皮尔洛运动经历

一、环己醇制备环己酮

原理：3 C6H11OH+Na2Cr2O7——>3 C6H10O+Cr2(SO4)3+Na2SO4+7 H2O

仪器：原地烧瓶 直行冷凝管 空气冷凝管 分液漏斗

流程：

环己醇-l 振摇 加水 分离萃取干燥

l————->墨绿色液体————>流出液————————>产品

铬酸 -l 55~60 C 蒸馏 蒸馏151~155 C

二、环己酮制备环己酮肟

原理：C6H10O+NH2OH.HCl---->C6H10NOH+H2O(催化剂：CH3COONa)

流程：3.9ml环己酮

l

l

l

摇、溶 V 摇、溶

水、3.5g羟胺盐酸盐----------------------l 摇

l-------->冰水浴--->抽滤

5g结晶乙酸钠、水--l 振荡5min l

l

l

冷却 加水、加热 V

结晶产物<---抽滤<-----趁热过滤<-------------粗产物

取滤液 沸、全溶

目录1 拼音2 附录Ⅷ A 免疫印迹法 2.1 试剂2.2 检查法2.3 结果判定 3 附录Ⅷ B 免疫斑点法 3.1 试剂3.2 检查法3.3 结果判定 4 附录Ⅷ C 免疫双扩散法 4.1 供试品溶液的制备4.2 试剂4.3 检查法4.4 结果判定 5 附录Ⅷ D 免疫电泳法 5.1 试剂5.2 对照品5.3 供试品溶液的制备5.4 检查法5.5 注意事项 6 附录Ⅷ E 肽图检查法 6.1 第一法  胰蛋白酶裂解－反相高效液相色谱法 6.1.1 色谱条件6.1.2 检查法 6.2 第二法  溴化氰裂解法 7 附录Ⅷ G A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法 7.1 第一法  测磷法（仲裁法） 7.1.1 试剂7.1.2 色谱柱的制备7.1.3 色谱柱的标定7.1.4 测定法 7.2 第二法  仪器法 7.2.1 色谱柱的标定7.2.2 测定法 7.3 【附注】 8 附录Ⅷ H 伤寒Vi多糖分子大小测定法 8.1 试剂、色谱柱的制备与色谱柱标定8.2 测定法8.3 【附注】 9 附录Ⅷ I 牛血清白蛋白残留量测定法 9.1 供试品溶液的制备9.2 干扰试验9.3 测定法9.4 【附注】 10 附录Ⅷ J b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法 10.1 试剂10.2 测定法10.3 结果计算 11 附录Ⅷ K 己二酰肼含量测定法 11.1 试剂11.2 测定法 12 附录Ⅷ L 高分子结合物含量测定法 12.1 试剂12.2 供试品溶液的制备12.3 测定法12.4 结果计算 13 参考资料 1 拼音

2010nián bǎn yào diǎn sān bù fù lù Ⅷ

《中华人民共和国药典》（2010年版）三部附录Ⅷ

2 附录Ⅷ A 免疫印迹法

本法系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。

2.1 试剂

（1）TG缓冲液  称取三羟甲基氨基甲烷15.12g与甘氨酸72g，加水溶解并稀释至500ml。4℃保存。

（2）EBM缓冲液  量取TG缓冲液20ml、甲醇40ml，加水稀释至200ml。4℃保存。

（3）TTBS缓冲液  称取三羟甲基氨基甲烷6.05g与氯化钠4.5g，量取聚山梨酯80 0.55ml，加适量水溶解，用盐酸调pH值至7.5，加水稀释至500ml。4℃保存。

（4）底物缓冲液  称取3,3'二氨基联苯胺盐酸盐15mg，加甲醇5ml与30%过氧化氢15μl，加TTBS缓冲液25ml使溶解，即得。临用现配。

2.2 检查法

照SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法（2010年版药典三部附录Ⅳ C），供试品与阳性对照品上样量应大于100ng。取出凝胶，切去凝胶边缘，浸于EBM缓冲液中30分钟。另取与凝胶同样大小的厚滤纸6张、硝酸纤维素膜1张，用EBM缓冲液浸透。用半干胶转移仪进行转移：在电极板上依次放上湿滤纸3张、硝酸纤维素膜1张、电泳凝胶、湿滤纸3张，盖上电极板，按0.8mA/cm2硝酸纤维素膜恒电流转移45分钟。

取出硝酸纤维素膜浸入封闭液（10%新生牛血清的TTBS缓冲液，或其他适宜封闭液）封闭60分钟。弃去液体，加入TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的供试品抗体（参考抗体使用说明书的稀释度稀释），室温过夜。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8分钟。弃去液体，再加入TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的生物素标记的第二抗体，室温放置40分钟。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8汾钟。弃去液体，更换TTBS缓冲液10ml，摇动，加入适量的亲和素溶液和生物素标记的辣根过氧化物酶溶液，室温放置60分钟。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗4次，每次8分钟。弃去液体，加入适量底物缓冲液，置于室温避光条件下显色，显色程度适当时水洗终止反应。

2.3 结果判定

阳性结果应呈现明显色带。阴性结果不显色。

3 附录Ⅷ B 免疫斑点法

本法系以供试品与特异性抗体结合后，抗体再与酶标抗体特异性结合，通过酶学反应的显色，对供试品的抗原特异性进行检查。

3.1 试剂

（1） TG缓冲液  精密称取三羟甲基氨基甲烷15.12g与甘氨酸72g，加水溶解并稀释至500ml。4℃保存。

（2） EBM缓冲掖  量取TG缓冲液20ml、甲醇40ml，加水稀释至200ml。4℃保存。

（3） TTBS缓冲液  称取三羟甲基氨基甲烷6.05g、氯化钠4.5g，吸取聚山梨酯80 0.55ml，加适量水溶解，用盐酸调pH值至7.5，加水稀释至500ml。4℃保存。

