如何提取芦荟RNA 最好是苯酚法
动植物组织mRNA提取：
一、材料
水稻叶片或小鼠肝组织。
二、设备
研钵，冷冻台式高速离心机，低温冰箱，冷冻真空干燥器，紫外检测仪，电泳仪，电泳槽。
三、试剂
1、无RNA酶灭菌水：用将高温烘烤的玻璃瓶（180℃ 2小时）装蒸馏水，然后加入0.01%的DEPC（体积/体积），处理过夜后高压灭菌。
2、75%乙醇：用DEPC处理水配制75%乙醇，（用高温灭菌器皿配制），然后装入高温烘烤的玻璃瓶中，存放于低温冰箱。
3、1×层析柱加样缓冲液；20mmol/L Tris·Cl(pH7.6)，0.5mol/L NaCl，1mmol/L EDTA(pH8.0)，0.1% SDS。
4、洗脱缓冲液：10mmol/L Tris·Cl (pH7.6)，1mmol/L EDTA (pH8.0)，0.05% SDS。
四、操作步骤
（一）动植物总RNA提取-Trizol法
Trizol法适用于人类、动物、植物、微生物的组织或培养细菌，样品量从几十毫克至几克。用Trizol法提取的总RNA绝无蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑点分析，斑点杂交， Poly(A)+分离，体外翻译，RNase封阻分析和分子克隆。
1、将组织在液N中磨成粉末后，再以50-100mg组织加入1ml Trizol液研磨，注意样品总体积不能超过所用Trizol体积的10%。
2、研磨液室温放置5分钟，然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿，盖紧离心管，用手剧烈摇荡离心管15秒。
3、取上层水相于一新的离心管，按每mlTrizol液加0.5ml异丙醇的比例加入异丙醇，室温放置10分钟，12000g离心10分钟。
4、弃去上清液，按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇，涡旋混匀，4℃下7500g离心5分钟。
5、小心弃去上清液，然后室温或真空干燥5-10分钟，注意不要干燥过分，否则会降低RNA的溶解度。然后将RNA溶于水中，必要时可55℃-60℃水溶 10分钟。RNA可进行mRNA分离，或贮存于70%乙醇并保存于-70℃。
[注意] 1、整个操作要带口罩及一次性手套，并尽可能在低温下操作。
2、加氯仿前的匀浆液可在-70℃保存一个月以上，RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周，-20℃保存一年。
（二）mRNA提取
由于mRNA末端含有多poly(A)+，当总RNA流径oligo(dT)纤维素时，在高盐缓冲液作用下，mRNA被特异的吸附在oligo(dT)纤维素柱上，在低盐浓度或蒸馏水中，mRNA可被洗下，经过两次oligo(dT) 纤维素柱，可得到较纯的mRNA。
1、用0.1mol/L NaOH悬浮0.5-1.0g oligo(dT)纤维素。
2、将悬浮液装入灭菌的一次性层析柱中或装入填有经DEPC处理并经高压灭菌的玻璃棉的巴斯德吸管中，柱床体积为0.5-1.0ml，用3倍柱床体积的灭菌水冲洗柱床。
3、用1x柱层析加样缓冲液冲洗柱床，直到流出液的pH值小于8.0。
4、将（一）中提取的RNA液于65℃温育5分钟后迅速冷却至室温，加入等体积2x柱层析缓冲液，上样，立即用灭菌试管收集洗出液，当所有RNA溶液进入柱床后，加入1倍柱床体积的1x层析柱加样溶液。
5、测定每一管的OD260，当洗出液中OD为0时，加入2-3倍柱床体积的灭菌洗脱缓冲液，以1/3至1/2柱床体积分管收集洗脱液。
6、测定OD260，合并含有RNA的洗脱组分。
7、加入1/10体积的3M NaAc(pH5.2)， 2.5倍体积的冰冷乙醇， 混匀， -20℃30分钟。
8、4℃下12000g离心15分钟，小心弃去上清液，用70%乙醇洗 涤沉淀，4℃下12000g离心5分钟。
