甲苯胺蓝的简介
中文名称: 甲苯胺蓝
2,2'-[(9,10-二氢-4,8-二羟基-9,10-二氧代-1,5-蒽二基)二亚氨基]双(5-甲基苯磺酸)二钠盐
中文别名:氯托洛宁托洛氯铵
英文名称: Toluidine blue
Benzenesulfonic acid, 2,2'-[(9,10-dihydro-4,8-dihydroxy-9,10-dioxo-1,5-anthracenediyl) diimino]bis(5-methyl-, disodium salt
Dimethyl toluth ionine, chloride
CAS: 92-31-9
EINECS号:202-146-2
分子式: C28H20N2O10S2·2Na
分子量:305.8256 (一)1.甲苯胺蓝液
甲苯胺蓝0.5g蒸馏水定容至100ml
2.冰醋酸液
冰醋酸0.5ml蒸馏水定容至100ml
染色步骤
1.组织切片常规脱蜡至水
2.入甲苯胺蓝液30min
3.稍水洗
4.入冰醋酸液分化,直到胞核和颗粒清晰。
5.稍水洗,用冷风吹干
6.二甲苯透明,中性树胶封固
(二)
①切片脱腊至水。
②蒸馏水浸洗3次。
③0.1%甲苯胺蓝液浸染10min。
④水洗,洗去多余染液。
⑤各级酒精脱水。
⑥二甲苯透明,中性树胶封固。
试剂的配制
称取0.1g甲苯胺蓝,溶于100ml 0.1M醋酸盐缓冲液中,置室温5天后,即可使用染液于室温下可保存3个月,若放于4℃冰箱则可保存半年左右,但该液的染色效果在早期为最佳,若染液存放时间较长,则染色偏淡,应适应延长染色时间。
尿液有形成分(urine formed element)是指来自泌尿道,并以可见形式渗出、排出、脱落和浓缩结晶所形成的物质的总称。
尿液中显微镜检查可见的有形成分种类非常多,可分为有机成分和无机成分两大类。一些成分具有明确的病理意义,如细胞、管形、寄生虫等具有明确诊断价值;另一些为生理性排出的成分,如各种生理性结晶、上皮细胞等,这些成分在某些情况下具有辅助诊断价值。
尿有形成分染色方法及其选择
国内外有的作者不提倡沉渣染色检查。或提出将染色作为特殊检查与“常规”沉渣检查分列;染色方法少则2种,多的可达10多种。为便于叙述,现将染色法归纳为单染、复合染色、活体染色、鉴别染色及特殊染色等五种。
2.1 单染法 即单一染色液染尿中有形成分的方法,如在湿的尿沉渣片(简称湿片)中加入2%醋酸1滴可破坏红细胞,鉴别酵母菌孢子外,还可清楚见到白细胞核。湿片中加一滴Lugor碘液,上皮细胞染淡黄而白细胞深染,管型也着色。以蓝色染料有0.5%~ 1%亚甲蓝、2%考马斯亮蓝、品蓝等,我们感到蓝染料单一而后者细胞不易着色,但粘液丝蓝色可辨。欧洲尿液检查文件推荐应用0.5%甲苯胺蓝认为有对胞核结构染色清晰的优点,崔建和用2%孔雀绿观察了36例小儿急性肾炎发现红细胞管型清晰。其他的单染值得注意的是胆汁,因在严重肝病黄疸尿中,尿中各种染色结构分明易于识别,因而没想用天然的胆汁染“湿片”是否可取?