（4）底物缓冲液  称取3,3'二氨基联苯胺盐酸盐（DAB）15mg，取甲醇5ml、30%过氧化氢15μl，溶于25ml TTBS缓冲液中。用前配制。

3.2 检查法

取硝酸纤维素膜，用EBM缓冲液浸泡15分钟，将供试品、阴性对照品（可用等量的人白蛋白）及阳性对照品点在膜上，上样量应大于10ng。室温干燥60分钟。取出硝酸纤维素膜，浸入封闭液（10%新生牛血清的TTBS缓冲液，或其他适宜的封闭液）封闭60分钟。弃去液体，加入TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的供试品抗体（参考抗体使用说明书的稀释度稀释），室温过夜。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8分钟。弃去液体，更换TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的生物素标记的第二抗体，室温放置40分钟。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗3次，每次8分钟。弃去液体，更换TTBS缓冲液10ml，摇动加入适量的亲和素溶液和生物素标记的辣根过氧化物酶溶液，室温放置60分钟。硝酸纤维素膜用TTBS缓冲液淋洗1次，再用TTBS缓冲液浸洗4次，每次8分钟。弃去液体，加入适量底物缓冲液置于室温避光条件下显色，显色程度适当时水洗终止反应。

3.3 结果判定

阳性结果应呈现明显色带。阴性结果不显色。

4 附录Ⅷ C 免疫双扩散法

本法系在琼脂糖凝胶板上按一定距离打数个小孔，在相邻的两孔内分别加入抗原与抗体，若抗原、抗体互相对应，浓度、比例适当，则一定时间后，在抗原与抗体孔之间形成免疫复合物的沉淀线，以此对供试品的特异性进行检查。

4.1 供试品溶液的制备

用生理氯化钠溶液将供试品的蛋白质浓度稀释至适当浓度。

4.2 试剂

（1）0.5%氨基黑染色剂  称取氨基黑10B0.5g，加甲醇50ml、冰醋酸10ml与水40ml的混合液，溶解，即得。

（2）脱色液  量取乙醇45ml、冰醋酸5ml与水50ml混合均匀，即得。

4.3 检查法

将完全溶胀的1.5%琼脂糖溶液倾倒于水平玻板上（每平方厘米加0.19ml琼脂糖），凝固后，按下图打孔，直径3mm，孔距3mm（方阵型）。根据需要确定方阵型图数量。中央孔加入抗血清，周边孔加入供试品溶液，并留1孔加入相应阳性对照血清。每孔加样20μl，然后置水平湿盒中，37℃水平扩散24小时。用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖凝胶板，以除去未结合蛋白质。将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液中染色。用脱色液脱色至背景无色，沉淀线呈清晰蓝色为止。用适当方法保存或复制图谱。

图 方阵型

4.4 结果判定

各阳性对照出现相应的沉淀线则试验成立，供试品与人血清（血浆）抗体之间应出现相应沉淀线，表示两者具有同源性。

5 附录Ⅷ D 免疫电泳法

本法系将供试品通过电泳分离成区带的各抗原，然后与相应的抗体进行双相免疫扩散，当两者比例合适时形成可见的沉淀弧。将沉淀弧与已知标准抗原、抗体生成的沉淀弧的位置和形状进行比较，即可分析供试品中的成分及其性质。

5.1 试剂

（1）巴比妥缓冲液（pH8.6）  称取巴比妥4.14g与巴比妥钠23.18g，加适量水，加热使溶解，冷却至室温，再加叠氮钠0.15g，加水使溶解成1500ml。

（2）0.5%氨基黑染液  称取氨基黑10B 0.5g．加甲醇50ml、冰醋酸10ml与水40ml的混合液，溶解。

（3）1.5%琼脂糖溶液  称取琼脂糖1.5g，加水50ml与巴比妥缓冲液50ml，加热使溶胀完全。

（4）脱色液  量取乙醇45ml、冰醋酸5ml与水50ml，混合均匀。

（5）溴酚蓝指示液  称取溴酚蓝50mg，加水使溶解成100ml。

5.2 对照品

正常人血清或其他适宜的对照品。

5.3 供试品溶液的制备

用生理氯化钠溶液将供试品蛋白质浓度稀释成0.5%。

5.4 检查法

将1.5%琼脂糖溶液倾倒于大小适宜的水平玻板上，厚度约3mm，静置，待凝胶凝固成无气泡的均匀薄层后，于琼脂糖凝胶板负极1/3处的上下各打1孔，孔径3mm，孔距10～15mm。测定孔加供试品溶液10μl和溴酚蓝指示液1滴，对照孔加正常人血清或人血浆10μl和溴酚蓝指示液1滴。用3层滤纸搭桥和巴比妥缓冲液（电泳缓冲液）接触，100V恒压电泳约2小时（指示剂迁移到前沿）。电泳结束后，在两孔之间距离两端约3～5mm处挖宽3mm槽，向槽中加入血清抗体或人血浆抗体，槽满但不溢出。放湿盒中37℃扩散24小时。扩散完毕后，用生理氯化钠溶液充分浸泡琼脂糖凝胶板，以除去未结合蛋白质。将浸泡好的琼脂糖凝胶板放入0.5%氨基黑溶液染色，再用脱色液脱色至背景基本无色。用适当方法保存或复制图谱。与对照品比较，供试品的主要沉淀线应为待测蛋白质。

5.5 注意事项

（1）电泳时应有冷却系统，否则琼脂糖凝胶会出现干裂。

（2）用生理氯化钠溶液浸泡应充分，否则背景不清晰。

6 附录Ⅷ E 肽图检查法

本法系通过蛋白酶或化学物质裂解蛋白质后，采用适宜的分析方法鉴定蛋白质一级结构的完整性和准确性。

6.1 第一法  胰蛋白酶裂解－反相高效液相色谱法

照高效液相色谱法（2010年版药典三部附录Ⅲ B）测定。

6.1.1 色谱条件

以蛋白质与多肽分析用辛烷基硅烷键合硅胶或十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；柱温为30℃±5℃，对照品与供试品保存温度为2～8℃；以0.1%三氟乙酸的水溶液为流动相A液，以0.1%三氟乙酸的乙腈溶液为流动相B液，流速为每分钟1ml，梯度洗脱70分钟（A液从100%～30%，B液从0～70%），检测波长为214nm。