9、小心弃去上清液，沉淀空气干燥10分钟，或真空干燥10分钟。
10、用少量水溶解RNA液，即可用于cDNA合成（或保存在70%乙醇中并贮存于-70℃）。
[注意] 1、mRNA在70%乙醇中-70℃可保存一年以上。
2、oligo(dT)纤维素柱用后可用0.3mol/l NaOH洗净，然后用层析柱加样缓冲液平衡，并加入0.02%叠氮钠（NaN3）冰箱保存，重复使用。每次用前需用NaOH水层析柱加样缓冲液依次淋洗柱床。
兔肝RNA的制备：
实验目的
1.学习从兔肝中提取RNA的方法。
2.通过地衣酚显色法测定RNA的含量。
实验原理
细胞内大部份RNA均与蛋白质结合在一起，并且多以核蛋白的形式存在。因此，分离制备RNA时，首先遇到的是必须使RNA与蛋白解离，并除去蛋白质。由于RNA的种类来源和存在形式不同，所用的制备方法各异，一般常用的方法有，盐酸胍法，去污剂法和苯酚法。其中，以苯酚法使用较为广泛。产品纯度高，适合小规模生产。
动物组织中以肝脏器官RNA含量较为丰富。经组织匀浆用苯酚处理并离心后RNA溶于上层被酚饱和的水相中，DNA和蛋白质则留在酚层中，向水层中加入乙醇后，RNA即以白色絮状沉淀析出。此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的的RNA具有生物活性。工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA；其工艺简单，所提取的核酸均为变性RNA，只能用作制备核苷酸原料。本实验就是将兔肝组织，在酚与十二烷基硫酸钠的存在下，RNA与蛋白质分离使蛋白质变性凝固。RNA溶解在水相中，用乙醇使RNA从水相中沉淀，达到分离。
RNA含量的测定，除了可用紫外吸收法及定磷法外，常用地衣酚法测定，其反应原理是当RNA与浓盐酸共热时，即发生降解，形成的核糖继而转变成糠醛，后者与3， 5-二羟甲苯（地衣酚orcinol)反应，在Fe3+或Cu2+催化下，生成鲜绿色的复合物．反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20－250微克范围内，光吸收与RNA浓度 成正比。地衣酚反应特异性较差，凡是戊糖均有此反应。DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。
实验试剂
0.05mol/L醋酸缓冲液（PH5.0）
0.05mol/L醋酸钠35毫升， 0.2mol/L醋酸15毫升，加蒸馏水至1000毫升，混合后测PH5.0
25%SDS:称取SDS25克，溶于50％乙醇中至100毫升，室温存放。
80％酚：取苯酚80份，加蒸馏水20份，混匀后装棕色瓶中。
2mol/L醋酸钠：取无水醋酸钠16。4克，用蒸馏水溶解后配成100毫升
95％乙醇
RNA标准溶液：取酵母标准RNA配成100μg/ml溶液。
样品待测液：准确稀释成每毫升溶液含RNA干燥制品50-100μg。
地衣酚试剂：先配制0.1%三氯化铁的浓盐酸溶液，实验前以此溶液为溶剂配成0.1%地衣酚溶液。
操作步骤
RNA提取：将新鲜兔肝浸入预冷0度0.05mol/L醋酸钠缓冲液(PH5.0)中,除去肝脏处的结缔组织,除去血凝,用滤纸吸干,称取0.9克.
取0.9克肝脏,加入 0.05mol/L醋酸缓冲液(PH5.0)9毫升,250克/升.SDS1.5毫升,移入匀浆管中,匀浆后再加入等体积80%酚,再匀浆一次.
移入三角瓶中,置65度水浴中继续振摇5-8分,取出流水冷却.
离心,3000转/分,10-15分,上层为稍混浊,含有RNA的水相,中层为变性蛋白,下层为酚液,管底残渣,含有RNA.吸出上层水溶液要RNA的收获量,可向中下层液中再加1/2体积的醋酸缓冲液,同样在65度水浴中振摇提取一次,离心后所收得的上层水液,可与上述水液合并,本次实验只提取一次.
