为什么硫酸铵能沉淀蛋白质

原理就是：溶液中的离子强度不同时,不同蛋白质的溶解度不同,步骤就是不断加硫酸铵以血浆为例：加到盐浓度20~30%时纤维蛋白原沉淀,再加到浓度50%时球蛋白沉淀,饱和时清蛋白沉淀基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质.用。

盐析法的原理

蛋白质在水溶液中的溶解度取决于蛋白质分子表面离子周围的水分子数目，亦即主要是由蛋白质分子外周亲水基团与水形成水化膜的程度以及蛋白质分子带有电荷的情况决定的。蛋白质溶液中加入中性盐后，由于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化层减弱乃至消失。同时，中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，之蛋白质分子之间聚集而沉淀。由于各种蛋白质在不同盐浓度中的溶解度不同，不同饱和度的盐溶液沉淀的蛋白质不同，从而使之从其他蛋白中分离出来。简单的说就是将硫酸铵、硫化钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质在水溶液中的稳定性因素去除而沉淀。

---摘自百度百科

 在溶液中加入中性盐使生物大分子沉淀析出的过程称为“盐析”。除了蛋白质和酶以外，多肽、多糖和核酸等都可以用盐析法进行沉淀分离。

 盐析法应用最广的还是在蛋白质领域，已有八十多年的历史，其突出的优点是：

 ①成本低，不需要特别昂贵的设备。

 ②操作简单、安全。

 ③对许多生物活性物质具有稳定作用。

 ⑴ 中性盐沉淀蛋白质的基本原理

 蛋白质和酶均易溶于水，因为该分子的－COOH、－NH2和－OH都是亲水基团，这些基团与极性水分子相互作用形成水化层，包围于蛋白质分子周围形成1nm～100nm颗粒的亲水胶体，削弱了蛋白质分子之间的作用力，蛋白质分子表面极性基团越多，水化层越厚，蛋白质分子与溶剂分子之间的亲和力越大，因而溶解度也越大。亲水胶体在水中的稳定因素有两个：即电荷和水膜。因为中性盐的亲水性大于蛋白质和酶分子的亲水性，所以加入大量中性盐后，夺走了水分子，破坏了水膜，暴露出疏水区域，同时又中和了电荷，破坏了亲水胶体，蛋白质分子即形成沉淀。盐析示意图如下页“图 4”所示。

 ⑵ 中性盐的选择

 常用的中性盐中最重要的是（NH4）2SO4，因为它与其他常用盐类相比有十分突出的优点：

 1) 溶解度大：尤其是在低温时仍有相当高的溶解度，这是其他盐类所不具备的。由于酶和各种蛋白质通常是在低温下稳定，因而盐析操作也要求在低温下（0～4℃）进行。由下表可以看到， 硫铵在0℃时的溶解度，远远高于其它盐类：

 表2-1 几种盐在不同温度下的溶解度（克/100毫升水）

 0℃ 20℃ 80℃ 100 ℃

（NH4)2SO4 70.6 75.4 95.3 103

 Na2SO4 4.9 18.9 43.3 42.2

 NaH2PO4 1.6 7.8 93.8 101

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 2) 分离效果好：有的提取液加入适量硫酸铵

盐析，一步就可以除去75％的杂蛋白，纯

度提高了四倍。

 3) 不易引起变性，有稳定酶与蛋白质结构的

作用。有的酶或蛋白质用2～3mol/L浓度的

（NH4）2SO4保存可达数年之久。

 4) 价格便宜，废液不污染环境。

 ⑶ 盐析的操作方法

 最常用的是固体硫酸铵加入法。将其研成细粉，在搅拌下缓慢均匀少量多次地加入，接近计划饱和度时，加盐的速度更要慢一些，尽量避免局部硫酸铵浓度过大而造成不应有的蛋白质沉淀。盐析后要在冰浴中放置一段时间，待沉淀完全后再离心与过滤。

 在低浓度硫酸铵中盐析可采用离心分离，高浓度硫酸铵常用过滤方法。

 各种饱和度下需加固体硫酸铵的量可由附录中查出。

 ⑷ 盐析曲线的制作

 如果要分离一种新的蛋白质和酶，没有文献数据可以借鉴，则应先确定沉淀该物质的硫酸铵饱和度。具体操作方法如下(讲义p39)：

蛋白质量(mg)或酶活力

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 硫铵饱

和度％

 ⑸盐析的影响因素

 1) 蛋白质的浓度：高浓度的蛋白质用稍低的硫酸铵饱和度沉淀，若蛋白质浓度过高，易产生各种蛋白质的共沉淀作用。低浓度的蛋白质，共沉淀作用小，但回收率降低。较适中的蛋白质浓度是2.5％～3.0％，相当于25 mg/mL～30mg/mL。