6.1.2 检查法

取供试品溶液及对照品溶液（均为每1ml中含1mg的溶液，如供试品和对照品浓度不够，则应浓缩至相应的浓度），分别用1%碳酸氢铵溶液充分透析，按1：50 （mg/mg）加入胰蛋白酶溶液[取甲苯磺酰苯丙氨酰氯甲酮处理过的（或序列分析纯）胰蛋白酶适量，加1%碳酸氢铵溶液溶解，制成每1ml中含0.1mg的溶液]到供试品溶液与对照品溶液中，于37℃保温16～24小时后，按1: 10加入50%醋酸溶液，以每分钟10000转离心5分钟（或用0.45μm滤膜滤过），精密量取上清液100μl，分别注入液相色谱仪，梯度洗脱，记录色谱图。将供试品溶液的图谱与对照品溶液的图谱进行比较，即得。

6.2 第二法  溴化氰裂解法

检查法  取供试品与对照品适量（约相当于蛋白质50μg），用水透析16小时，冷冻干燥，加溴化氰裂解液（称取溴化氰0.3g，加甲酸（70→100）1ml使溶解]20μl溶解，室温放置24小时，裂解物加水180μl，再冷冻干燥。冻干的裂解物用水复溶至适当浓度．照SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法（附录Ⅳ C）（胶浓度20%）进行电泳，用银染法染色。

将供试品图谱与对照品图谱进行比较，即得。

7 附录Ⅷ G A群脑膜炎球菌多糖分子大小测定法7.1 第一法  测磷法（仲裁法）

本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数（KD）和多糖在规定KD值以前的回收率。

7.1.1 试剂

（1）流动相  称取氯化钠11.7g、叠氮钠0.1g，加水使溶解成1000ml，混匀，用0.1mol/L氢氧化钠溶液调pH值至7.0。

（2）蓝色葡聚糖2000溶液  称取蓝色葡聚糖200020mg，加流动相使溶解成10ml。

（3）维生素B12溶液  称取10mg维生素B12，加流动相使溶解成10ml。

7.1.2 色谱柱的制备

取琼脂糖4B凝胶或琼脂糖CL4B凝胶约200ml，加流动相400ml充分搅拌，放置约1小时使其沉淀，倾去上层含悬浮颗粒的悬液。如此反复3～5次后，加流动相200ml，混匀，抽去凝胶中的空气，装于1.5cm×90cm色谱柱中，约87cm高，用流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，以2～3倍柱床体积的流动相洗脱（约500ml），使柱床平衡。

7.1.3 色谱柱的标定

取蓝色葡聚糖2000溶液1ml，加至已平衡的色谱柱中，以流动相洗脱，流速每小时15～20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管收集3～5ml，照紫外－可见分光光度法（附录Ⅱ A），在波长260nm处测定各管洗脱液的吸光度，以吸光度为纵坐标，洗脱液体积（ml）为横坐标分别作图，波长260nm处的峰顶洗脱液体积为空流体积VO。

量取维生素B12溶液1ml，自“加至已平衡的色谱柱中”起，同法操作，370nm波长处的峰顶洗脱液体积为柱床体积Vi。

7.1.4 测定法

取供试品约1ml（含多糖抗原3～5mg．如为冻干制品可用流动相溶解），加至已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，用组分收集器收集洗脱液，每管收集5ml，照磷测定法（2010年版药典三部附录Ⅶ A）测定每管洗脱液的磷含量。以供试品每管洗脱液的磷含量为纵坐标，洗脱液体积（ml）为横坐标作图，主峰峰顶洗脱液体积为Ve。

按下式计算：

式中  KD为供试品分配系数；

Ve为供试品洗脱液体积，ml

VO为空流体积，ml；

Vi为柱床体积，ml。

计算供试品在KD值<0.5的多糖回收率：

式中RX为KD值<0.5供试品的多糖回收率，%；

AX为供试品在KD值<0.5各管洗脱液的磷含量之和；

A为供试品所有管洗脱液的磷含量之和。

7.2 第二法  仪器法

试剂与色谱柱的制备同第一法。

7.2.1 色谱柱的标定

量取蓝色葡聚糖2000溶液1ml与维生素B12溶液0.2ml；混匀后加至已平衡的色谱柱中，以流动相洗脱，流速每小时15～20ml，检测波长206nm，用组分收集器收集洗脱液，记录色谱图，色谱图中，第一峰为篮色葡聚糖2000峰，峰顶的洗脱液体积为空流体积VO；第二峰为维生素B12峰，峰顶的洗脱液体积为柱床体积Vi。

7.2.2 测定法

取供试品约1ml（含多糖抗原3～5mg，如为冻干制品可用流动相溶解），加至已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，检测波长206nm，用组分收集器收集洗脱液，记录色谱图，即得。按下式计算：

式中  KD为供试品分配系数；

Ve为供试品洗脱液体积，ml；

VO为空流体积，ml

Vi为柱床体积，ml。

计算供试品在KD值<0.5的多糖回收率：

式中RX为KD值<0.5供试品的多糖回收率，%；

AX为供试品在KD值<0.5的色谱图面积；

At为供试品色谱图总面积。

7.3 【附注】

过柱操作在10～20℃进行。

8 附录Ⅷ H 伤寒Vi多糖分子大小测定法

本法用于测定细菌荚膜多糖在色谱柱中的分配系数（KD）和多糖在规定KD值以前的回收率。

8.1 试剂、色谱柱的制备与色谱柱标定

同附录Ⅷ G 第二法。

8.2 测定法

取供试品约1ml（含多糖抗原3～5mg），加至已标定的色谱柱中，用流动相洗脱，流速为每小时15～20ml，用组分收集器收集洗脱液，每管3～5ml。照O乙酰基测定法（2010年版药典三部附录Ⅵ F），测定每管洗脱液中O乙酰基的含量，求出O乙酰基含量最高时的洗脱体积，即为多糖主峰峰顶洗脱体积Ve。

