氮蓝四唑的分子量是多少啊

氮蓝四唑（NBT）法测定超氧物歧化酶（SOD）活力

一、原理

超氧物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）普遍存在于动、植物体内，是一种清除超氧阴离子自由基的酶。本实验依据超氧物歧化酶抑制氮蓝四唑（NBT）在光下的还原作用来确定酶活性大小。在有氧化物质存在下，核黄素可被光还原，被还原的核黄素在有氧条件下极易再氧化而产生O2，可将氮蓝四唑还原为蓝色的甲腙，后者在560nm处有最大吸收。而SOD可清除O2，从而抑制了甲腙的形成。于是光还原反应后，反应液蓝色愈深，说明酶活性愈低，反之酶活性愈高。据此可以计算出酶活性大小。

二、材料、仪器设备及试剂

（一）材料；水稻或小麦叶片

（二）仪器设备：1.高速台式离心机；2.分光光度计；3.微量进样器；4.荧光灯（反应试管处照度为4000Lx）；5.试管或指形管数支。

（三）试剂

1. 0.05mol/L 磷酸缓冲液（pH7.8）；

2. 130mmol/L 甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml；

3.750μmol/L 氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存；

4. 100μmol/L EDTA－Na2溶液：称取0.03721gEDTA－Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；

5. 20μmol/L 核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml避光保存。

三、实验步骤

1. 酶液提取 取一定部位的植物叶片（视需要定，去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使终体积为5ml。取1.5～2ml于1000rpm下离心20min，上清液即为SOD粗提液。

2. 显色反应 取5ml指形管（要求透明度好）4支，2支为测定管，另2支为对照管，按下列加入各溶液：试剂（酶）用量（ml）终浓度（比色时）0.05mol/L 磷酸缓冲液1.5130mmol/L Met溶液0.313mmol/L 750μmol/L NBT溶液0.375μmol/L 100μmol/L EDTA－Na2液0.310μmol/L 20μmol/L 核黄素0.320μmol/L 酶液0.052支对照管以缓冲液代替酶液蒸馏水0.25总体积3.0混匀后将1支对照管置暗处，其它各管于4000Lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时间缩短，低时延长）。

3. SOD活性测定与计算 至反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其它各管的吸光度。

四、结果计算

已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50％为一个酶活性单位表示，按下式计算SOD活性。SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt)

上式中，SOD比活力＝SOD总活性蛋白质含量式中SOD总活性以每克鲜重酶单位表示；比活力单位以酶单位／mg蛋白表示Ack照光对照管的吸光度AE样品管的吸光度V样品液总体积（ml）Vt测定时样品用量（ml）W样鲜重（g）蛋白质含量单位为：mg蛋白／g鲜重。

百度知道里面就有……

试剂：1）0.05mol·L-1磷酸缓冲液（pH7.8）；2）130mmol·L-1甲硫氨酸（Met）溶液：称1.9399gMet用磷酸缓冲液定容至100ml；

3）750μmol·L-1氮蓝四唑溶液：称取0.06133gNBT用磷酸缓冲液定容至100ml，避光保存；4）100μmol·L-1EDTA-Na2溶液：称取0.03721g

EDTA-Na2用磷酸缓冲液定容至1000ml；5）20μmol·L-1核黄素溶液：称取0.0753g核黄素用蒸馏水定容至1000ml避光保存。

酶活性测定的原理：

超氧物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）

活性的测定 SOD采用氮蓝四唑（nitro-blue tetrazolium，NBT）法（Beauchamp和Fridovich，1971）。反应步骤为：取200μl粗提液，加入3.7 ml NBT反应液50mmol/LpH7.8的磷酸缓冲液（PBS）配制的含77.12μmol/L氮蓝四唑, 100μmol/LEDTA－Na2和13.37mmol/L甲硫氨酸溶液〕，在30℃下保温2分钟后加入100μl核黄素溶液（pH7.8的50mmol/L磷酸缓冲液中含80.2μmol/L 核黄素和100μmol/LEDTA－Na2），在4000Lx日光下反应20min。然后迅速测定A560。以不照光的管做空白。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。酶活性按以下公式计算：以抑制NBT光化还原的50％为一个SOD活性单位，结果以U/mg蛋白表示。以加缓冲液代替酶液的作为对照。

SOD总活性＝(Ack－AE)×V/(Ack×0.5×W×Vt) 式中， Ack为照光对照管的吸光度；AE为样品管的吸光度；V为样品液总体积（ml）；Vt为测定时样品用量（ml）；W为样品鲜重（g）或蛋白质含量（mg）。

