壳聚糖水溶液中含有硫酸根能透析出去吗
壳聚糖水溶液中含有硫酸根能透析出去
由于甲壳素大分子中具有稳定的环状结构和大分子之间存在强的氢键作用,使它的溶解性能变差,不溶于水、稀酸、稀碱和一般的有机溶剂中。甲壳素在浓硫酸、盐酸、硝酸和85%磷酸等强酸中可溶解,但与此同时会发生剧烈的降解,使相对分子质量明显降低。甲壳素的溶剂主要有六氟丙酮、六氟异丙醇、甲酸-二氯乙酸、三氯乙酸或二氯乙酸与含氯烃类的混合物、二甲基乙酰胺-氯化锂、N-甲基吡咯烷酮-氯化锂混合溶剂等。甲壳素在这些溶剂中均能被溶解并可制成具有一定浓度的稳定溶液。 在壳聚糖分子中由于存在大量的—NH2基和—OH基,使其溶解性能大大优于甲壳素。壳聚糖能溶解在甲酸、乙酸、盐酸、环烷酸和苯甲酸等稀酸,从而可制成均匀的壳聚糖溶液。在酸性水溶液中,壳聚糖分子中的氨基、羟基等极性基团与水分子相互作用而水合。水合后壳聚糖分子逐渐膨胀,且随水合作用的程度壳聚糖分子的形状发生变化。完全水合的壳聚糖可形成球状分子。分子形状随溶液的pH值变化而发生变化。pH值的不同使氨基(—NH2)的电荷状态发生改变,pH值低时,壳聚糖从链状向球状分子变化,粘度减少,;pH值高可使壳聚糖从球状向链状分子变化,粘度加大。粘度除了受氨基含量及溶解时pH值的影响外,还与温度、壳聚糖相对分子质量及溶液中离子的种类有关。 甲壳素与壳聚糖均可在合适的溶剂中溶解而被制成具有一定浓度、一定粘度和良好稳定性的溶液。这些溶液分别通过喷丝装置喷入各自的凝固剂中凝固成纤维,经适当后处理即可获得强度较高的纤维。如将上述溶液分别涂布在玻璃板上,经凝固、洗涤、干燥后可制作透明的薄膜。这种薄膜具有较大的透气性和透湿性,手感柔软,具有良好的弹性和强度,可用作透析膜、分子过滤器和反渗透膜等。
透析袋检漏:透析袋一端用夹子夹紧(或用绳子扎紧),灌满水后,用手指适当加压,检查不漏,方可装入样品。
样品装袋:先用缓冲液溶解蛋白质,然后装在透析袋里,透析袋不要装满,通常要留三分之一至一半的空间,因为透析时会有水分子进去,如果装得太满的话透析袋可能会胀破,将袋子剩余空间的空气排出去后,加样端用夹子夹紧。
透析:将溶解蛋白质缓冲液作为透析液加入一个大烧杯中,里面放入一个搅拌子,把装有样品的透析袋放进透析液中,使透析袋处于悬浮状态,把装置放到磁力搅拌器上使搅拌子缓缓转动,注意不要让搅拌子打到透析袋上,即可进行透析。为了保证蛋白活性,最好放到冰箱的冷藏室中透析,为加快透析速度,要多次更换透析液外,还需注意透析袋内液体的量。
可用氯化钡溶液检验透析液,如果有沉淀说明还有硫酸根存在,还需继续透析。
透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜,而大分子物质不能通过半透膜的性质,达到分离的方法。例如分离和纯化皂甙、蛋白质、多肽、多糖等物质时,可用透析法以除去无机盐、单糖、双糖等杂质。反之也可将大分子的杂质留在半透膜内,而将小分子的物质通过半透膜进入膜外溶液中,而加以分离精制:透析是否成功与透析膜的规格关系极大。透析膜的膜孔有大有小,要根据欲分离成分的具体情况而选择。透析膜有动物性膜、火棉胶膜、羊皮纸膜(硫酸纸膜)、蛋白质胶膜、玻璃纸膜等。油常多用市售的玻璃纸或动物性半透膜扎成袋状,外面用尼龙网袋加以保护,小心加入欲透析的样品溶液,悬挂在清水容器中。