按下式计算：

式中KD为供试品分配系数；

Ve为供试品洗脱液体积，ml；

VO为空流体积，ml；

Vi为柱床体积，ml。

计算供试品在KD值≤0.25的多糖回收率：

式中RX为KD值≤0.25供试品的多糖回收率，%；

AX为供试品在KD值≤0.25各管洗脱液等体积合并液的O乙酰基含量；

At为供试品所有管洗脱液等体积合并液的O乙酰基含量。

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8.3 【附注】

过柱操作在10～20℃进行。

9 附录Ⅷ I 牛血清白蛋白残留量测定法

本法系采用酶联免疫法测定供试品中残余牛血清白蛋白含量。

9.1 供试品溶液的制备

供试品如为冻干剂型，检测前应按标示量复溶后混匀，室温静置30分钟，检测前应再次混匀。供试品如为液体剂型可直接用于检测。

9.2 干扰试验

首次采用该法检测的供试品应进行干扰试验。

制备溶液Ⅰ（供试品倍比稀释）、溶液Ⅱ（供试品和30ng/ml的内控标准品等量混合）和溶液Ⅲ（30ng/ml的内控标准品倍比稀释）。当供试品溶液BSA含量高于试剂盒测定范围中点时，则2倍稀释后制备溶液Ⅰ和溶液Ⅱ。溶液Ⅰ、溶液Ⅱ可倍比稀释测定，溶液Ⅲ应多孔测定（至少10孔以上），并在试验间均匀添加。按测定法操作，分别测定溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ的BSA含量，溶液Ⅰ与溶液Ⅱ的含量之差应在溶液Ⅲ含量测定值的95%可信区间内，表明供试品不会对该检测法产生干扰作用。

9.3 测定法

按试剂盒说明书进行，并采用试剂盒提供的供试品稀释液稀释供试品，供试品应至少进行2个稀释度测定，每个稀释度做双孔平行测定。试剂盒标准品的吸光度、内控参考品测定值、标准品线性相关系数、双孔测定吸光度均应在试剂盒要求范围内，试验有效。以标准品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，将供试品的吸光度代入直线回归方程，再乘以稀释倍数，计算出供试品中BSA含量。

9.4 【附注】

（1）当同一供试品的低稀释度吸光度明显低于高稀释度吸光度时，可能存在HOOK效应或操作失误，需重试或调整稀释倍数进行检测。

（2）测定BSA含量的容器具应专用，防止实验室中BSA污染。

10 附录Ⅷ J b型流感嗜血杆菌结合疫苗多糖含量测定法

本法系依据可溶性糖经无机酸处理脱水产生糖醛（戊糖）或糖醛衍生物，生成物能与酚类化合物缩合生成有色物质，以此测定多糖的含量。

10.1 试剂

（1）0.1%三氯化铁盐酸溶液  准确称取三氯化铁（FeCl3·6H2O）0.1g，放入清洁的试剂瓶内，加盐酸100ml，待溶解后置2～8℃冰箱保存。

（2）地衣酚（3,5二羟基甲苯）[1]乙醇溶液  称取地衣酚1g，放入10ml量瓶中，加95%乙醇至10ml。临用前配制。

（3） 25μg/ml核糖对照品溶液  称取D核糖1.25mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度。

10.2 测定法

量取1ml水，加入5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液，混匀后再加入0.4ml地衣酚乙醇溶液，混匀。水浴5分钟后置冰浴，在波长670nm处测定吸光度，作为空白对照。

先将供试品用水稀释至核糖含量不高于25μg/ml，作为供试品溶液，量取1.0ml自“加入5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液”起，同法操作。

分别取核糖对照品溶液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于10ml试管中，每管依次加水0.9ml、0.8ml、0.6ml、0.4ml、0.2ml、0ml，自“加入5ml 0.1%三氯化铁盐酸溶液”起，同法操作。

10.3 结果计算

以核糖对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，求得直线回归方程。将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程，求出供试品溶液的核糖含量。

供试品多糖含量（μg/ml）a×n/0.41

式中a为供试品溶液的核糖含量，μg/ml

n为供试品稀释倍数。

11 附录Ⅷ K 己二酰肼含量测定法

本法系依据在四硼酸钠存在的条件下，己二酰肼（ADH）中的氨基基团能与三硝基苯磺酸（TNBS）发生显色反应，采用紫外－可见分光光度法测定b型流感嗜血杆菌多糖衍生物中己二酰肼的含量。

11.1 试剂

（1）己二酰肼对照品贮备液（1mg/ml）  精密称定己二酰肼0.100g，加水定容至100ml，于20℃保存。

（2）己二酰肼对照品工作液（20μg/ml）  精密量取ADH对照品贮备液0.2ml，加水定容至10ml。

（3）5%四硼酸钠溶液  称取四硼酸钠（Na2B4O7·10H2O） 47.35g[1]，加水定容至500ml，于室温保存。

（4） 3% TNBS溶液  量取TNBS 5ml，加水定容至50ml，于20℃保存。

11.2 测定法

量取5%四硼酸钠溶液1.0ml，加水1ml，混匀，再加入3% TNBS溶液0.3ml，混匀，于室温放置15分钟，在波长500nm处测定吸光度，作为空白对照。先将供试品用水稀释至己二酰肼浓度不高于20μg/ml，作为供试品溶液，然后取1.0ml，加入5%四硼酸钠溶液1.0ml，自“加入3% TNBS溶液0.3ml”起同法操作。

分别取己二酰肼对照品工作液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml于试管中，每管依次加水0.8ml、0.6ml、0.4ml、0.2ml、0ml，加入5%四硼酸钠溶液1.0ml，自“加入3% TNBS溶液0.3ml”起同法操作。结果计算  以己二酰肼对照品工作液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，求得直线回归方程，将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程，求出供试品溶液的己二酰肼含量，根据稀释倍数计算供试品的己二酰肼含量。

12 附录Ⅷ L 高分子结合物含量测定法

本法系利用高分子结合物、低分子结合物及游离多糖在不同乙醇浓度下，沉淀分离，采用紫外－可见分光光度法测定磷含量，计算高分子结合物的含量。

12.1 试剂

（1） 5mol/L氯化钠溶液  精密称定氯化钠29.22g，加水溶解并稀释至100ml，室温保存。

（2） 1.5mol/L硫酸  于1体积98%的硫酸中加入11体积的水，混匀。

（3） 2.5%钼酸铵  称取钼酸铵2.65g[1]，加水溶解并稀释至100ml。

（4）10%抗坏血酸  称取抗坏血酸10g，加水溶解并稀释至100ml。

（5）矿化试剂  硫酸与70%高氯酸等体积混合制得。

（6）产色试剂  水、1.5mol/L硫酸、2.5%钼酸铵、10%抗坏血酸，按2:1:1:1体积比混合配制。

（7）80μg/ml磷对照品贮备液  精密称定经100℃干燥的磷酸氢二钠0.3665g或磷酸二氢钾0.3509g[1]，加水500ml、5mol/L硫酸溶液10ml溶解，补加水至1000ml。临用时，将贮备液做20倍稀释，即为4μg/ml磷对照品工作液。