用量筒测水液的量,加入1/10体积的2mol/L醋酸钠混匀.再加入2.5倍体积预冷的95%乙醇混匀,冷却放置絮状沉淀充分形成.
离心3000转/分,10分钟,倾出上清(不要废弃,可倒入收集瓶,作蒸馏回收乙醇用.
沉淀用蒸馏水4毫升溶解,慢慢向沉淀中加入蒸馏水,不断搅拌,至沉淀完全溶解即可,待作含量测定
可以60℃下水浴加热成液体，先配置80%苯酚：80g苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20g水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
配置方法:将装有苯酚的试剂瓶放在40~50度的水浴中，待苯酚融化有液体生成，然后乘热用滴管吸出滴在放置在天平上并去皮的烧杯中，称取一定质量的苯酚，然后加入一定体积的水，混匀即可。
扩展资料
苯酚的危害：
1、苯酚对皮肤、粘膜有强烈的腐蚀作用，可抑制中枢神经或损害肝、肾功能。急性中毒：吸入高浓度蒸气可致头痛、头晕、乏力、视物模糊、肺水肿等。
2、环境危害：对环境有严重危害，对水体和大气可造成污染。
3、燃爆危险：该品可燃，高毒，具强腐蚀性，可致人体灼伤
参考资料来源：百度百科—苯酚
制备方法
1.苯磺酸用发烟硫酸磺化、中和，再经碱熔、酸化、正丁醇萃取、蒸去溶剂后，经蒸馏而得成品。
2.由间二硝基苯加氢制得间苯二胺，再由间苯二胺水解制得。
3.间氨基苯酚水解制得。
间苯二酚也可以由苯和丙烯采用二异丙苯过氧化法来生产，该法与异丙苯法制苯酚相似。
苯酚是重要的有机化工原料，用它可制取酚醛树脂、己内酰胺、双酚A、水杨酸、苦味酸、五氯酚、2,4-D、己二酸、酚酞n-乙酰乙氧基苯胺等化工产品及中间体，在化工原料、烷基酚、合成纤维、塑料、合成橡胶、医药、农药、香料、染料、涂料和炼油等工业中有着重要用途。
此外，苯酚还可用作溶剂、实验试剂和消毒剂,苯酚的水溶液可以使植物细胞内染色体上蛋白质与DNA分离，便于对DNA进行染色。
广泛用于制造酚醛树脂、环氧树脂、锦纶纤维、增塑剂、显影剂、防腐剂、杀虫剂、杀菌剂、染料、医药、香料和炸药等。
扩展资料
已经有许多苯酚降解菌株得到了分离和研究。
已分离鉴定的微生物包括根瘤菌（rhizobia）、藻类 （alga Ochromaonas）、酵母菌（Yeast trichosporon）、醋酸钙不动杆菌 （A.calcoaceticus）、 假单胞菌 （pseudomonas.Sp)、真养产碱菌（Alcaligenes eutrophus)、 反硝化菌（Denitrifying bacteria）等苯酚降解菌。
最常见的酚降解菌是假单胞菌（Pseudomonas）和不动杆菌（Acinetobacter），它们对酚的最大降解浓度一般在 1 200 mg/L 以下。
沈锡辉等分离到 1 株能以苯酚、苯甲酸、对甲 酚、苯为唯一碳源和能源生长、具有同时降解单环和 双环芳烃能力的细菌菌株，经生理生化、16SrRNA 基 因序列分析等鉴定为红球菌 PNAN5 菌株。在温度为 20～40 ℃，pH7.0～9.0 范围内该菌株降解苯酚的效率 保持在 80% ～100%之间，苯酚浓度在 2～10 mmol/L 范围内变化对降解效率没有明显的影响。
