

9．细胞壁对植物细胞有支持和保护作用。 线粒体是活细胞进行有氧呼吸的主要场所。 叶绿体是绿色植物光合作用的场所。核糖体是细胞内将氨基酸合成为蛋白质的场所。 染色质和染色体是细胞中同一种物质在不同时期的两种形态。 细胞核是遗传物质储存和复制的场所，是细胞遗传特性和细胞代谢活动的控制中心。

10．构成细胞的各部分结构并不是彼此孤立的，而是互相紧密联系、协调一致的，一个细胞是 一个有机的统一整体，细胞只有保持完整性，才能够正常地完成各项生命活动。

11．原核细胞最主要的特点是没有由核膜包围的典型的细胞核。

12．细胞以分裂的方式进行增殖，细胞增殖是生物体生长、发育、繁殖和遗传的基础。

13．细胞有丝分裂的重要意义（特征），是将亲代细胞的染色体经过复制以后，精确地平均分配到两个子细胞中去，因而在生物的亲代和子代间保持了遗传性状的稳定性，对生物的遗传具重要意义。

14．高度分化的植物细胞仍然具有发育成完整植株的能力，也就是保持着细胞全能性。

15．酶的催化作用具有高效性和专一性，需要适宜的温度和pH值等条件。

16．ATP是新陈代谢所需要能量的直接来源。

17．光合作用释放的氧全部来自水。一部分氨基酸和脂肪也是光合作用的直接产物。所以确切 地说，光合作用的产物是有机物和氧。 光能在叶绿体中的转换，包括三个步骤：光能转换成电能；电能转换成活跃的化学能；活跃的化学能转换成稳定的化学能。

18．植物成熟区表皮细胞吸收矿质元素和渗透吸水是两个相对独立的过程。

19．C4植物的叶片中，围绕着维管束的是呈“花环型”的两圈细胞：里面的一圈是维管束鞘细胞，外面的一圈是一部分叶肉细胞。

20．高等的多细胞动物，它们的体细胞只有通过内环境，才能与外界环境进行物质交换。

21．糖类、脂类和蛋白质之间是可以转化的，并且是有条件的、互相制约着的。

22．植物生命活动调节的基本形式是激素调节。人和高等动物生命活动调节的基本形式包括神 经调节和体液调节，其中神经调节的作用处于主导地位。激素调节是体液调节的主要内容。

23．向光性实验发现：感受光刺激的部位在胚芽鞘尖端，而向光弯曲的部位在尖端下面的一段，向光的一侧生长素分布的少，生长得慢；背光的一侧生长素分布的多，生长得快。 生长素对植物生长的影响往往具有两重性。这与生长素的浓度高低和植物器官的种类等有关。一般说，低浓度促进生长，高浓度抑制生长。 在没有受粉的番茄（黄瓜、辣椒等）雌蕊柱头上涂一定浓度的生长素溶液可获得无籽果实。

24．垂体除了分泌生长激素促进动物体的生长外，还能分泌促激素调节、管理其他内分泌腺的分泌活动。下丘脑是机体调节内分泌活动的枢纽。 通过反馈调节作用，血液中的激素经常维持在正常的相对稳定的水平。相关激素间具有协同作用和拮抗作用。

25．（多细胞）动物神经活动的基本方式是反射，基本结构是反射弧（即：反射活动的结构基础是反射弧）。在中枢神经系统中，调节人和高等动物生理活动的高级中枢是大脑皮层。

26．神经冲动在神经纤维上的传导是双向的。在神经元之间的传递是单方向的，只能从一个神 经元的轴突传递给另一个神经元的细胞体或树突，而不能向相反的方向传递。

27．有性生殖产生的后代具双亲的遗传特性，具有更大的生活能力和变异性，因此对生物的 生存和进化具重要意义。 营养生殖能使后代保持亲本的性状。

28．减数分裂的结果是，产生的生殖细胞中的染色体数目比精（卵）原细胞减少了一半。减数分裂过程中染色体数目的减半发生在减数第一次分裂中。 减数分裂过程中联会的同源染色体彼此分开，说明染色体具一定的独立性；同源的两条染色体移向哪极是随机的，不同源的染色体（非同源染色体）间可进行自由组合。

