把相同浓度的醋酸 一氯乙酸 二氯乙酸用玻璃棒点于PH试纸上 加入甲基紫指示剂有什么现象 如何解释

A 总胺值的滴定

    实验原理：

    胺类固化剂(伯胺、仲胺、叔胺)都是电子给予体，是碱性化合物，在两性或酸性溶剂中呈碱性反应。因此可利用其碱性，用酸标准溶液进行滴定来测定其含量。

    实验方法有以下两种:

    1.高氯酸-乙酸滴定法

    对于芳香胺、改性胺等碱性较弱的胺，在醇溶液中滴定时，终点变色不敏锐，滴定误差较大。采用高氯酸-乙酸滴定法则可获得更精确的结果（相关文献中实验结论说明此情况下盐酸-乙醇法滴定结果是偏低的），其原理为： 

RNH2+HClO4→RNH3+ClO4-

R2NH+HClO4→R2NH2+ClO4-

R3N+HClO4→R3NH+ClO4-

    2.盐酸-乙醇(或异丙醇等)滴定法

    此方法适用于碱性较大的脂肪胺，其原理为：

RNH2+HCl→RNH3+Cl-

R2NH+HCl→R2NH2+Cl-

R3N+HCl→R3NH+Cl-

一、高氯酸-乙酸滴定法

    1.仪器和试剂

    烘箱、分析天平(万分之一)、量筒(100 mL、10 mL)、锥形瓶(250 mL)、酸式滴定管、干燥器。

    70%高氯酸(分析纯)、冰乙酸(分析纯)、纯苯(分析纯)、醋酸酐(分析纯)、邻苯二甲酸氢钾(基准物)，甲基紫(指示剂)。

    2.配制溶液及指示剂

    指示剂：0.1%甲基紫冰乙酸溶液（变色蓝变紫，范围2-3）。

    溶  剂：体积比冰乙酸:纯苯=2:l。

    3.标准溶液的配制

    量取 70%高氯酸溶液 4.3 mL，溶于 500 mL冰乙酸中，然后再取醋酸酐 7.5 mL，分数次加入，摇动至混合均匀，放置过夜，使与高氯酸中含的水分反应，转变为醋酸，即为[c(HCl04)=0.1 mol/L(0.1N)]高氯酸标准溶液。

    4.标定3中的高氯酸标准液

    称取 0.2～0.3g 邻苯二甲酸氢钾（必须保证干燥恒重），准确至 0.0001g，置于干燥的锥形瓶中，加入 50 mL 冰乙酸，温热溶解，加入 3～4 滴甲基紫指示剂，用配制好的高氯酸标准溶液[c(HCl04)=0.1mol/L]滴定至溶液由紫色变为纯蓝色，即为终点。

    5.计算

    c(HCl04)=m/(V×0.2042)式中：

    c(HCl04)——高氯酸标准溶液的浓度，mol/L；

    m——邻苯二甲酸氢钾的质量，g；

    V——消耗的高氯酸标准溶液体积，mL；

    0.2042——与 1.00 mL 高氯酸标准溶液[c(HCl04)=0.1 mol/L]相当的以克表示的邻苯二甲酸氢钾的质量。

    注：本溶液使用前标定。标定高氯酸标准溶液时的温度应与使用该标准溶液滴定时的温度相同。

    6.测定方法

    精确称取适量的样品，置于 250 mL 锥形瓶中，加入约 25 mL 冰乙酸一纯苯溶剂，摇动至完全溶解后(如样品不容易溶解时， 可稍微加热然后让它冷却到室温)，加入甲基紫指示剂 3～4 滴， 用[c(HCl04)=0.1mol/L]高氯酸标准溶液滴定至溶液由紫色转变成纯蓝色，即为终点。

    7.计算

    AN(mgKOH/g)=(cV×56.11)/m

    式中：C——高氯酸标准溶液的浓度，mol/L；

    V——消耗的高氯酸标准溶液体积，mL：

    m——样品的质量，g；

    56.11——每摩尔氢氧化钾的质量。

二、盐酸-乙醇滴定法

    1.实验仪器：锥形瓶、滴定管

    2.试剂及溶液

    ①盐酸（分析纯）

    ②0.5摩尔每升盐酸异丙醇标准液：以2L容量瓶为准，先加1000mL异丙醇，再加85mL浓盐酸摇匀后用异丙醇溶液稀释至刻度。（用无水碳酸钠在溴甲酚绿钠盐为指示剂的情况下标定，原理同盐酸的标定）

