血琼脂平板原理
血琼脂平板原理一、实验目的和要求
(1)掌握血液琼脂培养基(血琼脂培养基)的制备方法，明确血液琼脂培养基的用途。
(2)巩固掌握一般培养基和选择性培养基的配制方法和原理。
二、基本原理
血液琼脂培养基可用于分离营养要求高的微生物。一些病原性真菌或放线菌等难养微生物，对营养要求高甚至十分苛刻，而动物血是微生物生长繁殖的优良营养物。研究证明，在45～50℃时加入血液可以保存其中某些不耐热的生长因子，促进微生物生长。血液琼脂培养基也可用于溶血实验。
三、实验材料与设备
(1)培养基：牛肉膏朊胨培养基，见天然培养基——牛肉膏朊胨培养基的制备。
(2)仪器或其他用具：装有5～10粒玻璃珠(Φ≈3mm)的无菌三角烧瓶、无菌注射器、无菌平皿等，其他仪器或用具与天然培养基——牛肉膏朊胨培养基的制备相同。
(3)动物：健康的兔或羊。
四、操作步骤
(1)牛肉膏朊胨培养基的制备见天然培养基——牛肉膏朊胨培养基的制备部分。也可用豆粉琼脂(pH=7．4～7．6)等营养丰富的基础培养基配制血液琼脂培养基。
(2)无菌脱纤维兔血(或羊血)的制备：用配备18号针头的无菌注射器以无菌操作抽取全血(即未经处理的静脉抽血)(无菌采血操作)，并立即注入装有无菌玻璃珠(Φ≈3mm)的无菌三角烧瓶中，然后摇动三角烧瓶1．0min左右，形成的纤维朊块会沉淀在玻璃珠上，把含血细胞和血清的上清液倾人无菌容器即得到脱纤维兔血(或羊血)，置冰箱4℃存储备用。
注意：整个过程必须严格无茵操作。制备脱纤维血液时，应摇动足够时间以防凝固。也可以直接购买脱纤维兔血(或羊血)。
(3)血液琼脂培养基的制备：将牛肉膏朊胨琼脂培养基溶化，待冷却至45～50℃时，以无菌操作方式，按10％(体积分数)的量加入无菌脱纤维兔血(或#血)于培养基中，立即摇荡，以便血液和培养基充分混匀。根据具体情况，还可以考虑是否加入10g／L的葡萄糖。
45～50℃加入血液是为了保存其中某些不耐热的营养物质和保证血细胞的完整，以便于观察细菌的溶血作用；同时，在这种温度下琼脂不会凝固。
(4)迅速以无菌操作倒入无菌平皿中，即成血液琼脂平板，注意不要产生气泡。
(5)置37℃培养箱24h，如无菌生长即可使用。
血琼脂平板
培养基
商品名称：血平板培养基
英文名称：Blood Agar
血平板培养基又叫做血平板、血琼脂平板培养基，主要用于链球菌及其他苛养菌的分离、培养及溶血活性的检测。可用于临床标本的分离、培养
检验结果
1、溶血性链球菌通常呈现透明或半透明的灰白色小菌落（直径1mm左右），或是较大的、粗糙的、黏液样菌落（直径2~4mm）。菌落周围环绕这溶血环，α-溶血的链球菌呈现半透明草绿色溶血环，β-溶血的链球菌呈现透明溶血环。为了确认是否为链球菌，还应进行革兰氏染色观察，因为一些非链球菌也可在血平板培养基上形成溶血环（如大肠杆菌、铜绿假单胞菌、李斯特氏菌和溶血性葡萄球菌等）。血平板培养基上溶血性链球菌的菌落数量对临床诊断有一定参考价值。
2、葡萄球菌通常呈现不透明的白色或金黄色菌落，周围环绕透明溶血环（β-溶血）或没有溶血环。
3、李斯特氏菌可产生较小的β-溶血环，但是可通过革兰氏染色和动力试验与链球菌区分。
4、血平板培养基为非选择性培养基，大多数非苛养菌都可生长。