过氧化氢酶（Catalase，CAT）

活性测定 CAT 活性参照Aebi (1984)[7]的方法进行测定。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL 。400 μL反应液含50 mmol/L的PBS (pH 7.0)，30 mmol/L的H2O2和50 µL粗酶液。反应从加入过氧化氢开始计时，连续测定在240 nm吸光度的降低值。酶活性定义为：一个过氧化氢酶单位相当于在规定条件下于温度25℃，pH7.0条件下1分钟分解1μmol过氧化氢所需酶量，结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。

多酚氧化酶（Polyphenoloxidase，PPO）

活性的测定 PPO活性测定采用邻苯二酚法（Aquino-Bolaños和Mercado-Silva，2004）。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。350µL反应液（用50mmol/L，pH6.4的PBS配制，内含100µmol/L邻苯二酚）中加入50 µL的粗酶液，平衡1分钟后连续测定398nm吸光度的变化。以1分钟内398nm吸光度上升0.01为一个酶活性单位，结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。

过氧化物酶（Peroxidase，POD）

活性测定POD活性测定采用愈创木酚法（Lurie等，1997)。用酶标仪进行测定时按比例调整为总反应体积为400μL。反应体系为30μL粗酶液，290 µL 0.3%愈创木酚（用50 mmol/L的PBS配制，pH 6.4）和 80µL0.3%H2O2（用50 mmol/L的PBS配制，pH 6.4）。反应在加入H2O2 后开始准确记时。连续吸光度在470 nm的上升值。酶活性以每分钟上升0.01为一个单位，结果以U/mg蛋白或U/g鲜重表示。

碱性磷酸酶底物溶液:

1）NBT（氮蓝四唑）溶液:在10ml 70%的而甲基酰胺中溶解0.5gNBT。

2）BCIP（5-溴-4-氮-3-吲哚磷酸）溶液:在10ml 70%的而甲基酰胺中溶解0.5g BCIP。

3）碱性磷酸酶缓冲液：100mmol／LNaCl；5mmol／L MgCl2；100mmol／L Tris-HCl（pH9.5），置密闭容器中保存，此溶液稳定。

4）取66rdNBT溶液与10ml碱性磷酸酶缓冲液混匀，加入33plBCIP溶液。

5）辣根过氧化物酶底物溶液：用9ml的0.01mol／L Tris-Cl（pH7.6）溶液中溶解6mg 3—3，—二氨基联苯胺，加入lml 0.3％（w／v）NiCl2或CoCl2，用Whatmanl号滤纸过滤以除去沉淀，加入10yB0％H202混匀后立即使用。此溶液须在临用时配制。

（1） Tris 吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜。

（2） 氨基乙酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜。

避免吸入尘埃。

（3） X-半乳糖 (X-gal)：对眼睛和皮肤有毒性。

使用粉剂时遵循常规注意事项。

应注意的是，X-gal 溶液是在一种有机溶剂（DMF）中制备的。

（4）β-半乳糖苷酶：有 *** 性，可产生过敏反应。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜。

（5）苯二胺 ：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（6）苯酚：有剧毒性和高度腐蚀性，可致严重烧伤。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好合适的手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内操作。

若有皮肤接触药物，可用大量清水冲洗，并用肥皂和水清洗，不要用乙醇洗。

（7）苯甲基磺酰氟化物(PMSF)：为一有剧毒的胆碱酯酶抑制剂。

对上呼吸道的黏膜、眼睛和皮肤有极大损害。

戴好合适的手套和护目镜，在通风橱内操作。

万一眼睛或皮肤接触到此药品，立即用大量的水冲洗，丢弃被污染的衣物。

（8）苯甲酸：有 *** 性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜，不要吸入。

（9）苯甲酸苄酯：有 *** 性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

避免接触眼睛。

戴好合适的手套和护目镜。

（10）苯乙醇：有 *** 性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜，远离火源、火花和明火。