29．一个卵原细胞经过减数分裂，只形成一个卵细胞（一种基因型）。一个精原细胞经过减数分裂，形成四个精子（两种基因型）。

30．对于有性生殖的生物来说，减数分裂和受精作用对于维持每种生物前后代体细胞染色体数目的恒定，对于生物的遗传和变异，都是十分重要的。

31．对于有性生殖的生物来说，个体发育的起点是受精卵。

32．很多双子叶植物成熟种子中无胚乳（如豆科植物、花生、油菜、荠菜等），是因为在胚和胚乳发育的过程中胚乳被子叶吸收了，营养贮藏在子叶里，供以后种子萌发时所需。单子叶植物一

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此，在机体内诱发出来的抗体也必然是多种抗体的混

合物，称为多克隆抗体, 这种抗体制剂在医疗中常常 发生非特异性交叉反应而出现假阳性结果。 根据Burnet的“克隆选择”学说，每个淋巴B细胞 克隆只能产生一种能识别特异性抗原决定簇的抗体， 这就是单克隆抗体 (monoclonal antibody, McAb)。

单克隆抗体是将抗体产生细胞与具有无限 增殖能力的骨髓瘤细胞相融合，通过有限稀释 法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细 胞系而产生的。

制备特定抗原的单克隆抗体，首先要制备用于免 疫的适当抗原，再用抗原进行动物免疫。

有的抗原可以用化学合成：地高辛

多数抗原物为混合物须经免疫、筛选、克隆化。

1975年，英国剑桥大学的 Kohler and Milstein 成功采用细胞融合技术， 使小鼠的脾细胞与小鼠的骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞 (hybridoma cells)，利用骨髓瘤细胞无限增殖能力，定向产生只作用于某一抗原决定 簇的McAb，这就是著名的杂交瘤技术(hybridoma technique)，被称为免疫 学的一场革命。

对小鼠免疫，刺激抗体产生

从脾中分离产生抗 体的细胞

组织培养的骨髓瘤细胞

产抗体的细胞与培养的肿瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞

杂交瘤细胞的筛选 克隆产抗体的杂交瘤细胞 分离单克隆抗体

第二节 单克隆抗体及其制备

一、抗原于动物免疫①

用抗原或免疫原对动物 (小鼠)进行免疫， 得到经抗原刺激产生的淋巴B细胞，用以同 骨髓瘤细胞杂交，是单克隆抗体制备的第 一步。 目前培养的骨髓瘤细胞株系多来自小鼠 或大鼠，选择的免疫动物也必须是那些与 小鼠或大鼠种系发生相近的动物，这样才 会克服杂交瘤细胞的不稳定性。

?

第二节 单克隆抗体及其制备

一、抗原于动物免疫②

?

体内免疫法 选择18-20周龄的雌鼠；选择抗原量较多、 且抗原的免疫原性强的免疫原。

① 颗粒性抗原 (细菌、细胞) 107个细胞，向小鼠腹部注射； 间隔1-3周，追加免疫1-2次。 ② 可溶性抗原10-100 ?g/只，加弗氏完全佐剂*，注射，间 隔2-4周，追加不加佐剂的抗原1-2次。 ③ 采集细胞前最后一次静脉注射抗原。

*弗氏完全佐剂 Freund’s Complete Adjuvant：在乳化油中悬浮被杀死的、干制 的分枝杆菌-人结核杆菌或“卡介苗” (Mycobacterium butyricum)细胞。与 抗原混合注射到动物皮下，抗原会缓慢而均匀地被释放出来，诱发动物免 疫系统高效而均一地产生抗体。

第二节 单克隆抗体及其制备

一、抗原于动物免疫③

?

体外免疫法 没有体内免疫条件，或抗原的免疫原性弱时采用。

① 选择4-8周龄的小鼠脾脏，用200目不锈钢网膜制成细胞 悬浮液；

② 加入抗原，使抗原在细胞悬浮液中的浓度控制在0.55.0 ?g/ml； ③ 37℃、5% CO2下培养4-5天，分离脾细胞。

第二节 单克隆抗体及其制备

二、细胞融合于杂交瘤的选择 ①

细胞融合

脾细胞 (1×108)

聚乙二醇 (PEG)

40-50%、Mr=4000

骨髓瘤细胞 (2-3×107)

为了增加融合率，可以在PEG 溶液中加入二甲基亚砜 (DMSO)

融合2分钟 用缓冲液缓慢稀释

注意：PEG和DMSO对细胞有毒，必须 严格控制二者同细胞的接触时间。可以 在融合前对混合细胞低速离心5分钟， 先使细胞之间接触紧密。

第二节 单克隆抗体及其制备

二、细胞融合于杂交瘤的选择 ②

杂交瘤细胞的筛选

融合处理后，混合溶液中可以产生5种细胞： 脾-脾、瘤-瘤、脾-瘤三种融合细胞， 脾、瘤两种非融合细胞。

必须使用“HAT选择”才能把其中的脾-瘤融合细 胞 (杂交瘤细胞)筛选出来。

?