    ③氢氧化钠（分析纯），0.5摩尔每升

    ④无水乙醇（基准试剂）

    ⑤溴甲酚绿钠盐指示剂：0.1g溴甲酚溶于100毫升水中，再加0.05摩尔每升的氢氧化钠溶液1毫升

    ⑥溴酚蓝：0.2g溴酚蓝溶于100毫升无水乙醇

    3.测定方法

    取适量样品于250mL锥形瓶中，加50mL无水乙醇在电炉上煮沸1min（除去游离氨的干扰），冷却至室温后，加入5滴溴酚蓝，用0.5摩尔每升盐酸异丙醇标准液滴定至黄色为终点。

    4.计算（同法一，C和V分别指盐酸异丙醇标准液的浓度及用量）

B 非直接滴定总胺的测定方法

    原理：利用氨基的乙酰化、氧化、与羰基反应生成西弗碱以及芳香胺的重氮化和亚硝化等方法来分别测定伯仲叔氨基相对含量的方法。

    测定方法：

    1.伯氨基含量的测定方法

    原理：主要是基于伯氨基与羰基的反应或胺与亚硝酸的反应。

    测定方法：①伯胺与醛或酮反应生成西弗碱和水，而仲胺和叔胺不发生此反应。测定生成的水量或所消耗的醛或酮的量，即可求出伯氨基的含量。

RNH2+R'CHO→RN=CHR'+H2O

    ②伯胺(主要是脂肪胺)与亚硝酸反应释出氮，而仲胺和叔胺与亚硝酸反应不释出氮。测定生成的N的体积，即可求出伯氨基含量。

RHN2+HNO2→ROH+H2O+N2↑

R2NH+HNO2→R2N-N=O+H2O

R3N+HNO2→R3N•HNO2

    2.叔氨基含量的测定方法

    在有伯胺、仲胺存在下，测定叔胺含量时，可先使伯胺及仲胺与乙酸酐反应，生成乙酰化产物，以排除伯胺及仲胺的影响。

    乙酰化产物不显碱性，不能被酸中和。而叔胺不能产生乙酰化反应，但它可以与乙酸反应：

R3N+CH3COOH→R3NH+CH3COO-

    该产物可用高氯酸-乙酸标准溶液滴定，过量的乙酸酐无干扰，有时可使终点更为敏锐。

R3NH+CH3COO-+HClO4→R3NH+ClO4-+CH3COOH

    3.仲氨基含量的测定方法

    原理：伯胺及仲胺与CS2反应牛成氨荒酸

醋酸钠含量的测定（非水滴定法）(1/1)

醋酸钠含量的测定（非水滴定法）

一、 实验目的

1．掌握非水溶液酸碱滴定的原理及操作.

2．掌握结晶紫指示剂的滴定终点的判断方法.

二、 实验原理

醋酸钠在水溶液中,是一种很弱的碱（pKb=9.24）,不能在水中用强酸准确滴定.选择适当的溶剂如冰醋酸则可大大提高醋酸钠的碱性,可以HClO4为标准溶液进行滴定,其滴定反应为：

H2Ac++·ClO-4+NaAc =2HAc+NaClO4

邻苯二甲酸氢钾常作为标定HClO4- HAc标准溶液的基准物,其反应如下：

C6H4·COOH·COOK+H2Ac+·ClO-4==C6H4·COOH COOH+HAc+KClO4

由于测定和标定的产物为NaClO4和KClO4,它们在非水介质中的溶解度都较小,故滴定过程中随着 HClO4-HAc标准溶液的不断加入,慢慢有白色混浊物产生,但并不影响滴定结果.本实验选用醋酐?冰醋酸混合溶剂,以结晶紫为指示剂,用标准高氯酸- 冰醋酸溶液滴定.

三、 主要仪器和试剂

1.?仪器：50mL酸式滴定管,250mL锥形瓶.

2.?试剂：

(1)HClO4-HAc（0.1mol·L-1）：在700～800mL的冰醋酸中缓缓加入72%（质量比）的高氯酸8.5mL,摇匀,在室温下缓缓滴加乙酸酐24mL,边加边摇,加完后再振摇均匀,冷却,加适量的无水冰醋酸,稀释至1L,摇匀,放置24h（使乙酸酐与溶液中水充分反应）.

(2)结晶紫指示剂：0.2g结晶紫溶于100mL冰醋酸溶液中.

