多糖醇沉是什么原理
多糖是多羟基的醛或酮,可溶于水,但是在多糖水溶液中加入乙醇会破坏多糖水溶液中的氢键,从而降低多糖在水中的溶解度,使多糖以沉淀的形式析出。不同浓度的醇沉淀的组分不一样,一般采取分级醇沉。醇沉的时候单糖也可以被醇沉出来,醇浓度越高单糖被沉淀出来的量也会越高。
就是利用溶解度,和盐析原理类似。
多糖如果参用分级醇沉,会分出来不同分子量的多糖,但是这仅仅是一个粗分,醇沉很容易包裹一些小分子,导致样品不纯,需要进一步做色谱层析,一般多糖用G25,或者S400(可加压)。
fzxdxmc(站内联系TA)乙醇沉淀操作时,沉淀中可能会包含部分单糖,醇浓度越高单糖被沉淀出来的量也会越高。可以采用相应浓度的乙醇洗涤,或者超滤等方式除去多糖。fzxdxmc(站内联系TA)测定多糖时比较经典的纯化方法是采用乙醇沉淀法,因为多糖在在高浓度乙醇(比如80%)中几乎都会沉淀出来,和其他小分子物质等分离开。而单糖在高浓度中尚有一定的溶解性,可以通过洗涤或透析的方式除去。fzxdxmc(站内联系TA)对不起了,纠正一下错别字:二楼回复贴中“或者超滤等方式除去多糖”,应该是“或者超滤等方式除去单糖”。imbest110(站内联系TA)没事 应用透析可以出去单糖
采用乙醇沉淀法除去水提取液中多糖等杂质,应使乙醇浓度达到:
80%的浓度有点小,应该大于85%,在这个条件下。
拓展内容:
1、多糖是多羟基的醛或酮,可溶于水,但是在多糖水溶液中加入乙醇会破坏多糖水溶液中的氢键,从而降低多糖在水中的溶解度,使多糖以沉淀的形式析出。
2、水提醇沉的原理是利用多糖不溶于乙醇的性质用乙醇来沉淀多糖;它是加热条件下以水为提取溶剂,提取液经过浓缩、醇沉、离心、干燥等步骤后即可得到。
异丙醇沉淀以后不必用70%乙醇洗.只有醋酸钠 乙醇沉淀之后才需要70%乙醇洗,目的是洗去加入的盐,乙醇浓度太高达不到脱盐效果,浓度太低DNA会溶掉
异丙醇沉淀以后有人用无水乙醇洗一遍,目的是加速DNA的干燥,因为异丙醇的挥发性没有乙醇好
主要目的还是为了除盐,前面沉淀DNA时加入的盐会影响你后续的克隆操作,如酶切和PCR.