什么是“HAT选择”？

HAT选择的基本原理与杂交瘤的筛选

HAT培养基因其中含有三种化合物而命名： Hypoxanthine Aminopterin Thymidine 次黄嘌呤： H 氨基喋呤： A 胸腺嘧啶核苷： T

H

HGPRT

HAT培养基用于排除两种基因型细胞： ① hgprt－：缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖 转移酶的细胞不能生长 (骨髓瘤细胞) ② tk－：缺乏胸苷激酶的细胞不能生长 (两 种细胞都不缺乏这个酶，没有选择效应) 小鼠骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞融合的HAT选择

前体分子

dGTP

A

在细胞融合程序中产生五种细胞：

dTTP

T

TK

骨髓瘤细胞： hgprt－，不能生长； 脾细胞： 体外HAT培养不能生长； 脾-脾融合细胞：体外HAT培养不能生长；

细胞中DNA合成所需的脱氧核苷酸 的合成路线及HAT选择原理

HGPRT 次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 hypoxanthineguanine phosphoribosyl transferase

瘤-瘤融合细胞：hgprt－，不能生长；

脾-瘤融合细胞：因脾细胞为hgprt＋，可生长；

TK 胸腺嘧啶核苷激酶(胸苷激酶) thymidine kinase

第二节 单克隆抗体及其制备

二、细胞融合于杂交瘤的选择 ③

?将融合后的混合细胞悬浮于HAT培养基中(附加饲养

细胞—小鼠腹腔巨噬细胞、脾细胞或胸腺细胞，这 些细胞释放的细胞因子有利于杂交瘤细胞的繁殖)， 置96孔板内培养6天(每隔2-3天换培养基1/2—2/3)；

?改用HT培养基（即不加氨基喋呤的HAT）培养8天；

?再改用RPMI1640完全培养基继续培养。

*融合后培养的第8-9天就可以对培养液的上清部分 进行抗体检测，逐步选出阳性克隆。

第二节 单克隆抗体及其制备

三、筛选阳性克隆与克隆化 ①

筛选：经过免疫，动物脾细胞中只有5%能够产生

抗体，只有这些细胞与骨髓瘤细胞融合后才 能产生杂交瘤细胞。

融合后的第8-9天，就必须对能够产生 抗体的杂交瘤细胞进行筛选。一般采用酶联 免疫吸附检验法 (enzyme –linked immunosorbent assay, ELISA)。 （P148 图4-3）

第二节 单克隆抗体及其制备

三、筛选阳性克隆与克隆化 ②

克隆：尽早克隆阳性细胞，利于杂交瘤细胞克服不稳定性。

有限稀释法：把阳性克隆悬浮液稀释到每个培养孔内只 有1个细胞；

软琼脂法：用5%的琼脂糖使培养基呈半固体状态，一 个细胞的克隆后代将形成一个细胞团块。但克隆过 程至少要重复3次，才能保证得到100%的阳性克隆。

? 经过这些步骤，得到的每一个克隆就是单细胞克隆。

第二节 单克隆抗体及其制备

四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ① 细胞学鉴定

染色体核型 chromosome karyotype

人的有丝分裂中期染色体显微图象及核型分析

(外周血白细胞培养染色体涂片)

第二节 单克隆抗体及其制备

四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ① 细胞学鉴定 ? 动物的染色体制片技术相对简单，在普通光学显微 镜下就可以确定染色体核型(chromosome karyotype) 。 ? 小鼠的染色体全部都是端部着丝点染色体，2n=40； 骨髓瘤细胞染色体数目大于40，2n＞40，并且有骨 髓瘤特有的标记染色体。所以，杂交瘤细胞的染色 体数目应该是两种细胞染色体数之和。