（8）1.0mol/L氢氧化钠溶液  称取4g氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。

12.2 供试品溶液的制备

（1）分步沉淀  原液用生理氯化钠溶液稀释至多糖含量20～28μg/ml或成品疫苗3ml，加入5mol/L氯化钠溶液0.75ml，混匀后加入无水乙醇15ml，于20℃冰箱放置72～96小时，以每分钟8000转4℃离心90分钟，吸取上清液为供试品溶液2；于沉淀中加入50%乙醇溶液0.5ml，加玻璃珠，混合后室温放置1小时；再加入50%乙醇溶液1.5ml，混合后室温放置2小时，然后以每分钟8000转8℃离心l小时，吸取1.8ml上清液为供试品溶液3；沉淀再加入1.0mol/L氢氧化钠溶液0.5ml，混合后室温放置1小时，加水1.25ml，作为供试品溶液4。

（2）取多糖含量20～28μg/ml的原液或成品疫苗1.0ml为供试品1。

（3）供试品溶液的矿化  分别量取1.0ml供试品1、1.5ml供试品溶液2、0.7ml供试品溶液3、0.5ml供试品溶液4各2份；分别加入矿化试剂0.15ml，置150℃干燥1小时，然后升温至180℃干燥30分钟，再升温至250℃干燥1小时。

12.3 测定法

量取水1.95ml，加矿化试剂50μl后加2.0ml产色试剂，混匀后置37℃水浴2小时，在波长825nm处测定吸光度，作为空白对照。

于矿化好的供试品溶液中加水1.85ml，加产色试剂2.0ml，混匀后置37℃水浴2小时，在波长825nm处测定吸光度。

分别量取磷对照品工作液0.1ml、0.2ml、0.4ml、0.8ml、1.0ml于试管中，每管依次加水1.85ml、1.75ml、1.55ml、1.15ml、0.95ml；然后每管分别加入矿化试剂50μl后加2.0ml产色试剂，混匀后置37℃水浴2小时，在波长825nm处测吸光度。

12.4 结果计算

以磷对照品溶液的浓度对其相应的吸光度作直线回归，求得直线回归方程。将供试品溶液的吸光度代入直线回归方程，求出磷含量。

供试品磷含量（μg/ml）分别为：

P1 （A1×3）/1.0

P2（A2×18. 75）/1.5

P3 （A3×2.0）/0.7

P4 （A4×2.0）/0.5（P3×10）/100

试验有效性  80%≤P1/（P2+P3+P4）≤120%

供试品高分子结合物含量（%）P4/（P2+P3+P4）×100

供试品游离多糖含量（%）[1P4/（P2+P3+P4）]×100

学校记录了我们在这里的一个又一个 故事 ，快来和我们一起分享我与学校的故事。下面是我分享的我的校园故事 优秀 作文 600字精选10篇，欢迎大家阅读。

我的校园故事优秀作文600字1

刚开始，一段悲伤的歌声让我们离别了小学，离别了熟悉的一切。直到我静下来，慢慢体会这沁人心脾的歌声，我才发觉，这是一段欢快的舞曲。小学时，一直看着表姐背着书包，踏着轻快的脚步迈进东华的大门，没想到，自己也曾有这一天。开学时，我带着好奇、兴奋、憧憬的眼光向这校园望去，操场宽广漂亮，图书馆美丽而充满智慧的美丽，教师宽敞明亮。也真是在这明亮的教室中，我们迎来了我们难忘的校园故事。

记得正是在那个下午，我们带着父母的叮嘱，开始了 军训 。坐下刚不久，我们就迎来了我们的教官，他长得高高的，黑黑的，有时非常严厉，有时却又非常幽默。在军训这三天，他更让我们知道了，我们要有一种荣誉感。记得军训刚开始，有一些同学还不适应军训的生活，还是比较懒散，教官刚刚教会我们正步走，正想让我们操练一遍，“正步走”教官一声令下，全班立刻走起来，可刚走一会儿，教官就严肃的叫停，并迈着沉重的步子走到我们面前，看着教官阴沉的脸，我生怕是自己做不好，不禁底下了头，但教官什么话也没有说，望了一会，走开了。一连练了好几遍，还是我们最后这几排没走好，“再练一次，给我练好了!”听着教官恐怖而严肃的声音，我们最后还是练了几遍才练好。时间一下就过去了，一眨眼，就到了评比的那一天，我们紧张的操练着，可最后还是没有拿到奖。这是一段忧郁的小插曲。

军训过后，同学们也似乎成熟了许多，这是一种甘甜，但接下来发生的校园故事更让生活甜了许多。仔细数数，这已经过了四周了。但，前几周的事似乎还历历在目。前几周，学校开展了“内务大评比”的比赛，老师和同学们为了获得这个奖项，都付出了巨大的努力，下午，上完第九节课，老师为我们买来了盐酸，地刷等清洁工具，回到寝室时，我们每个人手里都拿着许多的清洁工具，回到寝室后，大家顾不得吃饭和洗澡，扫地的扫地、抹风扇的抹风扇，有的同学为了能让走廊外的地板瓷砖更干净些，整个人趴在地上抹着。上完晚自习，大家都不约而同地跑回寝室，在检查一遍柜底有没有积水，才安心睡下。果然，功夫不负有心人，我们班获得了二等奖。这是一段快乐的小插曲。

蒨蒨校园，让我用我精彩的校园生活， 编织 一首歌曲，为你的十年校庆而喝彩!

