复红与品红一样吗

甲苯胺蓝染色液染色方法

甲苯胺蓝 是常用的人工合成染料的一种属于醌亚胺染料类，是碱性染料， 甲苯胺蓝 中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色，可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测。不推荐用于软骨、胃粘膜等难染组织的染色。

肥大细胞的染色:

（1）组织脱蜡至水。

（2）蒸馏水浸洗2-3次。

（3） 甲苯胺蓝染液 染20-30min。

（4）稍水洗，洗去多余染色液。

（5）95%酒精分色，在镜下控制分色效果。

（6) 用100%酒精脱水。

（7） 二甲苯 透明， 中性树胶 封片。

肥大细胞染色结果：肥大细胞颗粒呈红紫色，胞核呈蓝色。

细胞涂片染色 ：

（1）细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。

（2）滴加1～2滴稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。

（3）后将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。

（4）无需干燥，直接镜检。

细胞涂片染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。

原位杂交染色 ：

（1）用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:10。

（2） 玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。

（3） 在蒸馏水或去离子水浸泡数次。

（4） 按需求进行压片固定。

神经元细胞的染色：

（1）将载有细胞的玻片取出放入4％多聚甲醛中固定1h左右；

（2）到时间后取出用PBS冲洗1～2次即可；

（3）然后加入提前预热的1％甲苯胺蓝溶液，在50度左右的气浴或水浴中染色20～30min；

（4）用梯度酒精已次脱水，分别为75％、90％、100％，也可自定梯度；

（5）在镜下控制分色效果，这一步不太好掌握；

神经元细胞染色结果：可见尼氏小体深蓝色颗粒，细胞核呈淡蓝色，背景基本无色。

北京索莱宝科技有限公司 自产产品 1%甲苯胺蓝染色液 ，货号为 G1220 ，主要用于生化实验中肥大细胞的检测。

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抗酸染色:分支杆菌属,诺卡放线菌属。石炭酸复红染色,金永染色。

芽孢染色:用于区分细菌的芽孢和营养细胞。结果芽孢染成绿色,营养细胞为红色。

晶体染色:观察苏云金杆菌不同变种的晶体形状大小。结果晶体染成紫色,芽孢为透明椭圆形,仅见具有轮廓的折光体。

鞭毛染色:有赖夫生染色法、银盐染色法,西萨-基尔染色法等。一般以西萨-基尔(Cesares-Gill)染法效果最佳。

异染颗粒染色:用于白喉棒状杆菌染色,直接涂片或改良阿伯特法染色。

墨汁荚膜染色:观察菌体有无荚膜,如新型隐球菌。碳素墨汁。

镀银染色:螺旋体

吉姆萨染色:螺旋体

荧光染色

魏申染色(wayson)染色:鼠疫耶尔森杆菌。

铬酸P、A、S真菌类染色。结果:曲霉菌、念球菌属、细胞浆菌属、隐球菌属为红紫色。曲霉菌丝周边紫红色,弹力纤维紫色,背景绿色。

Mann氏甲基蓝伊红染色法:病毒包涵体染色。Negri氏小体红色。

Nacchiavello氏染色:病毒包涵体染色。结果:包涵体、立克次氏体均染红色,其余组织呈蓝色。

Crocott-Gomori氏六胺银法:新型隐球菌

碘染色法吉姆萨染色:衣原体

乳酸酚棉蓝染色,糖原染色:真菌,前者适用于所有真菌,呈蓝色。

吉姆萨染色,瑞氏染色:鞭毛虫,滴虫,锥虫,疟原虫,弓形虫,隐孢子虫等原虫。

三色染色,碘染色:阿米巴等原虫。

荧光素吖啶橙染色:疟原虫。

金胺-酚染色:隐孢子虫。

甲苯胺蓝,四胺银染色:耶氏肺孢子虫。

性 状： 带有金属光泽的绿色结晶。易溶于水，溶液呈蓝绿色；溶于甲醇、乙醇和戊醇。

孔雀石绿是一种带有金属光泽的绿色结晶体，又名碱性绿、严基块绿、孔雀绿，其既是杀真菌剂，又是染料，易溶于水，溶液呈蓝绿色；溶于甲醇、乙醇和戊醇。长期以来，渔民都用它来预防鱼的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等，而且为了使鳞受损的鱼延长生命，在运输过程中和存放池内，也常使用孔雀石绿。科研结果表明，孔雀石绿在鱼内残留时间太长，且其具有高毒素、高残留和致癌、致畸、致突变等副作用，鉴于此，许多国家均将孔雀石绿列为水产养殖禁用药物。