? 由于有HAT选择在前，用核型分析确定杂交瘤细胞 只有一个条件：2n≥80。

第二节 单克隆抗体及其制备

四、杂交瘤细胞抗体形状的鉴定 ② 抗体性状的鉴定

小鼠脾的淋巴B细胞是多克隆的，每个杂交 瘤细胞系产生的抗体都是由抗原的一个决定簇 诱发的单克隆抗体。必须对这些单克隆的淋巴 B细胞各自产生的抗体做免疫性状的鉴定。

杂交瘤细胞所分泌的抗体的生 物学特性的鉴定，要按照单克隆 抗体制备要求，进行各种指标的 鉴定。

第二节 单克隆抗体及其制备

五、单克隆抗体的大量制备 ① 动物体内诱生法： 选用杂交瘤亲本动物，腹腔注射有机溶剂降 植烷 (姥鲛烷 pristane) 0.5 ml，1-2周后注射杂交瘤 细胞1×106个，7-12天后分几次抽取生成的腹水， 离心取上清，冻存。

这个方法一般可获得抗体5-20 mg/ml，操作简 单经济。但由于腹水中有多种杂蛋白，给纯化带 来困难。

第二节 单克隆抗体及其制备

五、单克隆抗体的大量制备 ②

体外培养法：

?

用RPMI1640培养基，添加10-20%的胎牛或小牛血 清 (BSA)，直接体外培养杂交瘤细胞； 抗体产率达到5-20 ?g/ml； 如果用白蛋白、胰岛素、转铁蛋白、乙醇胺等混 合物代替小牛血清，可以减少支原体的感染，但 产率不高。

? ?

第二节 单克隆抗体及其制备

五、单克隆抗体的大量制备 ③

?

连续悬浮培养技术 微载体悬浮培养法，培养基添加DEAESephadex A50 (二乙基氨基乙基-葡聚糖)固体颗粒， “锚定” (anchoring) 杂交瘤细胞，利于旺盛生长；

?

?

细胞密度可达到107-108/ml，抗体产率可提高到 400-4000 ?g/ml。

第二节 单克隆抗体及其制备

六、单克隆抗体的纯化 ①

?

动物体内诱生法制备的单克隆抗体的纯化

⑴ 澄清和沉淀处理：

?

1,000×g 离心 5 min后取上清，除去红细胞、细胞碎块、 纤维蛋白凝块、脂质；再用20,000 ×g 离心 30 min，取 上清去除残留的小颗粒物质； 用 0.2 ?m微孔滤膜过滤：去除污染的细菌、支原体和脂 质； 用50%饱和(HN4)2SO4沉淀，可回收90%以上的单克隆抗 体。

?

?

第二节 单克隆抗体及其制备

六、单克隆抗体的纯化 ②

⑵ 分离：凝胶过滤、阴离子交换层析、免疫亲和层析

① 凝胶过滤：用Sephadex G200过柱分离，最 高峰为IgM类单克隆抗体，另两个峰值为IgG类。

样品自动被传输到样品瓶中， 然后被提取到定量环中，进入GPC 柱进行分析。高分子量的部分被洗 脱到废液瓶中，其他待分析物被收 集到样品瓶中，以便进一步分析 (或者进行在线蒸发)。

AS-2000凝胶过滤系统

第二节 单克隆抗体及其制备

六、单克隆抗体的纯化 ③

② 阴离子交换层析： ? 杂交瘤上清液: 澄清沉淀(调pH 5.5) ? 过EDAE-G (二乙基氨基乙基纤维素)柱，所有的 抗体都结合到柱上，同时除去了55%的杂蛋白。

? 用不同的pH值和不同离子强度的洗脱液洗脱不 同亚基的单克隆抗体。 ? 高容量、高流速、化学稳定的新型离子交换剂 适宜单克隆抗体的大规模纯化。

第二节 单克隆抗体及其制备

六、单克隆抗体的纯化 ④ ③ 免疫亲和层析：用固定化的A蛋白 (从金黄色葡萄球菌中 分离) ? 1 ml protein A-Sepharose CL-4B柱； ? 平衡缓冲液：1.5 mol/L Gly-NaOH (pH 8.9)，内含3 ml/L NaCl； ? 洗脱缓冲液：0.1 mol/L 柠檬酸(调不同pH值) pH 6.0 / IgG1 pH 4.5 / IgG2a pH 4.0 / IgG3 pH 3.5 / IgG2b pH 3.0 洗涤