（11）丙烯酰胺（未聚合的）：为一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收（有累积效应）。

避免吸入尘埃。

称量丙烯酰胺和亚甲基双酰胺粉末时，戴好手套和面罩，在化学通风橱内操作。

聚合的丙烯酰胺是无毒的，但是使用时也应小心，因为其中可能喊有少量未聚合的丙烯酰胺。

（12）蛋白酶K：有 *** 性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜。

（13）碘化丙锭：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

*** 眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。

可诱导突变并可能致癌。

戴好手套和护目镜，穿好防护服，在通风橱内小心操作。

（14）碘乙酰胺：能碱基化蛋白质上的氨基，从而影响抗原的氨基酸序列分析。

有毒性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作，勿吸入尘埃。

（15）叠氮化钠：有剧毒性，可阻断细胞色素电子转运系统。

含此药物的溶液要明确标记。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜，并小心使用。

此药品为氧化剂，故保存时要远离可燃物品。

（16）多聚甲醛：有剧毒。

易通过皮肤吸

收，并对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有严重破坏性。

避免吸入尘埃。

戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。

多聚甲醛是甲醛的未解离形式。

（17）3，3’-二氨基联苯胺四氢氯化物：为一种致癌剂，操作时要非常小心。

避免吸入气体。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（18）二甲苯：可燃，高浓度有麻醉作用。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

始终远离热源、火花和明火。

（19）二甲苯蓝：见二甲苯。

（20）二甲次胂酸钠：可能为致癌剂，并含有砷，有剧毒性。

戴好手套和护目镜，只在通风橱内操作。

（20）二甲次胂酸钠：可能为致癌剂，并含有砷，有剧毒性。

戴好手套和护目镜，只在通风橱内操作。

（21）N，N-二甲基酰胺(DMF)： *** 眼睛、皮肤和黏膜。

可通过吸入，摄入，和皮肤吸收发挥其毒性。

慢性吸入可导致肝、肾损害。

戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。

（22）二甲亚砜(DMSO)：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。

DMSO为可燃物保存于密封容器中。

远离热源、火花和明火。

（23）二硫苏糖醇(DTT)：为一强还原剂，有恶臭味。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

当使用固体形式或高浓度溶液时，戴好手套和护目镜并在通风橱内操作。

（24）4ˊ，6-二脒基-2ˊ-苯基吲哚盐酸(DAPI)：可能为一种致癌剂。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

可引起 *** 。

避免吸入。

戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。

（25）放射性物质：当计划的一个实验涉及放射性物质的使用时，应包括以下内容：同位素的理化性质（如半衰期，放射型，辐射能量），辐射物质的化学形式，其辐射度（具体的活性）总量，化学浓度，需要使用多少就预定多少，使用放射性物质时，要始终戴好手套和护目镜，穿实验室工作服。

X和γ射线为由仪器产生放射性物质辐射出的短波电磁波，它们会丛放射源辐射出来或聚成光束。

它们的潜在危险决定于暴露于其中的时间、强度和它的波长。

（26）放线菌素D：是一种畸胎剂和致癌剂，有剧毒。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害，甚至是致命的。

应避免吸入。

戴好手套和护目镜，并始终在化学通风橱内操作，放线菌D见光分解。

（27）高压玻璃器皿时要格外小心。

高压锅和金属容器中的玻璃器皿，宜放入金属网中或蒲氏隔板中。

在真空状态下使用玻璃器皿，如真空收集器、干燥设备或氩气条件下的反应器等，要谨慎操作。

戴好护目镜。

（28）过二硫酸铵：对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的破坏性。

吸入可致命。

戴好手套和护目镜，穿好防护服。

必须在化学通风橱内操作。

操作后要彻底清洗。

（29）过氧化氢：有腐蚀性、毒性，对皮肤有强损害性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜，只在化学通风橱内操作。

（30）环乙酰亚胺：吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

戴好手套和护目镜，只在化学通风橱内操作。

（31）磺基蓖麻酸（二水合物）；对黏膜和呼吸系统有极大破坏性。

不要吸入粉尘，戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。

（32）甲氨蝶呤(MTX)：为一种致癌剂和致畸胎剂。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

暴露于其中可导致胃肠反应，骨髓抑制，肝或肾损害。

戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。

（33）甲醇：有毒，可致失明。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

要有足够的通风以减少挥发气。

不要吸入这些气体。

戴好手套和护目镜，在化学通风橱内操作。

（34）甲基磺酸乙酯(EMS)：为一种可诱导机体突变和突变和致癌的挥发性有机溶剂。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成伤害。

（35）甲醛：有剧毒性和挥发性。

也是一种致癌剂。

可通过皮肤吸收，对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有 *** 或损伤。

避免吸入气体。

戴好手套和护目镜。

始终在通风橱内操作。

远离热源、火花和明火。

（36）甲酸：有剧毒，对黏膜组织、上呼吸道、眼睛、皮肤有极大的损伤。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（37）甲酰胺：可导致畸胎。