以上列举的几种单染法有试剂单纯、易得、低廉且易于配制,染色简便、易于推广等优点,但缺点为染色单一,对核、胞质不易鉴别,分色及渗透性差,高浓度染料放置后形成沉渣,因此最好用小包装,分装染色前滤过残渣以免干扰染色视野。
2.2 复合染色 用两种或两种以上染色法或加助染剂的染色法。最常用的尿沉渣在玻片干燥后(简称干片)使用瑞-吉氏联合染色,由于与血片染色同步,各实验室易于实施及推广。北医大一院1987年用本法计数尿沉渣中性粒细胞的百分比以70%为界区别感染及非感染。但干片需时长,干燥片时细胞易变性及形态变化,与湿片比较细胞、管型易溶解和变形;在有形成分少的干片上如不加血清固定,则易因冲洗不易看到其中有形成分。瑞氏染色还受pH值、温度等因素影响,不易看清肾小管上皮细胞结构。据多种文献介绍,认为巴氏(Papanicolaou)染色为最佳复合染色法,不仅分色良好,有形成分结构清晰,且对尿中异形细胞如肿瘤细胞易于分辨;Schumann在肾细胞病理染色为首选方法,但因染料品质要求高,采用多种染料、多次脱水手续繁杂,因而很难普及。
2.3 活体染色法 简便易行的有1%灿烂甲酚蓝(煌焦油蓝)易在各单位实施,但也具备上述单染法的问题。Sternheimen-Malbin(S-M)即龙胆紫-沙黄染色染料价廉易得,染色方便,已成为国内外介绍最多的染色方法。早在60年代的专著中对染料配制染色方法已有详细介绍,通过S-M染色红细胞可染成淡蓝色,多形核白细胞染成橙红色,在有的白细胞胞质中见颗粒呈Brown分子运动定名为闪光细胞。据报道如在白细胞中>10%,对确定肾盂肾炎有助。透明管型呈粉红或淡紫色细胞管型染成深紫色,但本法试剂配制后易产生沉渣,且对尿有形成分鉴别作用不够强,因而欧洲文件建议用Alicianblue 8G-Pyronin B组合即Sternbeimer(S)染色法取代,国内也有SM染色及S染色法染色结果对比表的介绍。其他复合染色如Kage 染色法,采用醋酸酮、8-羟喹啉联苯胺组合鉴别白细胞,但后者为致癌物,不再推荐。还有Lippman染色法用饱和苦味酸、甘油、美蓝、伊红等染料,但染料组合后易产生紫褐色细颗粒干扰染色。
2.4 鉴别染色 按不同染色法以鉴别尿中不同成分,如用油红-O或苏丹-Ⅲ染脂肪,Hansel染色染嗜酸粒细胞脂酶,Naphy-ASD染色查单核细胞,Gram染色法染细菌,普鲁士蓝染含铁血黄素等,这些染色在国外已列入规程要求达到规范化、程序化及标准化,在尿有形成分染色中发挥鉴别作用,因此在国内建议借鉴应用在实验检查中有利于对尿颗粒的识别。
2.5 特殊染色法 为近年来在自动尿有形成分检查推广的染色法,土在自动尿有形成分细胞仪(UF-100、UF-50)应用的快速的尿颗粒成分检查。UF系列将染料Uninosearch即含2种类型的荧光染料:羰化青及菲啶使尿颗粒着色后,经激光照射,检测着色颗粒前向散射光和不同荧光强度,提供尿中颗粒大小及染色敏感性的信息。本法有不需离心,方法统一可比性高,易进行质量管理可同时完成红细胞、白细胞、细菌(酵母菌)等多项检测,因而是尿分析的重大改革。采用荧光染料在荧光显微镜下观察肿瘤细胞,用扫描、透射电镜观察细菌管型。另外采用免疫组化染色识别管型来源,便于对急性肾小管坏死,急性间质性肾炎,新月型肾炎特殊肾疾病提供了无需活检的鉴别实验,本法实验需针对肾细胞、管型的各种单克隆抗体,实验难度大,因而报道不多。
Grupp C等报道在丙酮固定后鉴别非鳞状上皮核的凝集素染色法即通过免疫荧光检查提供了一种鉴别尿中有核细胞的可靠方法,Grunewald-R-W等观察了41例肾移植排斥反应病人,用流式细胞仪观察尿中淋巴细胞CD3、CD4、CD8、CD14及单核巨噬细胞,提供了一个对急性肾排斥反应有参考价值的尿有形成分染色法。
尿有形成分虽有一定进展,我们初步介绍了各种鉴别尿中颗粒的染色法,特别是自动分析仪--流式细胞仪,半自动定量分析板等均采用染色技术提高鉴别力证明了染色的重要性。通过上述方法介绍及选择原则,各种染色法各有特点。在基层实验室应用复合染色或活性染色比单染效果好,肾科用免疫荧光提高识别力,而鉴别染色有助于对尿中 不同颗粒的识别。如何进一步完善染色法对染液进行质量管理,并对染色方法规范化、标准化,是今后值得深入探讨的。还有一个重要的问题是如何将尿有形成分染色法用于肾、泌尿道及其他疾病病人的防治工作,加强临床及实验室的联系,为临床服务,也是实验室工作人员应经常考虑到的。