常用染料性能简介

（一）天然染料

1

、苏木精

苏木精是从南美的苏木（热带豆科植物）干枝中用乙醚浸制出来的一种色素，是最常用的染料

之一。苏木精不能直接染色，必须暴露在通气的地方，使他变成氧化苏木精（又叫苏木素）后才能使用，

这叫做“成熟”

。苏木精的“成熟”过程需时较长，配置后时间愈久，染色力愈强。被染材料必须经金属盐

作媒剂作用后才有着色力。所以在配制苏木精染剂时都要用媒染剂。常用的媒染剂有硫酸铝按、钾明矾和

铁明矾等。

苏木精是淡黄色到锈紫色的结晶体，易溶于酒精，微溶于水和甘油，是染细胞核的优良材料，他能把细胞

中不同的结构分化出各种不同的颜色。分化时组织所染的颜色因处理的情况而异，用酸性溶液（如盐酸—

酒精）分化后呈红色，水洗后仍恢复青蓝色，用碱性溶液（如氨水）分化后呈蓝色，水洗后呈蓝黑色。

2

、洋红

洋红又叫胭脂红或卡红。一种热带产的雌性胭脂虫干燥后，磨成粉末，提取出虫红，再用明矾处

理，除去其中杂质，就制成洋红。单纯的洋红不能染色，要经酸性或碱性溶液溶解后才能染色。常用的酸

性溶液有冰醋酸或苦味酸，碱性溶液有氨水、硼砂等。

洋红使细胞核的优良染料，染色的标本不易褪色。用作切片或组织块染都适宜，尤其适宜于小型材料的整

体染色。用洋红配成的溶液染色后能保持几年。洋红溶液出现浑浊时要过滤后再用。

（二）人工染料

人工染料，即苯胺染料或煤焦油染料，种类很多，应用极广。它的缺点是经日光照射容易褪色，苯胺蓝、

亮绿、甲基绿等更易褪色。在制片中注意掌握酸碱度，并避免日光直射，也能经几年不褪色。

1

、酸性品红

酸性品红是酸性染料，呈红色粉末状，能容于水，略溶于酒精（

0.3%

）

。他是良好的细胞制染

色剂，在动物制片上应用很广，在植物制片上用来染皮层、髓部等薄壁细胞和纤维素壁。他跟甲基绿同染，

能显示线粒体。

组织切片在染色前先浸在带酸性的水中，可增强它的染色力。酸性品红容易跟碱起作用，所以染色过度，

易在自来水中褪色。

2

、刚果红

刚果红是酸性染料，呈枣红色粉末状，能溶于水喝酒精，遇酸呈蓝色。他能作染料，也用作指

示剂。他在植物制片中常作为苏木精或其他细胞染料的衬垫剂。他用来染细胞质时，能把胶制或纤维素染

成红色。在动物组织制片中用来染神经轴、弹性纤维、胚胎材料等。刚果红可以跟苏木静作二重染色，也

可用作类淀粉染色，由于他能溶于水和酒精，所以洗涤和脱水处理要迅速。

3

、甲基蓝

甲基蓝是弱酸性染料，能溶于水和酒精。甲基蓝在动植物的制片技术方面应用极广。他跟伊红

合用能染神经细胞，也是细菌制片中不可缺少的染料。它的水溶液是原生动物的活体染色剂。甲基蓝极易

氧化，因此用他染色后不能长久保存。

4

、固绿

固绿是酸性染料，能溶于水（溶解度为

4%

）和酒精（溶解度为

9%

）

。固绿是一种染含有浆质的

纤维素细胞组织的染色剂，在染细胞和植物组织上应用极广。他和苏木精、番红并列为植物组织学上三中

最常用的染料。

5

、苏丹Ⅲ

苏丹Ⅲ是弱酸性染料，呈红色粉末状，易溶于脂肪和酒精（溶解度为

0.15%

）

。苏丹Ⅲ是脂肪染

色剂。

6

、

伊红

这类染料种类很多。

常用的伊红

Y

，

是酸性染料，

呈红色带蓝的小结晶或棕色粉末状，

溶于水

（

15

摄氏度是溶解度达

44%

）和酒精（溶于无水酒精的溶解度为

2%

）