其挥发的气体 *** 眼睛、皮肤、黏膜和上呼吸道。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

操作高浓度甲酰胺时要在通风橱内操作。

尽可能将反应的溶液盖住。

（38）焦磷酸钠：有 *** 性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

不要吸入粉尘。

（39）焦碳酸二乙酯(DEPC)：是一种潜在的蛋白质变质剂，且为可疑的致癌剂。

开启时瓶口不要指向操作者或其他人。

瓶内压可导致喷溅。

戴好手套并穿实验室工作服，在通风橱内操作。

（40）聚丙烯酰胺：无毒性，但仍应谨慎使用，因为其中可能含有少量未聚合的物质。

（41）聚乙二醇(PEG)：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

避免吸入粉末。

戴好手套和护目镜。

（42）菌种（运输）：健康教育福利部门根据运输器具将各种细菌划分为不同的类别。

大肠杆菌的非病原种（K12）和枯草芽孢杆菌为第一类，正常运输条件下是无危害或危害性很微小的。

但是沙门菌、嗜血杆菌、链霉菌和假单孢菌的一些菌种为第二类。

第二类细菌为“一般潜

在危害剂：能造成不同严重程度的疾病，但在普通实验室技术下可操作。”

（43）抗淬灭剂：见苯二胺。

（44）考马斯亮蓝：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（45）联结剂(DMP)： *** 眼睛、皮肤和黏膜。

可通过吸入，摄入，皮肤吸收发挥其毒性。

不要吸入气体，戴好手套、面罩和护目镜。

（46）链霉素：有毒性，怀疑为致癌剂和突变诱导剂。

可导致过敏反应。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（47）亮肽素；吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（48）邻苯二甲酸二丁酯：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

不要吸入气体。

（49）磷酸二氢钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（50）磷酸：高腐蚀性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（51）磷酸钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

不要吸入粉尘，在通风橱内操作。

（52）磷酸钠： *** 眼睛和皮肤。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

不要吸入粉尘。

（53）磷酸氢钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（54）硫氰酸胍：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（55）硫氰酸胍盐；见硫氰酸胍。

（56）硫酸：剧毒性，对黏膜组织、上呼吸道、眼睛和皮肤有极大的损伤。

可造成烧伤，与其他物质（如纸）接触可能引发火灾。

戴好手套和护目镜，在通风橱内操作。

（57）硫酸镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（58）氯仿： *** 眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。

为一种致癌剂。

有肝、肾毒性。

有挥发性。

避免吸入蒸汽。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（59）氯化铵：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（60）氯化钙：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（61）氯化钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（62）氯化锂： *** 眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（63）氯化镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（64）氯化锰：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操

作。

（65）氯化铁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（66）氯化锌：有腐蚀性，对胎儿有潜在危险。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（67）3-（N-吗啉）-丙磺酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

*** 眼睛、呼吸道、皮肤和黏膜。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（68）没食子酸丙酯(NPG0：见苯甲酸。

（69）柠檬酸钠：见柠檬酸。

（70）柠檬酸：有 *** 性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（71）硼酸：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（72）羟胺：有腐蚀性和毒性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（73）氢氧化铵：为氨的水溶液。

具有腐蚀性。

操作时要小心。

氨气可从氨水中挥发出来，具有腐蚀性、毒性和爆炸性。

戴好手套。

必须在通风橱内操作。

（74）氢氧化钾：剧毒性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

溶液为强碱性，当心使用。

戴好手套。

（75）氢氧化钠：溶液有剧毒，强碱性，当心使用。

戴好手套。

其他所有高浓度碱溶液都应以类似方式操作。

（76）秋水仙碱：有剧毒，可致命，可导致癌症和可遗传的基因损害。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

不要吸入粉尘。

（77）β-巯基乙醇：吸入或皮肤吸收可致命，摄入有害。

高浓度溶液对黏膜、上呼吸道、皮肤和眼睛有极大损害。

β-巯基乙醇有难闻气味。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（78）去氧胆酸钠： *** 黏膜和呼吸道。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

使用粉末时，戴好手套和护目镜。

不要吸入粉尘。

（79）溶剂；谨慎操作。

（80）溶菌酶：对黏膜有腐蚀性。

戴好手套和护目镜。

（81）三氯乙酸：有很强的腐蚀性。

戴好手套和护目镜。

（82）三乙胺：有剧毒，易燃。

对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有强腐蚀性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