甲苯胺蓝是常用的人工合成染料的一种,属于醌亚胺染料类,这类染料一般含有两个发色团,一个是胺基,一个是醌型苯环,来构成色原显色。染料除有发色团外,还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和力的原子团即助色。助色团能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,为碱性染料,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色,可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测,例如色素性寻麻疹。
甲苯胺蓝染色,软骨呈鲜艳的紫色(紫红色),其他为浅蓝色,能够清楚地显示软骨形态潮线等结构,观察软骨组织是否有损伤。
甲苯胺蓝是常用的人工合成染料的一种属于醌亚胺染料类,是碱性染料,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色,可染细胞核使之呈蓝色。
注意事项
1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。样品数量很多时,可使用染色架和染色缸,以便于操作。
2、本产品为1%浓度水溶液,具体使用浓度可自行稀释。
3、由于温度对染料的溶解度与着色力有很大的影响,若快速染色,当室温较低时,可以适当加温。
以上内容参考:百度百科-甲苯胺蓝
甲苯胺蓝 是常用的人工合成染料的一种属于醌亚胺染料类,是碱性染料, 甲苯胺蓝 中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色,可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色,可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测。不推荐用于软骨、胃粘膜等难染组织的染色。
肥大细胞的染色:
(1)组织脱蜡至水。
(2)蒸馏水浸洗2-3次。
(3) 甲苯胺蓝染液 染20-30min。
(4)稍水洗,洗去多余染色液。
(5)95%酒精分色,在镜下控制分色效果。
(6) 用100%酒精脱水。
(7) 二甲苯 透明, 中性树胶 封片。
肥大细胞染色结果:肥大细胞颗粒呈红紫色,胞核呈蓝色。
细胞涂片染色 :
(1)细胞涂片后,立即放入95%的乙醇中固定,取出放在纸巾上。
(2)滴加1~2滴稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,加盖玻片让染料渗透到细胞中。
(3)后将玻片竖起,稍加压力,使多余染料被纸巾吸去。
(4)无需干燥,直接镜检。
细胞涂片染色结果:细胞核、淋巴细胞呈深蓝色;核仁呈紫红色;红细胞呈橘红;细胞质、单核细胞呈淡蓝色。
原位杂交染色 :
(1)用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度,凭经验一般稀释比例大于1:10。
(2) 玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。
(3) 在蒸馏水或去离子水浸泡数次。
(4) 按需求进行压片固定。
神经元细胞的染色:
(1)将载有细胞的玻片取出放入4%多聚甲醛中固定1h左右;
(2)到时间后取出用PBS冲洗1~2次即可;
(3)然后加入提前预热的1%甲苯胺蓝溶液,在50度左右的气浴或水浴中染色20~30min;
(4)用梯度酒精已次脱水,分别为75%、90%、100%,也可自定梯度;
(5)在镜下控制分色效果,这一步不太好掌握;
神经元细胞染色结果:可见尼氏小体深蓝色颗粒,细胞核呈淡蓝色,背景基本无色。
北京索莱宝科技有限公司 自产产品 1%甲苯胺蓝染色液 ,货号为 G1220 ,主要用于生化实验中肥大细胞的检测。
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我摘录了其中的一种