该菌株通 过邻苯二酚 1，2—双加氧酶催化的开环途径降解芳 烃，不同于已知的浑浊红球菌，后者是通过邻苯二酚 2，3—双加氧酶催化芳烃降解。
参考资料来源：百度百科-苯酚
污水大都有毒性。但有一种叫水葱的植物，它既能吸收水中的有毒物质，又能杀死水中的细菌。污水池塘中足以使鱼类死亡的有机物有十几种，如果种上水葱，那些有毒的有机物就会被它吸收掉。例如，当污水中酚的浓度达400毫克／升时，水葱在一个月内就可将其全部吸收。
除了水葱以外，芦苇、香蒲、凤眼莲、空心苋、金鱼藻、浮萍等也都有比较好的净化污水的能力。特别是凤眼莲，在含锌10毫克／升的污水中，栽上凤眼莲，只要一个多月，它体内的含锌量就会比在不含锌的水体中种植的凤眼莲增加133％。
植物吸收水中有毒物质的能力是很强的，一般可以吸收高于水中浓度的几十倍，甚至几千倍的有毒物质。例如，芦苇吸收锰的浓度可以为水中浓度的1770倍，吸收铁的浓度为水中浓度的3388倍；狐尾藻吸收钴的浓度为水中浓度的19倍，吸收锌的浓度为水中浓度的2670倍。
但要注意的是，有些有毒物质如氰、砷、铬、汞等，它们在植物体内移动慢，常常聚集在植物的根部；而镉与硒等元素转移很快，可以从植物的根部转移到茎和叶，而且有一部分还能进入果实和种子。明白了这一点，我们就要特别注意，在有氰、砷、铬、汞污染的地区，绝对不能种植食用根茎的作物，如马铃薯、莲藕、荸荠等；在硒和镉污染地区，不要栽种食叶的菜以及食果实、种子的禾谷类作物，以防毒物危害人体。
那么，植物吸收了有毒物质，为什么不会受毒害呢？因为它们有一种本领，能够在体内将有毒物质分解转化成为无毒物质。植物从水中吸收酚后，大部分参加了糖的代谢过程，和糖结合后形成酚糖甙，酚就丧失了毒性。植物也能吸收苯酚，它在无光条件下把苯酚分解成二氧化碳，从而免除了毒性。氰进入植物体后，与丝氨酸结合形成腈丙氨酸，再转化为天冬醯胺酸及天冬氨酸，这两种物质都无毒性。植物真是一种天然的“净化器”啊！
植物清除污水毒物的本领，在环保工作中具有十分重要的意义。随着现代工业的发展，各地水污染加重，可请植物来解除或减低水的毒性，以保护环境不受污染。
加NaOH,蒸馏.剩余的溶液中含有苯酚钠,再通入CO2,苯酚钠与CO2反应生成苯酚
名词解释：
苯酚（化学式：C₆H₅OH，PhOH），又名石炭酸、羟基苯，是最简单的酚类有机物，一种弱酸。常温下为一种无色晶体。有毒。苯酚是一种常见的化学品，是生产某些树脂、杀菌剂、防腐剂以及药物（如阿司匹林）的重要原料。
苯酚是一种常见的化学品，是生产某些树脂、杀菌剂、防腐剂以及药物（如阿司匹林）的重要原料。
基本性质
物理性质
外观与性状：白色结晶，有特殊气味。
CAS号： 108-95-2 [2]
熔点(℃)：40.6
相对密度（水=1）：1.07
沸点(℃)：181.9
相对蒸气密度（空气=1）：3.24
折射率1.5418
闪点79.5℃
分子式：C6H6O
化学式：C6H5OH，PhOH
分子量：94.11
饱和蒸气压(kPa)：0.13(40.1℃)
燃烧热(kJ/mol)：3050.6
临界温度(℃)：419.2
临界压力(MPa)：6.13
辛醇/水分配系数的对数值：1.46
闪点(℃)：79
爆炸上限%(V/V)：8.6
引燃温度(℃)：715
爆炸下限%(V/V)：1.7