制法：取营养琼脂（ph7．6），加热使其溶解待冷至45-50℃，以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀，立即倾注于平板或分装试管，制成斜面备用。
用途：1．
一般棉拭子均接种此培养基。
2．尿液，脓液
3．分离细菌标本用。
【型号】7cm/9cm平皿，
【包装规格】10个×2盒
或10个×4盒
【用途】该培养基用于一般病原菌的分离培养和溶血性细菌的鉴别。
【性能原理】绵羊血或兔血是微生物生长繁殖的良好营养物质，在45-55℃的基础培养基中加入血液可以保存血液中某些不耐热的生长因子，促使细菌生长繁殖,由于红细胞不破坏,有利于观察溶血，可对细菌作初步鉴别。
【试剂成分】特殊蛋白胨
淀粉
氯化钠
牛肉粉
琼脂
无菌绵羊血
【操作方法】
1.培养基平皿外观：血琼脂培养基平皿无裂纹，培养基无裂纹，无气泡或斑点，无污染。如果开封后发现平皿上已出现菌落，则表明受到污染，弃用。
2.按常规接种方法接种。
3.将接种后的培养基在35℃孵育箱内，经18-24小时孵育后观察菌落生长情况。
【注意事项】
1.各平皿为无菌产品，开封后应尽快使用，不可再长期存放。
2.本产品操作应无菌操作，否则可能影响结果。
3.使用过的平皿经灭菌处理后方可丢弃
BAP和巧克力培养基的制作原料完全相同,只是后者在制备时温度较高,将红细胞破坏,释放出红细胞内的营养物质,如X、V因子等,因此巧克力培养基的营养更高一些,可以培养淋球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌等,但由于红细胞已经破坏,故不能观察溶血现象.
主要成分：
酪蛋白胰酶消化物
心胰酶消化物
玉米淀粉
肉胃酶消化物
酵母浸出粉
氯化钠
琼脂
5%脱纤维羊血
哥伦比亚血琼脂作为细菌生长的物质基础，其中血液成分和营养添加剂提供了更加充分的营养。
哥伦比亚血平板检验原理是酪蛋白胰酶消化物、心胰酶消化物、肉胃酶消化物、酵母浸出粉、可溶性淀粉提供碳氮源、维生素和生长因子，羊血是细菌生长繁殖的良好营养物质。在45至50℃的基础培养基中加入血液可以保存血液中某些不耐热的生长因子，同时血球不被破坏。
牛肉高5g
氯化钠5g
琼脂10~20g
蒸馏水1000ml
煮沸至充分溶解，高压灭菌15~20min
待冷却至50摄氏度左右时加入50ml抗凝羊血（除去纤维）或兔血。摇匀或搅匀倒平板或试管斜面。
温度过高，培养基呈棕褐色；温度过低则不利于血液与培养基混匀。
今天上午刚做了，呵呵
我用兔血，听说将抗凝羊血用牙签搅一搅就去纤维了，没做过。
牛肉高5g
氯化钠5g
琼脂10~20g
蒸馏水1000ml
煮沸至充分溶解，高压灭菌15~20min
待冷却至50摄氏度左右时加入50ml抗凝羊血（除去纤维）或兔血。摇匀或搅匀倒平板或试管斜面。
温度过高，培养基呈棕褐色；温度过低则不利于血液与培养基混匀。
今天上午刚做了，呵呵
我用兔血，听说将抗凝羊血用牙签搅一搅就去纤维了，没做过。
再乘以稀释倍数，即为每g（mL）样品中大肠菌群数。
例：10-4样品稀释液1 mL，在VRBA平板上有100个典型和可疑菌落，挑取其中10个接种BGLB肉汤管，证实有6个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：100×6/10×104/g（mL）=6.0×105CFU/g（mL）。
