dna提取实验中70%乙醇的作用

在DNA提取时，用无水乙醇沉淀DNA，这是实验中最常用的沉淀DNA的方法。乙醇的优点是可以任意比和水相混溶，乙醇与核酸不会起任何化学反应，对DNA很安全，因此是理想的沉淀剂。

DNA溶液是DNA以水合状态稳定存在，当加入乙醇时，乙醇会夺去DNA周围的水分子，使DNA失水而易于聚合。一般实验中，是加2倍体积的无水乙醇与DNA相混合，其乙醇的最终含量占67％左右。因而也可改用95％乙醇来替代无水乙醇(因为无水乙醇的价格远远比95%乙醇昂贵)。但是加95％的乙醇使总体积增大，而DNA在溶液中有一定程度的溶解，因而DNA损失也增大，尤其用多次乙醇沉淀时，就会影响收得率。折中的做法是初次沉淀DNA时可用95％乙醇代替无水乙醇，最后的沉淀步骤要使用无水乙醇。也可以用o．6倍体积的异丙醇选择性沉淀DNA。一般在室温下放置15-30分钟即可。

溶解的原理是被溶解溶质的分子分散到溶解该物质的溶液分子间隙的过程，这个原理同样适用于DNA溶于水的过程，即DNA分子同水分子相互结合。乙醇分子和水的结合力大于DNA与水的结合力，故乙醇分子会抢占原来已经溶于水的DNA分子的位置，DNA分子因此被析出。为保证所形成的乙醇溶液的浓度，要加两倍以上体积的乙醇，这样能形成60%以上浓度的乙醇溶液，不一定是两倍，但是一定要高于这个值，否则DNA不容易析出。DNA提取的下一步加70%洗涤也是这个原理，其实量多量少不重要，关键是达到一定的条件。

在DNA的粗提取与鉴定中，酒精必须用预冷的95%的酒精，其作用是：

1.抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；

2.降低分子运动，易形成沉淀；

3.低温有利于增加DNA柔韧性，减少断裂。

因为DNA和杂质（主要是Pr）的耐受性不同，加入酒精后，DNA会析出。而且要是等体积、冷却的酒精溶液。作用：1.抑制核酸水解

2.降低分子运动，易于形成沉淀

3.增强DNA分子柔韧性，防止DNA断裂。

提核酸要在低温下进行，尽量减少DNA的降解。用冷酒精，是要保持温度4度左右，因为这个温度下，在酒精的盐溶液里，DNA-组蛋白复合体的溶解度最小，可以相对较纯净的提取DNA。另外，95%的酒精冻乙醇的作用还有沉淀DNA。

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95%的乙醇是用来溶解其他的杂质,因为DNA不溶于酒精,所以过滤后就只把DNA滤掉,一部分能溶于酒精的杂质就留在酒精里了.

核酸酶在体外适宜的条件也可以降解DNA,因此提核酸要在低温下进行,尽量减少DNA的降解.

用TPS法提取DNA时加入TPS，异丙醇及乙醇各有何作用

高中：

原理：

1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。

2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。

3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。

方法步骤：

1．提取细胞核物质：顺时针方向搅拌，稍快，稍重。 5 min

2．溶解DNA：

3．析出含DNA的黏稠物：蒸馏水300mL，逆时针方向搅拌，缓慢

4．过滤：取黏稠物

5．再溶解：顺时针方向搅拌，较慢。3 min

6．过滤：取滤液。

7．提取出含杂质较少的DNA，逆时针方向搅拌，稍慢。5 min

8．DNA的鉴定：沸水浴5min

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DNA提取分为三个基本步骤，每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。

利用研磨或者超声破碎细胞，并通过加入去污剂以除掉膜脂。

加入蛋白酶，醋酸盐沉淀，或者酚/氯仿抽提，以除掉细胞内的蛋白，如与DNA结合的组蛋白。

将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀，因为DNA在醇中不可溶而黏在一起，这一步也能除掉盐分。

另外，目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。

因为无论用哪种方法提取,沉淀DNA时总会加入高浓度的盐,加盐的目的是破坏能使蛋白质保持稳定的两个因素,使蛋白和DNA分离并沉淀下来.而此时盐的阳离子会与DNA结合形成DNA-阳离子盐溶于溶液中,再用无水乙醇可以将DNA-阳离子盐沉淀下来,但这样一来,DNA中就含有较多的盐离子,这势必会影响下一步实验的进行,所以要用70%乙醇洗涤DNA沉淀(因为在70%乙醇里DNA是不溶的,而盐离子却可溶),用无水乙醇则达不到这个目的!OK?

95%的乙醇是用来溶解其他的杂质，因为DNA不溶于酒精，所以过滤后就只把DNA滤掉，一部分能溶于酒精的杂质就留在酒精里了。

核酸酶在体外适宜的条件也可以降解DNA，因此提核酸要在低温下进行，尽量减少DNA的降解。