(3)冰醋酸（A.R）

(4) 邻苯二甲酸氢钾（A.R）

(5)乙酸酐（A.R）

(6)醋酸钠试样

四、实验步骤

1．HClO4- HAc滴定剂的标定

准确称取KHC8H4O4 0.15～0.2g于干燥锥形瓶中,加入冰醋酸20～25mL使其溶解,加结晶紫指示剂1滴,用HClO4-HAc(0.1mol·L-1)缓缓滴定至溶液呈稳定蓝色,即为终点,平行测定三份.取相同量的冰醋酸进行空白试验校正.根据KHC8H4O4的质量和所消耗的HClO4-HAc的体积,计算 HClO4溶液的浓度.

2.?醋酸钠含量的测定

准确称取0.1g无水醋酸钠试样,置于洁净且干燥的250mL锥形瓶中,加入20mL醋酐?冰醋酸使之完全溶解,加结晶紫指示剂1滴,用0.1mol·L-1HClO4-HAc标准溶液滴至溶液由紫色转变为蓝色,即为终点.平行测定三份,并将结果用空白试验校正.根据所消耗的HClO4-HAc体积（mL）,计算试样中醋酸钠的质量分数.

五、 注意事项

1．乙酸酐(CH3CO)2O是由2个醋酸分子脱去1分子H2O而成,它与HClO4作用发生剧烈反应,反应式为：

5(CH3CO)2O+2HClO4+5H2O=10CH3COOH+2HClO4

同时放出大量的热,过热易引起HClO4爆炸,因此,配制时不可使高氯酸与乙酸酐直接混合,只能将HClO4缓缓滴入到冰醋酸中,再滴加乙酸酐.

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1．掌握非水溶液酸碱滴定的原理及操作。

2．掌握结晶紫指示剂的滴定终点的判断方法。 醋酸钠在水溶液中，是一种很弱的碱（pKb=9.24），不能在水中用强酸准确滴定，因此需用非水滴定法。选择适当的溶剂如冰醋酸则可大大提高醋酸钠的碱性，可以为标准溶液进行滴定，其滴定反应为：

邻苯二甲酸氢钾常作为标定标准溶液的基准物，其反应如下：

由于测定和标定的产物为和，它们在非水介质中的溶解度都较小，故滴定过程中随着标准溶液的不断加入，慢慢有白色混浊物产生，但并不影响滴定结果。本实验选用乙酸酐、冰醋酸混合溶剂，以结晶紫为指示剂，用标准高氯酸-冰醋酸溶液滴定。 1.仪器：25mL酸式滴定管，250mL锥形瓶。

2.试剂：

(1)（0.1mol·L-1）：在700～800mL的冰醋酸中缓缓加入72%（质量比）的高氯酸8.5mL，摇匀，在室温下缓缓滴加乙酸酐24mL，边加边摇，加完后再振摇均匀，冷却，加适量的冰醋酸，稀释至1L，摇匀，放置24h（使乙酸酐与溶液中水充分反应）。

(2)结晶紫指示剂：0.2g结晶紫溶于100mL冰醋酸溶液中。

(3)冰醋酸（A.R）

(4)邻苯二甲酸氢钾（A.R）

(5)乙酸酐（A.R） 1．滴定剂的标定

准确称取0.15～0.2g于干燥锥形瓶中，加入冰醋酸20～25mL使其溶解，加结晶紫指示剂1滴，用(0.1mol/L)缓缓滴定至溶液呈稳定蓝色（略带紫色），即为终点，平行测定三份。取相同量的冰醋酸进行空白试验校正。根据的质量和所消耗的的体积，计算溶液的浓度。

2.醋酸钠含量的测定

准确称取0.1g无水醋酸钠（0.25g试样三水醋酸钠），置于洁净且干燥的250mL锥形瓶中，加入20mL冰醋酸使之完全溶解，再加5mL乙酸酐，加结晶紫指示剂1滴，用0.1mol/L标准溶液滴至溶液由紫色转变为蓝色，即为终点。平行测定三份，并将结果用空白试验校正。根据所消耗的体积（mL），计算试样中醋酸钠的质量分数。 1．乙酸酐是由2个醋酸分子脱去1分子而成，它与作用发生剧烈反应，反应式为：

同时放出大量的热，过热易引起爆炸，因此，配制时不可使高氯酸与乙酸酐直接混合，只能将缓缓滴入到冰醋酸中，再滴加乙酸酐。

1、甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态并保持细胞的活性，经冰醋酸固定的物质，还能抵消甲醇的硬化作用。