尿有形成分检查又称尿沉淀检查(examination of urinary sediments),是将新鲜尿离心后,经显微镜检查尿沉淀物中种有形成分的检查方法[1]。由于仪器分析进展,现代的尿有形成分检查可采用不离心法,用激光荧光染色及流式分析方法,(Sysmex UF50,UF100)或使用计算机图像自动识别系统(Iris IQ200)来计数尿中各种颗粒,因而又可称为尿中颗粒计数法(particle analysis)[2]。目前国内大多数医院实验室仍习惯于传统的普通显微镜检查法,由于在尿中可存在多种有形成分如细胞类、管型类、微生物类、结晶类等,为了进一步识别及鉴别为些成分除用普通光学显微镜外还有相差显微镜、偏光显微镜、荧光显微镜、干涉显微镜及电子显微镜等检查,而在普通显微镜检查又可分为染色及非染色法。非染色法检查是最简单又最常用的检查法。尿有形成分检查的重要性在于它是尿分析中不可缺少的检查手段,对临床诊断,治疗监测及健康普查有重要的临床意义。可确定进入尿路中的细胞种类如红细胞增多提示尿路出血,进一步检查红细胞形态则有助于确定出血是来自肾小球或下尿路;白(脓)细胞增多提示尿路感染;不同的尿路上皮细胞增我有助判断各种尿路病变部位;管型增多常提示肾小球肾炎、肾小管(远端、集合管病变)及肾功能减退;发现代谢或药物来源的结晶也有重要的临床价值[3]。
一、尿有形成分检查方法
检查尿有形成有多种方法下面简述8种方法要点便于比较及选择:
1. 传统的离心法:1997年全国临床检验操作规程[4](第2版)对非染色尿沉渣镜检及染色沉渣镜检操作规程作了明确规定,但在操作中未注明离心机种类只规定了1500r/min离心5min,也未规定必须注明留尿时间送检时间,结果判断和报告方式,显微镜观察10×10看管型,10×40,10个视野中看到细胞的最低和最高值,而观察管型应用高倍镜鉴定,但计数数量按低倍镜观察20个视野,算出一个视野的平均值记录结果,笔者曾在三级、二级及基层医院查证尿液登记簿,发现多数医院仍用斜形离心机3~5min,有的医院不离心将尿杯或试管内尿液沉渣直接倒到玻片上(不加盖片)不采用定量玻板计数发报告,而报告方式仍采用传统的加号(-、+、++、+++、++++),管型、上皮细胞不分类,报告少许、+、++,病房尿液常可在送检前数小时留出(规程则明确规定清晨空腹1次尿,应在1h内送检)这种传统方法随意性、变动性大,受操作者主观影响,判断不标准、结果不统一,无可比性,由于报告方式因人而异,是应淘汰的缺乏标准化的实验方法。
2. 标准镜检法:鉴于以上情况中华医学会检验分会临床检验学组在2002年召开3次尿镜检检查标准化会议,提出了尿沉渣检验标准化建议[5]。建议对材料和器械、标本和收集及运送、尿沉渣检验的操作步骤、应报告的尿沉渣内容等均进行明确规定。如容器、离心管、尿沉渣计数板、离心机(水平式)相对离心力应在400×g左右,显微镜则要求有内置光源,光线强度可调,应具备40倍、10倍的物镜和10倍的目镜。并对标本收集运送,标本接收均用了明确规定,本法适合在各级医疗单位中推广,添置Fast-Read-10或Kova板即可完成。由于操作统一,结果准确,报告一致,因而是值得推荐的尿沉渣检查法,问题是如何建立质量保证体系,开展室内质控、紧密联系临床及室间质评,定期开展沉渣专业培训,使尿沉渣的识别达到熟练化,不漏掉病理有形成分的要求[5]。
3. 尿液有形成分染色检查法:尿液有形成分染色的作用是:(1)防止漏栓;(2)防止误诊;(3)防止因长期镜检而造成的疲劳;(4)为长期保存尿中典型的病理成分,为提供教学、科研的图谱创造条件。尿液有形成分的染色体方法,可分为:①单染法;②复合染色;③活休染色;④鉴别染色;⑤特殊染色等[6]。日本伊藤机一推荐标准采尿法及4种染色法。NCCLS公布的尿检查方案Gp16A[7]中提到“染色法非常有助于细胞及管型鉴别”提倡用Malbin染色(结晶紫与沙黄法)及0.5 %甲苯胺蓝(Toluidine),同时列出鉴别尿中万分的特殊染色法有:①脂肪及卵圆脂肪体:油红或苏丹III②细菌:格蓝染色及巴氏染色[7].欧洲尿分析小组引用了Sternheimer染色,阿利新蓝-派洛林(Alcian-blue-pyronin B)[2]优于Sternheimer-Malbin染色.我们的尿液实验室也证实了S染色能弥补S-M染色易沉淀多染色深的缺点,是6种染色法中最优者[8].文献中也有用过氧化物酶染色来鉴别粒细胞管型、单核淋巴管型、淋巴细菌管型及肾小管上皮细胞管型[9].