。伊红在动物制片中广泛应用，是很好的

细胞质染料，常用作苏木精的衬染剂。

7

、碱性品（复）红

碱性品红是碱性染料，呈暗红色粉末或结晶状，能溶于水（溶解度

1%

）和酒精（溶解

度

8%

）

。碱性品红在生物学制片中用途很广，可用来染色胶原纤维、弹性纤维、嗜复红性颗粒和中枢神经

组织的核质。在生物学制片中用来染维管束植物的木质化壁，又作为原球藻、轮藻的整体染色。在细菌学

制片中，长用来鉴别结核杆菌。在

尔根氏反应中用作组织化学试剂，已核查脱氧核糖核酸。

8

、结晶紫

结晶紫是碱性染料，能溶于水（溶解度

9%

）和酒精（溶解度

8.75%

）

。结晶紫在细胞学、组织

学和细菌学等方面应用极广，是一种优良的染色剂。他是细胞核染色常用的，用来显示染色体的中心体，

并可染淀粉、纤维蛋白、神经胶质等。凡是用番红和苏木精或其他染料染细胞核不能成功时，用它能得到

良好的结果。用番红和结晶紫作染色体的二重染色，染色体染成红色，纺锤丝染成紫色，所以也是一种显

示细胞分裂的优良染色剂。用结晶紫染纤毛，效果也很好。用结晶紫染色的切片，缺点是不易长久保存。

9

、龙胆紫

龙胆紫是混合的碱性染料，主要是结晶紫和甲基紫的混合物。在必要是，龙胆紫能跟结晶紫互

相替用。医药上用的紫药水，主要成分是甲基紫，需要时能代替龙胆紫和结晶紫。

10

、中性红

中性红是弱碱性染料，呈红色粉末状，能溶于水（溶解度

4%

）和酒精（溶解度

1.8%

）

。它的

碱性溶液中呈现黄色，在强碱性溶液中呈蓝色，而在弱酸性溶液中呈红色，所以能用作指示剂。中性红无

毒，

常做活体染色的染料，

用来染原生动物和显示动植物组织中活细胞的内含物等。

陈久的中性红水溶液，

用作显示尼尔体的常用染料。

11

、番红

番红是碱性染料，能溶于水和酒精。番红是细胞学和动植物组织学生常用的染料，能染细胞核、

染色体和植物蛋白质，示维管束植物木质化、木栓化和角质化的组织，还能染孢子囊。

12

、亚甲蓝或美蓝

亚甲蓝或美蓝是碱性染料，呈蓝色粉末状，能溶于水（溶解度

9.5%

）和酒精（溶解度

6%

）

。亚甲蓝是动物学和细胞学染色上十分重要的细胞核染料，其优点是染色不会过深。

13

、甲基绿

甲基绿是碱性染料。它是绿色粉末状，能溶于水（溶解度

8%

）和酒精（溶解度

3%

）

。甲基绿

是最有价值的细胞和染色剂，细胞学上常用来染染色质，跟酸性品红一起可作植物木质部的染色。

4

、检查脂肪的试剂

苏丹Ⅲ（Ⅳ）酒精饱和溶液

取

0.2

克苏丹Ⅲ（或苏丹Ⅳ）

，放入纯酒精中，加热，使它充分溶解，成为饱和酒精溶液，过滤后密闭在试

剂瓶内保存备用。

5

、酸碱指示剂

配方一

酚酞试剂和试纸

酚酞试剂

取

1

克酚酞，溶解在

100

毫升

60%

的酒精溶液里，装在试剂瓶内密闭保存。

酚态试纸

取

1

克酚酞，溶解在

100

毫升

95%

酒精溶液里，加入

00

毫升蒸馏水。把绿纸条放入酚酞溶液中

浸湿后，取出，放在无氨气影响处晾干。

酚泰试剂（试纸）

pH

值变色范围

8.2

～

10

，在酸性和中性溶液中都无色，再碱性溶液中呈深红色。

配方二

红蓝石蕊试纸

取市售石蕊

1

克，放在

80

毫升

10%

酒精溶液中搅拌，使它溶解，然后过滤。把滤液分成两份。