我的校园故事优秀作文600字2

时光一眨眼便从指间溜走，抓不住。转眼间我已经进入初中两年了，这两年我笑过，哭过，幼稚过，成长过。那个校园让我学会了很多，感悟了许多，经历了很多。我与校园，有着太多的故事。

“今天体育课自习!”随着老师洪亮的声音，同学们欢呼起来，瞬间，操场上没有了熟悉的身影。我找到一处阴凉的地方坐下，竟发现四周长满了三叶草，三片小小的叶子由茎连接着，就像扇叶一样，在微风中摇摆着，我真怀疑那清凉的风是从这扇叶中吹出来的。人们说四叶草代表幸运，那么三叶草代表什么呢?它对我来说代表欢笑吧!还记得从前与朋友们在三叶草间寻找着四叶草，放学的路上摘几片三叶草，一边走一边嚼，那酸甜的滋味一直留在口中。突然想起好久没有去植物园了，便飞也似的跑过去了。

实验楼里空无一人，外面阳光明媚，可实验楼里四季阴凉。进入植物园，耳边回响着水的滴答声，四周的植物也是水灵灵的，就像久雨初晴一样，空气十分的湿润与清新，一股浅浅的香味也若有若无的笼罩在身边，那是金桔花的花香，它就像一双洁白的手，捧着金黄的花芯。看起来那么柔弱但却透着一股坚强。这时，一抹红色的身影吸引了我，它一枝独秀，高挑在枝头，红胜火，有一股火一样的热情在并发，在燃烧，它就是山茶花。墨绿的叶子将它托起，托到舞台的顶峰，它努力的生长着，绽放着。我抚摸着它，笑了。它们都是美丽的，美在大胆的展现自我，美在不屈的生命力。

我猛然醒悟，我在这一段时间里一直缺少的，就是这种不畏困难，充满激情与活力的心。

花儿，草儿的顽强不需要言语，而我也准备好向着阳光奔跑，这是我与校园的故事，让我铭记的故事。

我的校园故事优秀作文600字3

还记得上 八年级 时的那场大雨，吃罢晚饭的时候，天阴沉沉的。我们坐在教室里，看着窗外的风肆无忌惮地抽打着树木，不一会儿，哗哗啦啦的雨就下起来了。下晚自习了，我们就回寝室睡觉了。

第二天早上，雨还没有停的意思。我冲进雨幕，跑进教室。竟被眼前的一幕惊呆了：我的座位下面全是水，地上放书的箱子已被水浸得变了形，里面的书皱巴巴地立着。房顶上的小水滴还在不紧不慢地“噗哒噗哒”滴着，打在书页上，溅到地面上。天啊!这可怎么办呢?我急得就快要哭出来了，这时，耳边响起了一个声音：“你的座位已经不能坐了，来，坐在我旁边吧。我来帮你收拾书箱。”我扭头一看，是她，昨天她问我一道数学题，我因为心里烦把她赶走了。我惊讶地看着她，她难道不记恨我吗?一瞬间，我心里充满了愧疚，但更多的是感动。我觉得自己的心灵得到了洗礼，她乐于助人的精神如阳光一般照耀着我，温暖着我，感染着我。我赶快蹲下来，和她一起整理书箱。

冬日的暖阳

还记得去年的那场 大雪 ，雪花漫天卷地落下来，犹如鹅毛一般，纷纷扬扬，轻轻地落在房顶上，落在大地上。一会儿，整个世界都变成银白色的了。然而美丽的背后却有后患，雪刚停，校园的道路上就被六年级的小同学“造”出了一条条的“滑雪道”，有几个同学一不小心就摔倒了。

下午吃过饭，我们在教室里上自习。一会儿就听到了外面有“咔嚓咔嚓”铲雪的声音，循声望去，丁老师正带着几个大个子男生在干活呢。只见他们每人握着一把铁锨，弯着腰，弓着背，用力地往地上铲，因为天气太寒冷，贴近地面被冻上了厚厚的一层，坚实的很。他们先把铁锨立起来，一点一点的把冰铲开，再送到路边的花池里。有几个没有带手套的同学，时不时停下来，把手放到嘴边哈哈气再干，他们一定是手都冻僵了吧。等到自习下课的时候，道路上已经有了一条一米宽的通道。同学们走过去的时候，都不忘送给他们一个感谢的微笑。这个寒冷的冬天因为有了他们而变得温暖起来了。

校园里同学们热心的帮助，老师细心的照顾，就像一块儿美好的拼图，拼出了我们美好的青春回忆，点缀着我们的人生。

我的校园故事优秀作文600字4

每次晚自习都会偶尔开点小差，就会偶尔想起刚开学时班里浓浓的，不善于表达的情。也是上学期的事了，可能许多人都不怎么记得了吧。上届国旗班竞选，抽到尾数是3的学号，去参加考试，我心里真是忐忑不安：为什么偏偏我是13呢?不久，成绩出来了。

不知道是在班会还是晚自习上，曾嘉壕汇报考试的成绩，讲着讲着，他竟然流下了眼泪!“不知道是哪个人才考了30多分，拖了我们班的后腿!”我当时就被震撼了：我们才结合在一起多久，甚至可能还有人不认识，他却为了我们班哭了，当着我们的面哭了，况且他是一个男孩子啊。我又想：可能我们都已经接受了这个班，只是不想表达出来而已。突然，我脑里飞快地闪出一个念头，我甚至来不及控制大脑不理它：这个人会不会是我?我开始紧张，开始怀疑，开始自责。现在，我才发现，那时的我已经懂得爱这个班了……

还有一次，也是苦泪浸透了我的心田。校运会的结束，也结束了我的快乐。晚自习时，老师让我讲讲参加校运会的感受。那时我正懊恼自己没有掌握 方法 输了800米 长跑 。也是讲到一半，眼泪就突然不受控制地流了出来。想想，以往我何曾在同学面前哭过?难道我对9班的感情比六年级的感情还要深吗?不是的，六年级是因为太爱了，而不像让它看到我难过的样子但初一也是因为太爱了，才愿意和它分享我的喜怒哀乐……

你也许会问，这到底是苦还是甜?我会告诉你，两者都有，正因为两者都有，我才尝到了比甜更甜的甜。最后我想说，校园里的日子很美好，集体中的爱很浓，连眼泪都被浸甜了!