4. 尿中颗粒过滤法:将一定量尿液(20~100ml)通过特殊滤网可以滤过并在滤过网上留住管型、细胞等病理颗粒[10],也有通过滤过网将红细胞置电镜是观察形态[11]。我们也见到德国波恩大学医院泌尿实验室采用特殊注射器加滤过网的商用产品问世。可惜因滤过网的万分必须染色识别,某些细胞在染色后溶解,加上此法价昂,因此难以普及[12]。
5. 不离心尿在细胞计数池上计数的快速过筛法:直接将不离心尿液置于尿细胞计数池内,在全国临床检验操作规程中作为定量过滤法介绍,在欧洲不予推荐,因结果不敏感,加上不是标准化的检测方法,故结果不稳定[2]。但是笔者曾经在上海第六人民医院应泌尿滴入改良牛鲍(Neubauer)血球计数池内观察5大格×2得出每ul细胞数,可快速取得实验结果,泌尿科医师认为以病情观察、疗效判断、病情走向趋势有利。但是在国外强调全液检查可采用浓度为0.2mm(总面积0.0625mm2)的Fuchs-Rosenthal板,视野宽广而结果更为准确可靠[2].
6. 尿沉渣工作站:工作站是将摄像显微镜、尿沉渣计数板及电脑三者联合一体化,如普利生AMP-2000U,华鑫DiasysR/S、合肥新月SQ-3000、美德太增洋、重庆天海US2020、北京国联在线的QO-S染色尿沉渣分析仪及千盛QS8005型流程式尿沉渣分析仪等,近见朗克斯LX-3000,包括标准这亘流动计数室、全种键盘控制\标准条形码识别、自动清洗、自动进样、出报告时可拷贝出一个视野图片).不论那个厂商生产的尿沉渣工作站,应强调标准化,即在留尿标本量、离心力、离心时间、沉渣留取量、显微镜镜头(最好配相差镜头) 、报告方式与标准镜检法要求一致,此方法优点在电脑报告定量结果,存在问题是如何提高检测速度?流动计算机板的清洗干净,要去除蛋白污垢,计数和辨认完全自动化,避免主观因素影响等.
7. 荧光染色流式细胞分析法:Sysmex公司生产UF50、UF-100尿沉渣流式细胞仪是利用沉渣中有形成分DNA与细胞膜与菲啶、羰化氰两种荧光染料接触后通过鞘流进行激光照射,各胡形成分产生前向散射光强度和荧光脉冲宽度,又通过电阻抗测出红细胞、血细胞大小散点图、直方图,仪器可自动报告红细胞、白细胞、上皮细胞、管型、细菌5个定量参数及小圆上皮细胞、霉菌、病理管型、结晶及精子5个定性参数,还可测出尿液电导率指标。由于无须离心,检测速度快,病理成分敏感度及重复性好,再由于每份尿样本检测步骤模式一致便于质量控制(有标准检测颗粒)及标准化,如与干化学试条联合应用还可以通过计算机处理观察两者间符合程度,临床上用于血尿鉴别、确定泌尿感染、了解肾功能等受到重视。仪器不足之处价格偏高,不能检测出滴虫、脂肪滴、病理及药物结晶,也不能识别病毒包涵体或肿瘤细胞;当尿中存在大量细菌、酵母菌、结晶等颗粒可干扰红细胞计数结果;也不能在影像中识别影红细胞及各种病理管型[13]。