始终在通风橱内操作。

远离热源、火花和明火。

（83）三乙醇胺：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

始终在通风橱内操作。

（84）十二烷基磺酸钠(SDS)：有毒性和 *** 性，有严重损伤眼睛的危险。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

不要吸入粉尘。

（85）双丙烯酰胺：是一种潜在的神经毒素，可通过皮肤吸收，避免吸入，在称量时，戴好手套和护目镜。

（86）四环素：吸

入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（87）N，N，N’，N’-四甲基乙二胺：对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有极大损伤。

吸入可致命，长时间接触可产生严重 *** 或烧伤。

戴好手套和护目镜。

穿防护服，必须在通风橱内操作。

使用完毕要彻底清洗。

易燃性，其挥发气体可到达一定距离，形成引燃源，瞬间发生火灾。

远离热源、火花和明火。

（88）四水合乙酸镁：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（89）四唑氮蓝；有危险性，小心操作。

（90）碳酸钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（91）同位素125I；在甲状腺，为一潜在的健康杀手。

无论何种形式的同位素都用铅板遮挡。

操作同位素时，要戴一到两副手套，着取决于同位素的用量和所进行的操作难度。

（92）胃酶抑素：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（93）胃酶抑素：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（94）硝酸：具有挥发性，操作时要小心。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

远离热源、火花和明火。

（95）硝酸银：强氧化剂，小心操作。

皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

与其他物质接触会发生爆炸。

（96）溴酚蓝：皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（97）5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷：对眼睛和皮肤有毒性。

皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（98）5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸酯：有毒性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（99）5-溴-2’-脱氧脲苷；为致畸胎剂。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

有 *** 性。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（100）溴乙啡啶：为一种强致突变剂，有毒性。

避免吸入粉尘。

操作含此染料的溶液时，戴上手套。

（101）血（人类）和血产品和爱普斯坦病毒：其中可能含有隐藏的传染性物质，如乙型肝炎病毒、HIV，可能造成实验上室传染。

戴一次性手套，使用吸枪式吸管，在生物安全橱中、操作，防止形成悬浮和污染。

污染的塑料器皿在丢弃前要高压处理；污染的液体高压处理或丢弃前用漂白粉处理至少30min。

（102）N，N’-亚甲基丙烯酰胺：为毒药，作用于中枢神经系统。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

有 *** 性。

戴好手套和护目镜。

（103）亚精胺：有腐蚀性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

有 *** 性。

戴

好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（104）亚铁氰化钾：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

有 *** 性。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内相当谨慎地操作。

远离强酸。

（105）盐酸：有挥发性。

吸入，摄入，皮肤吸收可致命。

对皮肤、眼睛、黏膜和上呼吸道有极大损害。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（106）盐酸胍： *** 黏膜、上呼吸道、皮肤和眼睛。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（107）盐酸胍盐：见盐酸胍。

（108）乙醇：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（109）乙基亚硝基脲：见N-乙基-N-亚硝基脲

（110）N-乙基-N-亚硝基脲（ENU）：有致癌性，为潜在的突变诱导剂。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

用1ml/LNaOH溶液清洗所有接触过ENU的物品。

（111）乙酸铵：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（112）乙醇胺：有毒性。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

具有高腐蚀性，并可与酸发生强烈反应。

（113）乙酸：使用时要非常小心。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（114）乙酸钠：见乙酸。

（115）乙酸铀酰：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

在通风橱内操作。

（116）异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

（117）异丁烯酸酯：有毒。

吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

不要吸入其气体。

（118）异硫氰酸胍盐：见硫氰酸胍盐。

（119）抑肽酶：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤还可导致过敏反应。

暴露其中可引起胃肠反应，肌肉疼痛，血压改变或支气管痉挛。

戴好手套和护目镜。

不要吸入粉尘，必须在通风橱内操作。

（120）月桂酰基氨酸钠：吸入，摄入，皮肤吸收可造成损伤。

戴好手套和护目镜。

不要吸入粉尘。

一、酶液制备称取5.0g果肉,加入5.0ml经4℃预冷的0.1M 、pH=7.5提取缓冲液,在冰浴研磨成匀浆.于4℃,10,000×g离心30min,收集上清液,用于SOD活性测定.二、测定所需溶液的配制：1、0.1mol/l、pH7.8磷酸钠缓冲液 2、提取...