经常更换清水使透析膜内外溶液的浓度差加大,必要时适当加热,并加以搅拌,以利透析速度加快。为了加快透析速度,还可应用电透析法,即在半在半透膜旁边纯溶剂两端放置二个电极,接通电路,则透析膜中的带有正电荷的成分如无机阳离子、生物碱等向阴极移动,而带负电共荷的成分如无机阴离子、有机酸等则向阳极移动,中性化合物及高分子化合物则留在透析膜中。透析是否完全,须取透析膜内溶液进行定性反应检查。
用鸡蛋膜,能够透析含在植物蛋白里面的硫酸铵。
鸡蛋膜,是一种天然的半透膜。半透膜:一种带有小孔的薄膜。分子大小,小于小孔直径的,可以通过;分子大小,大于小孔直径的,不能够通过。这正是半透膜选择透性的基本原理。小分物质可以通过,大分子物质不能通过。
硫酸铵,是一种小分子的物质,可以通过鸡蛋膜。而植物蛋白质,是一种大分子物质,是无法通过鸡蛋膜的。
正是利用这个原理,才可以用鸡蛋膜透析含在植物蛋白里面的硫酸铵。
盐析法是在中药水提液中,加入无机盐至一定浓度,或达饱和状态,可使某些成分在水中溶解度降低,从而与水溶性大的杂质分离。
胶体的盐析是加盐而使胶粒的溶解度降低,形成沉底析出的过程,是胶体的聚沉现象的一种。
透析法是利用小分子物质在溶液中可通过半透膜,而大分子物质不能通过半透膜的性质,达到分离的方法。
透析袋的原理:透析是指溶质从半透膜的一侧透过膜至另一侧的过程,任何天然的(如腹膜)或人造的半透膜,只要该膜含有使一定大小的溶质通过的孔径,那么这些溶质就可以通过弥散和对流从膜的一侧移动到膜的另一侧。人体内的毒物包括代谢产物,药物,外源性毒物,只要其原子量或分子量大小合适,就能够通过透析清除体外。其基本原理是弥散和对流。弥散就是半透膜两侧液体各自所含溶质浓度梯度及它所形成的不同渗透浓度,溶质从浓度高的一侧通过半透膜向浓度低的一侧移动。对流也称超滤,是指溶质和溶剂因透析膜两侧的静水压和渗透压梯度的不同而跨膜转运的过程。
透析袋的使用方法
使用前处理:
1. 把透析袋剪成适当长度(10-20cm)的小段。
2. 在大体积的2%(W/V)碳酸氢钠和 10mmol/L EDTA(pH8.0)中将透析袋煮沸10分钟。
3. 用蒸馏水彻底清洗透析袋。
4. 放在 1mmol/L EDTA(pH 8.0)中将之煮沸10分钟。
5.冷却后,存放于4度,必须确保透析袋始终浸没在溶液内。从此时起取用透析袋是必须戴手套。
6. 用前在透析袋内装满水然后排出,将之清洗干净。
盐析操作注意事项
1. 盐析的成败决定于溶液的pH值与离子强度,溶液pH值越接近蛋白的等电点,蛋白质越容易沉淀。
2. 盐析一般用的硫酸铵,容易吸潮,因而在使用前,一般先磨碎,平铺放入烤箱内60摄氏度烘干后再称量,这样更准确。
3. 在加入盐时应该缓慢均匀,搅拌也要缓慢,越到后来速度应该更注意缓慢,如果出现一些未溶解的盐,应该等其完全溶解后再加盐,以免引起局部的盐浓度过高,导致酶失活。
4. 盐析后最好搅拌40分钟到一个小时而且再在冰浴中放置一段时间。3.5为了避免盐对酶的影响,一般脱盐处理后再测酶活性。
5. 盐析后的蛋白质最好尽快脱盐处理,以免变性,透析较慢,一般可用超滤或者G-25,G-50 处理。
6. 一般粗提物蛋白完全沉淀是在硫酸铵浓度在70%左右。