我的校园故事优秀作文600字5

光阴似箭，日月如梭。不知不觉中我在校园里已度过了五个春秋，如今将要离开母校的我，迎来了她的10周年大寿庆典。在此，我真诚的点燃她的第十根生日蜡烛，啊!亲爱的母校——泗阳实验双语学校，我忠心地祝福您：happy birthday!

在这十年里，美丽的校园不知迎来了多少天真的孩童，又送走了多少追梦的少年。运动会上，总能看到同学们健壮的身影贸易节中，同学热情的叫卖声回荡在我的耳畔英语节时，大家聚集到紫藤架下，一声声“how aer you”的问候，开心、流利地用eng lish交流……这些难忘的一幕幕，叫我留恋，叫我神往。

回想刚入学的那一天，我紧紧地跟在爸爸妈妈身后，心里既高兴又紧张，一边走一边想象着校园的模样。当我踏入校门时，美丽的七彩广场、高大的教学楼、空中飘扬的五星红旗、还有宽阔的操场，以及操场周围的葱茏正在茁壮成长的小树……在我眼中显得那么陌生而又熟悉，他们是那么的默契与和谐。最让我着迷的当然是有趣的娱乐设施：悠闲的秋千，忙碌的 足球 场，沉默的高低杠……那些可都是我的最爱啊!这让我一下子就喜欢上了这所学校。从那以后，我成为了双语学校的一名小学生了，我的心里感到无比激动又很自豪。在这里我认识了和蔼的可亲的老师，结识了许多活泼可爱的小伙伴。

如今，校园里的小树长高了。我们也长高了，我不再是坐在爸爸妈妈腿上撒娇的孩童了。在这五年间，我多次被评为“三好学生”优秀学干”，还获得了各项荣誉证书，《宿迁晚报》上还刊登我的许多 文章 ，这都离不开老师辛勤 教育 和无私的奉献啊!校园里的老师，个个热情洋溢，学生们人人文明礼让。宽敞明亮的教室里都装上了先进的多媒体微机房里功能齐全，空调开放田径场后，还有专门为学生们提供的实验田，科学实验室、音乐教室、烹饪室……是我们最爱去的乐园。

干净美丽的校园，处处都让我心驰神往!

在这里，我要大声对我的母校说：“亲爱的母校，我爱您!是您用知识养育了我们，我要感谢您!今天是您的十周年庆典，祝您生日快乐!明天更加辉煌!”

我的校园故事优秀作文600字6

我有两个家，其中的一个大家庭，就是赠予给我无穷的知识的校园。我的校园是新华中学，坐落在新华路上。这所学校，有着属于自己的一种美。怎么，不信啊，那你就跟着我边走边去发现这种美吧!

走近校门，首先映入眼帘的，便是苍劲有力的四个字——新华中学。校门的右边，是传达室在左边，是宣告栏等。

再往里走一点，左右两边便是高大的教学楼。北边是我们初一和初二学生的教学楼，南边是初三的教学楼。每天，学校里的师生迎着微风的爱抚，迎着一缕缕阳光的照射，陆陆续续地来到学校。朗朗的读书声也伴随着脚步声慢慢传入我们的耳朵。到了上课的时间，老师与学生一起遨游知识海洋。日积月累，知识就把同学们的头脑慢慢地填充实了。下课，不少同学还在教学楼里呆着，没有上后操场，而是在走廊里走动或是在教室里休息……这时的教学楼，是最热闹的时候。

从校门向前走，便是操场。操场的南面就是教学楼，最西南面是一个用来 跳远 的沙坑，还有一排大树围绕。往里面走去，就是 篮球 场了，一共有10个篮球筐。再往东一点，就是紧靠着东面墙壁的主席台，当校领导或是老师讲话的时候就站在主席台上讲。在主席台南面，便是升旗台，在旗杆的最上方，一面鲜艳的五星红旗飘荡在半空中。红色的300米跑道围绕着中间的绿色塑料跑道，颜色非常鲜明。每个星期一的早晨，学校里的师生都早早的来到学校，然后再伴随着升旗仪式的音乐纷纷排着队伍来到后操场。升旗仪式正式开始，学校的广播喇叭中奏响着庄重的乐曲，升旗手就抛开国旗，让国旗在空中尽情的飞翔。然后伴随着国歌 ——《义勇军进行曲》，鲜红的五星红旗慢慢地升入半空，随风飘荡……在做课间操的时候，同学们在操场上排着整齐的队伍做操。下了课，一大群的学生在操场上尽情嬉闹……毫无疑问，学校里的后操场真的是同学们共同的天地。

瞧，这就是我的校园那属于自己的美，你发现了吗?说了这么多，其实总归一句话：我爱我美丽的校园，我爱我这第二个大家庭!

我的校园故事优秀作文600字7

我们的学校是科学城三小，校园热闹非凡。

在校园的前面有两面竹林，一株又一株的竹子高大挺拔。大门是用铁做的，大门的右边是保安室，里面有一个爷爷。保安室的前面是一座坚固、高大雄伟的教学楼，教学楼里面每天都能传出朗朗的读书声。教学楼一共有五层，我在第三楼的一个教室。

教学楼的前面是我们的校园的小门，小门的右边是我们学校的厕所，走进龙就会闻到一阵阵臭味。厕所的前面有一个 乒乓球 台，每一节课下课，同学们都要下来玩。乒乓球台的右边是一个植物园，里面种的有白菜、黄瓜、土豆......