SOD酶活测定方法

（一）氮蓝四唑法

1.

方法提要

在电子供体如甲硫氨酸存在下，核黄素受光激发，与电子供体反应被还原。在氧气中，还原的核黄素与氧化反应产生，

将无色（或微黄）的氮蓝四唑还原为蓝色的不溶性僭

，SOD通过催化

歧化反应，生成O

2

与H

2

O

2

，从而抑制蓝色形成。按抑制蓝色特形成的50%为一酶活单位。酶活力越高，抑制50%蓝色形成所需酶量越少。

2.

仪器

荧光灯管。

离心机。

分光光度计。

pH计。

………………

详细资料请参考：on

http://product.bio1000.com/101315/

抗氧化酶（SOD、POD、CAT）活性测定方法 一、 超氧化物歧化酶（SOD）活性测定（氮蓝四唑光化还原法） 1、试剂的配制 、 （1）0.05mol/L 磷酸缓冲液(PBS，pH7.8)： A 母液：0.2mol/L 磷酸氢二钠溶液: 取 Na2HPO4·12H2O（分子量 358.14）71.7g； B 母液：0.2mol/L 磷酸二氢钠溶液：取 NaH2PO4·2H2O（分子量 156.01）31.2g。 分别用蒸馏水定容到 1000ml。 0.05mol/L PBS（pH7.8）的配制：分别取 A 母液(Na2HPO4) 228.75ml，B 母液(NaH2PO4) 21.25ml，用蒸馏水定容至 1000ml。 参考文献： 参考文献：李合生主编：植物生理生化实验原理和技术.高等教育出版社，2000：267～268。 （2）14.5mM 甲硫氨酸溶液：取 2.1637g Met 用磷酸缓冲液（pH7.8）定容至 1000ml。 （3）30?M EDTA-Na2 溶液：取 0.001gEDTA-Na2 用磷酸缓冲液定容至 100ml。 （4）60?M 核黄素溶液：取 0.0023g 核黄素用磷酸缓冲液定容至 100ml，避光保存。 （5）2.25mM 氮蓝四唑(NBT)溶液：取 0.1840g NBT 用 PBS 定容至 100ml，避光保存。 酶液制备： （可视情况调整） 样品 （新鲜叶片或根系）洗净后置于预冷的研钵中， 酶液制备：取 0.2g 加入 1.6ml 50mmol/L 预冷的磷酸缓冲液 （pH7.8） 在冰浴上研磨成匀浆， 转入离心管中在 4℃、 12000g 下离心 20min，上清液即为酶液。 2、酶活性测定 、 （1） 反应混合液配制(以 60 个样为准)： 分别取 Met 溶液 162ml， EDTA-Na2 溶液 0.6ml， 磷酸缓冲液 5.4ml，NBT 溶液 6ml，核黄素溶液 6ml,混合后摇匀； （2）分别取 3ml 反应混合液和 30?l 酶液于试管中 （3）将试管置于光照培养箱中在 4000 lux 光照下反应 20min； 同时做两支对照管，其中 1 支试管取 3ml 反应混合液加入 30?l PBS（不加酶液）照光 后测定作为最大光还原管，另 1 支只加缓冲液置于暗中测定时用于调零。 （4）以不照光的对照管（只有缓冲液并置于暗处）调零后，避光测 OD560(出现颜色即 可测定)。 （5）酶活性计算：SOD 活性单位以抑制 NBT 光化还原 50％所需酶量（测的样品值要 在最大管的一半左右才合适，否则要调整酶量）为 1 个酶活单位（u） 。 SOD 总活性＝ [( Ack-AE )×V]/（1/2Ack×W×Vt） SOD 比活力＝SOD 总活性/蛋白质含量 SOD 总活性以鲜重酶单位每克表示（u/g FW） ；比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示； Ack 为照光对照管的吸光度； E 为样品管的吸光度； 为样品液总体积 A V （ml,1.6ml， 加入 PBS 的体积)；Vt 为测定时的酶液用量（ml，30ul） ；W 为样品鲜重（g，测定时应换算为叶绿体 的质量 mg） ；蛋白质含量单位为 mg/g。 二、POD、CAT 酶活性的测定 粗酶液制备同 SOD。 