2、冰醋酸的主要用途是阻止染色体收缩，使染色体结构免于破坏。

作为酸碱指示剂时，一般配成0.05%龙胆紫的水溶液

非水溶液滴定指示剂，一般配成0.2%龙胆紫的冰乙酸溶液

生物染色剂：一般配成0.2－0.5%龙胆紫的水溶液

医疗上，一般配成1～2%龙胆紫的水溶液

方法都很简单：称取适量龙胆紫，用少量溶剂溶解，再加足剩下的溶剂

还有碱性染料或改良苯酚品红溶液

DNA染色实验

1、原理与解析

(1)真核细胞的DNA主要分布在细胞核内，RNA主要分布在细胞质中。

(2)甲基绿和吡罗红两种染色剂对DNA和RNA的亲和力不同，甲基绿对DNA亲和力强，使DNA显现出绿色，而吡罗红对RNA的亲和力强，使RNA呈现出红色。用甲基绿、吡罗红的混合染色剂将细胞染色，可同时显示DNA和RNA在细胞中的分布。(同时甲基绿用二苯胺或龙胆紫代替做平行)

(3)盐酸的作用

① 盐酸能改变细胞膜的通透性，加速染色剂的跨膜运输；

② 盐酸使染色体中的DNA与蛋白质分离，便于DNA与染色剂的结合。

注意事项

1.材料的选择

① 选用的实验材料既要容易获得，又要便于观察；

② 常用的观察材料由人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞(为避免原有颜色的干扰，不可使用紫色表皮细胞)

2.取材要点

① 取口腔上皮细胞之前，应先漱口，以避免装片中出现太多的杂质；

② 取洋葱表皮细胞时，尽量避免材料上带有叶肉组织细胞。

3.冲洗载玻片时水的流速要尽量慢，切忌直接用水龙头冲洗。

4.安全要点

① 用酒精灯烘烤载玻片时，不要只集中于材料处，而应将载玻片在火焰上来回移动，使载玻片均匀受热，以免破裂；

② 烘烤后的载玻片不要马上放入盛有稀盐酸的烧杯中，最好先自然冷却1分钟。

5.换用高倍镜观察材料时，只能用细准焦螺旋进行调焦，切不可动粗准焦螺旋。

主要步骤(以观察口腔上皮细胞为例)

1.取材

① 滴： 在洁净的载玻片上滴一滴质量分数为0.9%的NaCl溶液；

② 刮： 用消毒牙签在口腔内侧壁上轻轻地刮几下；

③ 涂： 将牙签上的碎屑涂抹在载玻片的生理盐水中；

④ 烘： 将涂有口腔上皮细胞的载玻片在酒精灯的火焰上烘干。

2.水解

① 解： 将烘干的载玻片放入装有30ml质量分数为8%的盐酸的小烧杯中，进行材料的水解；

② 保： 将小烧杯放入装有30℃温水的大烧杯中保温5分钟。

3.冲洗涂片

① 冲： 用缓缓的蒸馏水冲洗载玻片10秒钟；

② 吸： 用吸水纸吸去载玻片上的水分。

4.染色

① 染：用2滴吡罗红甲基绿混合染色剂滴在载玻片上，染色5分钟；

② 吸： 吸去多余染色剂；

③ 盖： 盖上盖玻片。

5.观察

① 低： 在低倍物镜下，寻找染色均匀，色泽浅的区域，移至视野中央，将物像调节清晰；

② 高： 转到高倍物镜，调节细准焦螺旋，观察细胞核和细胞质的染色情况。

2%甲基绿水溶液的配制

甲基绿（methyl green） 蒸馏水加至 50mlc 用三氯甲烷抽提， 甲基绿水溶液的抽提：甲基绿为绿色粉末，属三苯甲烷染料，这种染料是由氯代甲烷作用于结果晶紫而形成的一 种化合物。由于甲基化作用，甲基绿就比甲基绿后，所引进的甲基连接得并不牢固，容易从甲基绿中脱失。另一方面， 在甲基化过程中，还有一部分结晶紫并没有生成甲基绿，因此，也有人认为甲中，常有少量的甲基紫或结晶紫成份。但是，也有人认为甲基紫乃是甲基绿的衰败产物，甲基绿在储存过程中，会不断产生甲基紫。因此，在配制试剂时，必须 先将甲基绿所含的甲基紫或结晶紫抽提出来，才能使细胞核内的脱氧核糖核酸染成绿色。抽提方法是取 2%甲基绿水溶 液 20ml 倾入洁净分液漏斗，加入三氯甲烷 20ml 充分摇荡混合，使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。旋动分液 漏斗下部的砂塞，慢慢把如此反复更换三氯甲烷，直到三氯甲烷无紫红色为止，即可得到得纯的甲基绿溶液。