8. 体外诊断尿影像系统-全自动智能显微镜(AIM):1983年由IRIS公司推出Yellow IRIS显微镜工作站,将尿液中各种颗粒在AIM通过影像并经电脑处理在荧光屏上显示。该公司在2000年推出改进大型939UDX全自动尿液分析仪后于2002年通过美国食品药品管理局(FDA)认证的小型IQ-200系统。包括了专利的无玻片显微镜及独特的高速码软件,易观察(easy-to-view)屏幕上清楚地尿中常见各种颗泣即白细胞、白细胞团、红细胞、鳞状上皮细胞、非鳞状上皮细胞、透明管型,未分类管型、结晶、细菌、酵母菌、精子及黏液。并可根据操作人员需要对鉴定结果进行修改以区分尿中有形成分的亚类,IQ-200原理先进,它综合了尿中各种颗粒的大小、对比度、外形及质地等技术参数,由灵敏度高的计算机判断出该颗粒的性质,据初步报道IQ-200总体灵敏度为83%(其中红细胞89.4%、白细胞93.9%、细菌93.9),总体特异性为83.3%(其中红细胞89.2%、白细胞88.8%、细菌88.1).使用IQ-200显微镜复查率可<5%(UF常>20%),但本法对各种细胞管型是否需要进一步染色鉴定,如嗜酸粒细胞用Hansel染色.脂肪管型用苏丹III染色尚未解决.因用计算机处理染色后颗粒难度加大,本仪器体积小、轻便、屏幕上显示多种病理颗粒,也有相关质控粒子配套,但观察本仪器未见压力鞘流系统,缺少染色直观资料,厂商在展览会提示456份尿标本与UF-100对照检查.IQ-200发现14份病理管型UF-100检出12份,因而认为敏感度特异度更高,但是尚需较大范围同更严格的临床实验室对比观察[
二、尿有形成分的识别
尿中有成分多达45种以上,常见
1. 红细胞:尿中典型红细胞呈双凹圆盘形、浅黄色、直径约8um易于识别,但由于尿中颗粒复杂多样,尿红细胞可因温度高、时间长、pH改变、渗透压变化发生形态改变,对经验不足的检验人员应与酵母样真菌、真菌孢子、脂肪滴、淀粉颗粒、草酸钙结晶、尿酸盐结晶及精子头等鉴别.通过对新鲜红细胞用相差显微镜观察可将尿中红细胞分成均一型、变形型及混合型.
2. 白细胞:尿中细胞主要为中性粒细胞,偶见单核细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞.新鲜尿中,白细胞外形完整,圆形直径10um~14um,胞质内颗粒可见,胞核清晰常可分散存在,在低渗及碱性尿中白细胞常胀大,约半数可在2h内溶解,在高渗及酸性尿中白细胞常皱缩,陈旧尿中白细胞浆因均质化呈明胶状,炎症时变性死亡白细胞外形多不整齐,结构模糊,胞质内可充满粗大颗粒,核结构不清,细胞常粘成团、胞界不清,称脓细胞.白细胞通过活体染色可区分为:(1)浓染细胞:着色深为老化或死亡白细胞(2)淡染细胞:细胞着色较浅为活性白细胞.可见于尿比重>1015时(3)闪光细胞:在低渗尿中,中性粒细胞变大,胞质内有分子运动,因光折射时可见闪光现象,尿有形成分中白细胞,肾小管上皮细胞与底层移行上皮细胞的鉴别 3. 管型:为尿有形成分中有重要意义成分,其数量种类组成形成大小与肾实质性病变的诊断、治疗观察、予后判断有一定价值.常见的3种细胞管型即红细胞管型、白细胞管型及上皮细胞管型
结果:在胃粘膜腺上皮表面,腺腔内均可见到幽并肩战斗让螺杆菌(HP),有的呈弯曲杆状或逗点状,HP可散在出现,也可成团聚集出现,这要根据不同病例而异。试剂的配制:称取0.1g甲苯胺蓝,溶于100ml
0.1M醋酸盐缓冲液中,置室温5天后,即可使用染液于室温下可保存3个月,若放于4℃冰箱则可保存半年左右,但该液的染色效果在早期为最佳,若染液存放时间较长,则染色偏淡,应适应延长染色时间。