1、 过氧化物酶（POD）活性测定（愈创木酚法） 、 过氧化物酶（ ）活性测定（愈创木酚法） （1）试剂配制： 0.2mol/L 磷酸缓冲液(pH6.0)： 分别取 A 母液(Na2HPO4 ) 123ml 和 B 母液(NaH2PO4 ) 877ml 混匀即为 1000ml PBS(0.2M，pH6.0)； （2）反应混合液配制（以 60 个样为准） ： 取 200ml PBS(0.2M，pH6.0)，加入 0.076ml 液体（原液）愈创木酚（2-甲氧基酚）加热 搅拌溶解，冷却后加入 0.112ml 30％的 H2O2，混匀后保存于冰箱中备用。 （3）样品测定： 取 3ml 反应液并加入 30?l 酶液， PBS 为对照调零， 以 而后测定 OD470 值 （测定 40 秒） 。 （边加样边测定，测定前等待 5 秒，动作要快，如果慢的话，要保证每个样品从加好样到开 始记时的时间相差不大） （4）酶活性计算：以每 min OD 值变化（升高）0.01 为 1 个酶活性单位（u） 。 POD=（?A470×Vt）/（W×Vs×0.01×t） (u/g min) ?A470：为反应时间内吸光度的变化；W 为样品鲜重(g)；t 为反应时间(min)；Vt 为提 取酶液总体积（ml，(1.6ml） ；Vs 为测定时取用酶液体积（ml，30ul） 。 2、 过氧化氢酶（CAT）活性测定 、 过氧化氢酶（ ） （1）试剂配制： 0.15mol/L 磷酸缓冲液 （pH7.0）取 A 母液(Na2HPO4) 457.5 ml 和 B 母液(NaH2PO4) 292.5 ： ml 混合后用蒸馏水定容至 1000ml。 （2）反应液配制：取 200ml PBS（0.15M，pH7.0） ，加入 0.3092ml 30%的 H2O2（原液） 摇匀即可。 （3）样品测定：取 3ml 反应液加入 0.1ml（可视情况调整）酶液，以 PBS 为对照调零， 测定 OD240（紫外） （测定 40s） 。 （4）酶活性计算：以每 min OD 值减少 0.01 为 1 个酶活性单位（u） 。 CAT=[?A240×Vt ]/（W×Vs×0.01×t） (u/g min) ?A240：为反应时间内吸光度的变化；W 为样品鲜重(g)；t 为反应时间(min)；Vt 为提 取酶液总体积（ml， 1.6ml） ；Vs 为测定时取用酶液体积（ml, 0.1ml） 。 四、超氧阴离子自由基（O2.-）产生速率的测定（羟胺氧化法） 1、试剂的配制 （1）1mM 盐酸羟胺溶液：称取 0.02085g 盐酸羟胺用蒸馏水定容至 300ml； （2）17mM 对氨基苯磺酸溶液：称取 1.1776g 对氨基苯磺酸用少量冰醋酸水溶液（冰 醋酸：水=1：3 配制）加热溶解后定容至 400ml； （3）7mMα-萘胺溶液：称取 0.4008gα-萘胺用冰醋酸水溶液（冰醋酸：水=3：1 配制） 定容至 400ml。 2、O2.-含量的测定 （1）样品液提取方法同 SOD 测定； （2）取 0.5ml 提取液（酶液） （可视情况调整用量）中加入 0.5ml PBS（0.05M，pH7.8） ， 1ml 1mM 盐酸羟胺溶液后摇匀。 （3）在 25℃下保温 1 小时； （4） 依次先加入 1ml 17mM 对氨基苯磺酸， 再加入 1ml 7mM α-萘胺， 混合后快速摇匀； （5） 25℃下保温 20min 后在 3000×g 下离心 3min 后马上进行测定 在 （或置于冰箱待测） ； （6）以对照管调零（用水调零） ，取粉红色水相液测定 OD530 值（测定） ； （7）O2.-含量的计算：由测得的 OD530，查 NO2-标准曲线得到[NO2-]；根据羟胺与 O2.- 的反应式：NH2OH＋2O2.-＋H+ NO2-＋H2O2 ＋H2O 计算[O2.-]，即[NO2-]×2=[O2.-]；再 根据样品与羟胺反应的时间和样品中的蛋白质含量，求得 O2.-产生速率（以 nmol min-1mg-1 蛋白表示，也可以 nmol min-1g-1 鲜重表示） 。 O2.