 2) pH值对盐析的影响：在等电点处溶解度小，pH值常选在该蛋白质的等电点附近。

 3) 温度的影响：对于蛋白质、酶和多肽等生物大分子，在高离子强度溶液中，温度升高，它们的溶解度反而减小。在低离子强度溶液或纯水中蛋白质的溶解度大多数还是随浓度升高而增加的。一般情况下，可在室温下进行。但对于某些对温度敏感的酶，要求在0℃～4℃下操作，以避免活力丧失

盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。硫酸铵不是重金属盐，不会使得蛋白质变质蛋白质的盐析。硫酸铵浓溶液可降低蛋白质的溶解。

盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。硫酸铵不是重金属盐，不会使得蛋白质变质蛋白质的盐析。

硫酸铵浓溶液可降低蛋白质的溶解度使蛋白质脱水凝聚而盐析。这个过程是物理变化，不是化学变化，蛋白质分子没有改变。

向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。

向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐，可以使蛋白质性质发生改变而凝聚，进而从溶液中析出，这种作用叫作变性，性质改变，是化学反应，无法复原。

把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物（胶体）。

盐析结晶是指在盐溶液体系中，加入某种电解质盐析剂,这种加入的盐析剂，其离子的水合作用比原溶液中其它盐较强。

它使溶液中自由水分子数减小,从而提高溶液中欲结晶物质在溶液中的有效浓度，使欲结晶物质在溶液中结晶析出，这就是盐析结晶。

盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。比如在蛋白溶液中加入高浓度的硫酸铵使蛋白质溶解度降低而析出的过程。

很多中性盐都可以使蛋白质发生盐析，比如硫酸铵，氯化钠等等。

如果加蛋白质溶液加到硫酸铵溶液中,那么先加入的蛋白溶液必定会因为过高的盐浓度发生变性.

所以必须是要向蛋白质溶液中缓缓添加硫酸铵溶液,温和搅拌.逐滴加入硫酸铵.

因为血清蛋白存在溶液中，或多或少析出都会携带一部分的水分，不可能是单纯的血清蛋白，所以是溶液。盐析一般是指溶液中加入无机盐类而使某种物质溶解度降低而析出的过程。如：加浓（NH4）2SO4使蛋白质凝聚的过程；在乙酸生成乙酸乙酯的酯化反应中加入饱和碳酸钠溶液，降低乙酸乙酯溶解度，使其分层现象更明显的过程。向某些蛋白质溶液中加入某些无机盐溶液后，可以降低蛋白质的溶解度，使蛋白质凝聚而从溶液中析出,这种作用叫作盐析，是物理变化，可复原。向某些蛋白质溶液中加入某些重金属盐，可以使蛋白质性质发生改变而凝聚，进而从溶液中析出，这种作用叫作变性，性质改变，是化学反应，无法复原。把动物脂肪或植物油与氢氧化钠按一定比例放在皂化锅内搅拌加热，反应后形成的高级脂肪酸钠、甘油、水形成混合物（胶体）。往锅内加入食盐颗粒，搅拌、静置，使高级脂肪酸钠与甘油、水分离，浮在液面。（该反应用以制肥皂）简单的说就是利用高浓度中性盐使蛋白质发生沉淀；蛋白质的溶解度（S）不同，用于沉淀的盐浓度不同。盐析结晶原理：盐析结晶是指在盐溶液体系中，加入某种电解质盐析剂, 这种加入的盐析剂，其离子的水合作用比原溶液中其它盐较强， 它使溶液中自由水分子数减小, 从而提高溶液中欲结晶物质在溶液中的有效浓度，使欲结晶物质在溶液中结晶析出， 这就是盐析结晶。

高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子,从而破坏蛋白质表面的水化膜,降低其溶解度,使之从溶液中沉淀出来.各种蛋白质的溶解度不同,因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质.这种方法称之为盐析.盐浓度通常用饱和度来表示.硫酸铵因其溶解度大,温度系数小和不易使蛋白质变性而应用最广.