苯酚能用紫外可见分光光度计在波长为300nm测吸光度吗
苯酚在紫外光区的最大吸收波长λmax为270nm,所以你要在300测吸光度也能测出来,但不是吸收的最大值。紫外光谱是一个吸收谱带,而不是谱线,所以在哪个波长(紫外区)都是能测出一个数值的。但如果要定量分析就得在270测定了,否则误差太大。
分光光度计测量的是以空白溶液为参比,在约定厚度(一般为1cm)的量池中的相对吸光值。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。 而酶标仪测定时其光路长度不确定,也无空白参比,得出的是特定条件下的绝对值
酶标仪,即酶联免疫检测仪,是酶联免疫吸附试验的专用仪器。实际上就是一台变相的专用光电比色计或分光光度计,其基本工作原理与主要结构和光电比色计基本相同。可简单地分为半自动和全自动2大类,但其工作原理基本上都是一致的,其核心都是一个比色计,即用比色法来分析抗原或抗体的含量。 ELISA测定一般要求测试液的最终体积在250μL以下,用一般光电比色计无法完成测试,因此对酶标仪中的光电比色计有特殊要求。
如果酶标仪读出的样品的吸光度都高于500,就是高于那种呃呃参考值的吸光度,这种参考值的吸光度是一个非常有精确感的。必须得通过他的那仓库只台能去对比。
分光光度计测量的是以空白溶液为参比,在约定厚度(一般为1cm)的量池中的相对吸光值。因此不同仪器,不同批次测量的数据具有同样的可比性。 而酶标仪测定时其光路长度不确定,也无空白参比,得出的是特定条件下的绝对值。
影响吸光度的因数
是b和c。a是与溶质有关的一个常量。此外,温度通过影响c,而影响A。符号A,表示物质对光的吸收程度。lg(I0/I1)式中I0是通过均匀的液体介质的一束平行光的入射光的强度;It是透射光强度;T是透射比。A值越大,表示物质对光的吸收越大。根据比尔定律,吸光度与吸光物质的量浓度c成正比,以A对c作图,可得到光度分析的校准曲线。
酶标仪测定原理是:在特定波长下,检测被测物的吸光值。
检测单位:
光通过被检测物,前后的能量差异即是被检测物吸收掉的能量,特定波长下,同一种被检测物的浓度与被吸收的能量成定量关系。
检测单位用OD值表示, OD是optical delnsity(光密度)的缩写,表示被检测物吸收掉的光密度, OD=1og(1/trans),其中trans为检测物的透光值。根据Bouger-amberT-beer法则,OD值与光强度成下述关系:
E=OD=logΙ0/Ι其中E表示被吸收的光密度, Ι0 为在检测物之前的光强度,Ι为从被检测物出来的光强度。
OD值由下述公式计算:
E=OD=C×D×E
C为检测物的浓度
D为检测物的厚度
E为摩尔因子
在特定波长下测定每一种物质都有其特定的波长,在此波长下,此物质能够吸收最多的光能量。如果选择其它的波长段,就会造成检测结果的不准确。因此,在测定检测物时,我们选择特定的波长进行检测,称为测量波
长。
但是每一种物质对光能量还存在一定的非特异性吸收,为了消除这种非特异性吸收,我们再选取一个参照波长,以消除这个不准确性。在参照波长下,检测物光的吸收最小。检测波长和参照波长的吸光值之差可以消除非特异性吸收。
一般使用到酶标仪的主要是在食品安全药物残留快速检测中,例如配合北京望尔生物技术有限公司的克伦特罗、氯霉素、呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因、磺胺类、氟喹诺酮类、链霉素、青霉素等残留快速检测ELISA试剂盒使用时,一般使用酶标仪来进行定量检测。如需建设实验室,望尔公司可以提供检测实验室的建设方案和相关详细建议。联系人:刘先生 010-89191492 邮箱:pzwanger008@163.com