-产生速率=（C×V）/（t×W） （nmol min-1g-1 鲜重） C 为标准曲线上查得的浓度(umol/L)；V 为测定时所取提取液用量(叶绿体稀释后的体 积)；t 为反应时间(60min)；W 为样品鲜重(叶绿体实际质量 g) 参考文献： （6） 参考文献：王爱国，罗广华．植物生理学通讯，1990， ：55～57 五、丙二醛含量的测定 1、试剂配制： 10%TCA：100g 三氯乙酸 → 1L 0.67%TBA：3.35g 硫代巴比妥酸 → 500ml 10%TCA （避光） 2、测定步骤: 0.2 样品+1.6ml 10%TCA 研磨→12000g 离心 10min →上清 1.5ml +1.5 0.67% TBA →沸水 煮 30min →冷却，离心→上清 OD450，OD532，OD600 3、计算组织中 MDA 含量： MDA 浓度 C (umol/L)=6.45(OD532-OD600)-0.56OD450 MDA 含量(umol/g FW)=C×V/W 式中 V 为提取液体积(1.6ml)，W 为样品鲜重(0.2g)。 六、植物细胞质膜透性的测定（电导仪法） 植物细胞质膜透性的测定（电导仪法） 植物细胞质膜透性的测定 （1）取新鲜叶片或根系（不能萎蔫）0.3g，用自来水冲洗表面污渍，再用去离子水冲洗几 遍后用吸水纸吸干水分； （2）样品剪碎（也可打孔取样）放入试管（或 15ml 大离心管）中，加 10ml 去离子水，在 室温下放置 3h 使叶片充分吸水后测定溶液电导率(R1)； （3）再放入恒温水浴锅中在 100℃沸水浴中煮 20min 以杀死叶片组织，用冷水冷却到室温 后测定溶液电导率(R2)； （4）用公式计算质膜相对透性（用相对电导率表示） ： 相对电导率（%）=R1/R2×100% 还可以计算植株伤害程度： 伤害率=（处理电导率—对照电导率）/（煮沸电导率—对照电导率）×100% 七、可溶性蛋白含量的测定（考马斯亮蓝染色法） 1、试剂的配制 （1）考马斯亮蓝溶液配制：称取 100 mg 考马斯亮蓝，溶于 50 ml 90％乙醇中，加入 100 ml 85％（W/V）的磷酸，再用蒸馏水定容到 1L。在过夜后过滤并贮于棕色瓶中，常温 下可在暗中保存一个月。 （2） 100?g/ml 牛血清蛋白 （BSA） 标准溶液： 称取 25mg BSA 加水溶解后定容至 100 ml， 再从中吸取 40ml 用蒸馏水定容至 100 ml（也可取 10mg BSA 定容至 100ml 即为 100?g/ml 标准 BSA 溶液） 。 2、样品可溶性蛋白含量的测定 （1）样品可溶性蛋白含量测定：取 20?l 提取液（酶液）加入 80?l，0.05M，pH7.8 磷 酸缓冲液（即稀释成 0.1ml 提取液） ，再加入 2.9ml 考马斯亮蓝溶液，反应 2min 后测 OD595 （以 100?l 缓冲液加 2.9ml 考马斯亮蓝为对照调零） 。 （2）蛋白质含量计算： 可溶性蛋白质含量（mg/g）=(C×VT)/(W×VS×1000) ；V C 为标准曲线查得的蛋白质含量（?g） T 为提取液总体积（稀释后的体积 ml） S ；V 为测定时所用提取液体积（ml，20?l） ；W 为样品鲜重（g） 。

1、测定方法很多，常见的有化学法、免疫法和等电点聚焦法。其中化学法应用最普遍，化学法的原理主要是利用有些化合物在自氧化过程中会产生有色中间物和O2 -，利用SOD分解而间接推算酶活力。

2、在化学方法中，最常用的有黄嘌呤氧化酶法，邻苯三酚法，化学发光法，肾上腺素法，NBT-还原法，光化学扩增法，Cyte还原法等。

（1）改良的邻苯三酚自氧化法简单易行较为实用。

（2）化学发光法和光化学扩增法不适用于测定Mn-SOD，但对于Cu/Zn-SOD反应极灵敏。（3）Cyte还原法用于Mn-SOD活力测定结果稳定，重复性好。但专一性和灵敏度不够理想，而且需要特殊仪器，实际应用受到限制。

（4）亚硝酸盐形成法与CN—抑制剂或SDS处理相结合，应用于Mn-SOD测定，灵敏度比Cyte还原法提高数倍，而且专一性强，重复性好，操作方便，不需要特殊仪器和设备，易于实际应用和推广，是目前较好的测定方法之一。