英文名称：Methyl Green 分子式：C27H35Cl4N3Zn 分子量：608.78 IUPAC 名称： 4-((4-(dimethylamino)phenyl)(4-(dimethyliminio)cyclohexa-2,5-dieny lidene)methyl)-N-ethyl-N,N-dimethylbenzenaminium dichloride compound with zinc(II) chloride 甲基绿是具有金属光泽的绿色微结晶或亮绿色粉末。溶于水，显蓝绿色。 稍溶于乙醇，不溶于戊醇。 盐酸中显红黄色，在氢氧化钠中无色。试剂溶液在可见光区有吸收峰 (λmax=633.8nm)。 与 ReO4-、HgCl42-、BiI4-、AuCl4-和 GaCl4-等形成离子缔合物。 用于光度法测定 Hg2+、ReO4-等，定性检出铁氰化物，酸碱指示剂和细 胞染色剂。

甲基绿为碱性染料，它易与聚合程度高的 DNA 结合呈现绿色。 又称双绿 SF 双绿 SF。绿色晶体，具金黄色光泽，或淡绿色粉末。溶于水，呈蓝 绿色。微溶于乙醇，不溶于乙醚。 由氯甲烷与甲基紫(C.I.碱性紫 1)反应制得。 商品通常为锌复盐 C26H33N3Cl2ZnCl2(称 C.I.碱性蓝 20)。 用于细菌染色(新鲜标本细胞核染色)甲基绿-盐酸混合物用于检定精子、 淋球菌和肥大细胞染色。 甲基绿可用于鉴定 DNA。DNA 遇甲基绿（常温）会被染成蓝绿色。 甲基绿—派洛宁 （methyl green-pyronin）为碱性染料，它分别能与细胞内的 DNA、RNA 结合呈现不同颜色。当甲基绿与派洛宁作为混合染料时，甲基绿与染色质中 DNA 选择性结合显示绿色或蓝色；派洛宁与核仁、细胞质中的 RNA 选择性结 合显示红色。其原因可能是两种染料的混合染液中有竞争作用，同时两种核 酸分子都是多聚体，而其聚合程度有所不同。

甲基绿易与聚合程度高的 DNA 结合呈现绿色。而派洛宁则与聚合程度较低的 RNA 结合呈现红色（但解聚的 DNA 也能和派洛宁结合呈现红色）。即 RNA 对派洛宁亲和力大，被染成红色， 而 DNA 对甲基绿亲和力大，被染成绿色。

使用配制方法 关于吡罗红和甲基绿分装粉的使用方法 试剂及配制方法（ 1） 试剂 ） 质量分数为 0.9%的 NaCl 溶液，质量分数为 8%的盐酸，乙酸钠，乙酸， 蒸馏水，吡罗红甲基绿混装粉。如果化学试剂商店没有吡罗红甲基绿混装粉， 可以分别购买甲基绿和吡罗红 G，然后按 A 液的第二种方法配制（见下文）。（ 2） 染色剂的配制 ） ①染色剂 A 液的两种配制方法 第一种方法：取吡罗红甲基绿粉 1 g，加入到 100 mL 蒸馏水中溶解，然 后用滤纸过滤，将滤液放入棕色瓶中备用。 第二种方法：取甲基绿 2 g 溶于 98 mL 蒸馏水中，取吡罗红 G 5 g 溶于 95 mL 蒸馏水中。取 6 mL 甲基绿溶液和 2 mL 吡罗红溶液加入到 16 mL 蒸馏 水中，即为 A 液，放入棕色瓶中备用。（注意：用于核酸染色的是吡罗红 G， 请不要错买吡罗红 B。） ②染色剂 B 液的配制方法 B 液是一种缓冲液， 由乙酸钠和乙酸混合而成。 先取乙酸钠 16.4 g，用蒸馏水溶解至 1 000 mL 备用；再取乙酸 12 mL，用蒸 馏水稀释至 1 000 mL 备用。取配好的乙酸钠溶液 30 mL 和稀释的乙酸 20 mL， 加蒸馏水 50 mL，配成 pH 为 4.8 的 B 液（缓冲液）。 ③染色剂的配制 染色剂是由 A 液、B 液混合配制而成的。取 A 液 20 mL 和 B 液 80 mL 混合，就是实验中所用的吡罗红甲基绿染色剂。应该注意的是 该试剂应现配现用