溶解性：可混溶于醚、氯仿、甘油、二硫化碳、凡士林、挥发油、强碱水溶液。室温时稍溶于水，与大约8%水混合可液化，65℃以上能与水混溶，几乎不溶于石油醚。
毒性：有特殊的气味，有强腐蚀性。有毒，LD50 530mg/kg。
化学性质
可吸收空气中水分并液化。有特殊臭味，极稀的溶液有甜味。腐蚀性极强。化学反应能力强。与醛、酮反应生成酚醛树脂、双酚A，与醋酐；水杨酸反应生成醋酸苯酯、水杨酸酯。还可进行卤代、加氢、氧化、烷基化、羧基化、酯化、醚化等反应。苯酚在通常温度下是固体，与钠不难顺利发生反应，如果采用加热熔化苯酚，再加入金属钠的方法进行实验，苯酚易被还原，在加热时苯酚颜色发生变化而影响实验效果。有人在教学中采取下面的方法实验，操作简单，取得了满意的实验效果。在一支试管中加入2-3毫升无水乙醚，取黄豆粒大小的一块金属钠，用滤纸吸干表面的煤油，放入乙醚中，可以看到钠不与乙醚发生反应。然后再向试管中加入少量苯酚，振荡，这时可观察到钠在试管中迅速反应，产生大量气体。这一实验的原理是苯酚溶解在乙醚中，使苯酚与钠的反应得以顺利进行。苯酚与溴水反应生成白色沉淀（三溴苯酚）
可以用氯化铁溶液检验苯酚，加入氯化铁后可观察到溶液变成紫色。苯酚与溴水反应生成三溴苯酚白色沉淀。
共轭效应：苯酚酚羟基氧上的带孤对电子的p轨道可以与苯环大π键共轭，共8个π电子
用途：苯酚是重要的有机化工原料，用它可制取酚醛树脂、己内酰胺、双酚A、水杨酸、苦味酸、五氯酚、2,4-D、己二酸、酚酞n-乙酰乙氧基苯胺等化工产品及中间体，在化工原料、烷基酚、合成纤维、塑料、合成橡胶、医药、农药、香料、染料、涂料和炼油等工业中有着重要用途。此外，苯酚还可用作溶剂、实验试剂和消毒剂,苯酚的水溶液可以使植物细胞内染色体上蛋白质与DNA分离，便于对DNA进行染色。
基本结构
苯酚结构中含有一个苯环，羟基与苯环直接相连。苯酚中所有原子都在同一平面内。
从化学环境中看，苯酚中有4种氢，分别是酚羟基中的氢，以及苯环中酚羟基的邻、间、对位的3个氢。
苯酚的1H NMR（核磁共振氢谱），也证实了这一点。图中共有四个峰，代表了四种氢的存在。
1. 实验原理在碱性条件下，利用多酚的还原性，多酚可以将磷乌钼酸还原成蓝色，蓝色深浅与多酚含量呈正相关，可以用分光光度计进行测定。
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总酚 - 总酚,总,酚 - 早旭阅读
2021年8月25日它们在水溶液中同时以中性分子和酚阴离子的形式存在,总多酚就是以两种形式存在的多酚总和(即不包括酚类物质中的苯酚,包括苯酚
一.通风法去除甲醛：
通过室内空气的流通，可以降低室内空气中有害物质的含量，从而减少此类物质对人体的危害。冬天，人们常常紧闭门窗，室内外空气不能流通，不仅室内空气中甲醛的含量会增加，氡气也会不断积累，甚至达到很高的浓度。
二.活性炭吸附法
活性炭是国际公认的去甲醛能手，活性炭口罩，防毒面具都使用活性炭。活性炭技术相对成熟，无任何化学添加剂，对人身无任何影响，通过物理吸附不造成二次污染。每平方米放置几十克，72小时可基本除尽室内异味。
三.植物除味法
轻度污染可以选择植物，加上通风就可以。好一些的是植物提取液迪亚林，首先较化学去除甲醛法它安全无二次污染，比之植物去除法，由于它是草本提取液，所以效果比较好。