乒乓球台背后下一个台阶一大片就是我最喜欢的校园操场啦，我们的校园的操场非常的宽阔，跑一圈有500多米呢。操场被分成了三份，一份是篮球场，一份是足球场，还有一个雄伟的主席台。每周一，我们全校师生都汇聚在主席台下，唱国歌，升国旗，宏伟嘹亮的歌声回荡在校园中。

学校的操场上还有丰富的体育活动。有一次，我们学校与盐亭小学踢了一场足球比赛，他们采用了三角阵型，给我们展开了猛烈的进攻。但是我还是把球抢了下来，用力一脚，用尽了全身力气踢了出去，进球了，胜利属于了我们。

在这面操场上留着我胜利的足迹，我爱我们学校的操场，我更爱我们的学校。

我的校园故事优秀作文600字8

在校园中，我逐渐长大，我骄傲我与我的学校共同成长。几个月前，学校读书节拉开序幕，朗朗的读书声总是萦绕在我的耳畔。记得在读书节开幕式上，学校领导提到同学们将会看到学校的新变化——在教学楼的四层和五层专门配备了新的桌椅和各类书籍，以方便同学们阅读。

第二天，我跟伙伴们迫不及待地来到了四楼，果然眼前一亮：一排排黄色的桌子，配上蓝色的椅子，书架上整齐地摆满了大大小小的书，给四楼大厅增添了一道美丽的风景线。这里人来人往，同学们读书的热情高涨起来，人多但并不喧闹。每个人都津津有味地沉浸在书的内容中，贪婪地吸收书中的精华。整个学校都弥漫着书的香气。在读书节活动开展后不久，体育节也开始了。当我和其他主持人一起宣布体育节开幕，我感到无比的自豪，因为我知道，我们一定会取得好成绩。为了这次比赛，我们班同学鼓足了力气，积极找时间和场地来锻炼和准备。在接下来的比赛中，我们班亮出了集体优势——长跑：五年一班第一名 短跑 ：五年一班第一名……数不清的第一名的喜讯一个接着一个地传来!我们都异常兴奋。各项角逐结束后，体育老师公布比赛成绩：“五年级组获奖名单，第一名五年一班，总分156分……”没等老师说完，我们班已经炸开了锅：“我就知道我们会得第一名。”“咱们准备得这么充分，真是一份耕耘一份收获!”体委领取了奖状，喜不自胜，赶紧把这份荣誉粘到了黑板上，可真是耀眼!体育节和读书节结束后，我们发觉自己长大了，人人带有书香气，人人变得坚强有力。

我们体会到我们的校园也在变，她变得更丰富、更博大。我愿意与我的学校共同成长!

我的校园故事优秀作文600字9

时间过的真快，眨眼之间，我已在母校——真新小学学习、生活了五年。回想这悄悄逝去的五年光阴，从一个什么都不懂的毛头小孩成长为今日一名懂知识有礼貌的中学生了，我深深地感谢母校。

母校真新小学于1999年创建，是一所由区教育局直属的中型科技现代化小学。坐落于嘉定区东南首，与市区的长宁区普陀区两区接壤，交通便利，地理位置优越。一九九九年学校独立建制，现有建筑面积6861平方米，20个教学班，600多名学生。教职工52人，平均年龄35岁。在专职教师46人中，硕士研究生1人，本科学历24人，专科学历17人。

学校确定了求真、求新、求实的校风，严谨、刻实、创新的教风和好学、勤思、主动的学风。真新小学的园丁们以新字当头，在新上做出教育的新篇章，培养新世纪的新一代人才。

回想起五年前的2001年，我才刚刚入学，只是一名懵懂的新生。当爸爸妈妈牵着我那稚嫩的小手，把我带进校园时，我便被母校里所有的一草一木吸引住了。在母校，一位又一位可敬的老师，带领着我们在知识的海洋里欢畅的遨游……从拼音到英文、从 日记 到作文、从加减乘除到几何知识，还学到了许多 自然科学知识 。是您，亲爱的母校，教会了我许多做人的道理，使我养成好的行为习惯。

光阴似箭，五年后的我，早已不是五年前那个无知的小孩，而成长为一名各方面表现良好的学生，在这五年间，我获得过优秀少先队员、校“三好”学生等荣誉。此时，不仅我有变化，我的母校也发生了巨大的变化。母校正门和后门的两棵大榕树越来越苍翠了，校园里的花草树木越来越多，环境越来越优美。此外，母校在这五年期间获得了许许多多的奖项和荣誉，在全体师生尊重理解、和谐宽容、团结协作下，学校先后获得了：嘉定区文明单位、嘉定区行为规范示范校、上海市无烟学校、上海市红十字达标单位、嘉定区体育先进集体、嘉定区健康促进学校、嘉定区新长征突击队、全国红旗大队。

我很自豪，因为我是母校的一员。我爱我的母校，我正在母校健康的成长!

我的校园故事优秀作文600字10

时间一分一秒的过去了，一眨眼，实验学校就已经成立了20年了时间一分一秒的过去了，一瞬间，我就已经在学校度过四年了。这些日子里，总是有许多老师陪伴着我成长。有印象最深的就是我的数学老师：黄老师。

黄老师最大的优点就是公私分明。有一次我数学口算因为太着急了，忘了批。第二天，检查的时候，我也跟着其他人站了起来。满以为自己会被黄老师忽略，但是黄老师照样批评了我。还因为，我这个做官的犯了比平民还要大的错误。多批评了我一会儿。黄老师还真是公私分明呀!

黄老师既然有优点，那么也有缺点。就像有光芒就有黑暗一样。黄老师的缺点就是总是在说话的时候要喷出一些口水。有一次黄老师在我桌边讲课，结果这一节课我差了四五次桌子呢!即使这样，她依然是我最喜欢的老师。

还有一位数学老师。他是我们现在的数学老师，姓陈。看起来挺年轻，挺漂亮的。相比之下，陈老师讲话都是用一个小麦克风。提在手里说话的。这位陈老师说话是循循善诱的，很招惹我们同学的喜爱。陈老师工作也有很长时间了，他总是喜欢把同学们叫做同志们这一点也让我们的同学犯花心。

如果你要问我哪个老师是严厉的，那名次就要属于我们的英语老师刘老师了。刘老师的严厉就属于她看管纪律的严厉。每一次我们吵的时候，刘老师都会先安静下来。等有人发觉了就已经来不及了，刘老师就会被在作业本上加上几项作业，让我们欲哭无泪。

虽然刘老师是严厉的，但是有时候他却让我们做角色扮演让我好不欢喜。

不过呢，这几个老师都只是我在学习的海洋中几朵跳动的浪花。还有循循善诱的范老师，和蔼可亲的任老师，没啥好气的叶老师，心理辅导的毛老师，说话有趣的刘老师等等。不过，这些都是得等到我们下次见面的时再说的事了。学校，明天见!

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