1

份滴入稀

磷酸或稀硫酸，到出现红色为止。另

1

份滴入稀氢氧化钠溶液，到出现蓝色为止。在上述制备的溶液中分

别浸湿滤纸条，随后取出滤纸条，放在蔽光处、无酸碱性气体影响的地方晾干，即的红、蓝两种石蕊试纸。

红石蕊试纸在碱性溶液中变蓝，蓝石蕊试纸在酸性溶液中变红。

6

、检查二氧化碳的试剂

检查二氧化碳的试剂，可用溴代麝香草酚蓝溶液和石灰水。

配方一

溴代麝香草酚蓝溶液

取

0.1

克溴代麝香草酚蓝，溶解在

100

毫升蒸馏水里，滴入少量

0.1%

氢氧化钾溶液，使它成为弱碱性溶液

而呈蓝色。

溴代麝香草酚蓝溶液

pH

值变色范围是

6.0

（黄）～

7.6

（蓝）

。待测物中如果有二氧化碳，会形成碳酸而使

溶液变成黄色。

配方二

石灰水

在蒸馏水中加入生石灰（氧化钙）

，变加边搅拌，直到加入的生石灰不再溶解，呈饱和状态时为止。在石灰

水澄清后，倾出上层清液，用滤纸过滤，放在密闭瓶内保存。

如果测定的物质中有二氧化碳，会生成碳酸钙，使石灰水变浑浊。

7

、检查细胞生活力的试剂

检查细胞有无生活力，

可用中性红甲基蓝试剂。

配制的方法是先分别配制

1%

中性红溶液和

1%

甲基蓝溶液，

这两种溶液各取

1

份混合，用来鉴定细胞的死活。该试剂使活细胞的液泡染上红色，而使死细胞全部染成

蓝色。

（二）分离液

1

、肌细胞分离液

配方一

马克凯郎（

Maccallum

）液

取

1

份浓硝酸、

2

份甘油、

3

份水，混合后就得到马克凯郎液。

把新鲜的肌肉组织小块（横纹肌、心肌和平滑肌）投入这种溶液里浸渍，分离时间需

1

～

3

日。这种溶液尤

其适于分离横纹肌核心肌细胞。

配方二

氢氧化钾溶液

取

35

克氢氧化钾，放在

100

毫升蒸馏水中，加热，使它完全溶解后，在室温下冷却。

把新鲜的肌肉组织块投入氢氧化钾溶液中，浸泡

15

～

30

分钟后，肌细胞便可分离。

2

、上皮细胞分离液

配方一

福尔马林—氯化钾溶液

称取

58.44

克氯化钠，用蒸馏水溶解，再稀释到

1000

毫升，加入

2

毫升福尔马林。

这种溶液是很好的上皮细胞分离液，分离很迅速，而且能保护纤细的上皮细胞纤毛。小肠和气管的上皮组

织小块，放在此溶液里

2

小时即可分离，口腔和皮肤上皮组织小块的细胞分离一般需

3

日左右。

配方二

水和氯醛溶液

称取

5

克水和氯醛，用蒸馏水溶解，再稀释到

100

毫升，就得到

5%

水合氯醛溶液。

从洗净的动物胃、肠和口腔内壁上取下上皮组织一小块，投入以上溶液中，浸泡

24

～

48

小时。

3

、神经细胞分离液

配方一

可以用上皮细胞分离液配方一福尔马林—氯化钠溶液来分离神经细胞（见

2

）

。

配方二

硼酸生理盐水溶液

在生理盐水溶液内加入一些硼酸，搅拌到不再溶解时为止，使成为饱和溶液。

把脊椎灰质和脑皮质部位的神经组织一小块投入这种溶液中分离。

4

、植物茎细胞分离液

杰弗里氏（

Jeffrey

’

s

）液

取等量的

10%

铬酸溶液和

10%

硝酸溶液混合，成铬酸—硝酸溶液。

这种溶液用来分离木本植物茎部的导管、管胞、筛管、伴胞和韧皮纤维等。把材料切成小块放在水里，加

热煮沸，冷却后再加热煮沸。这样重复几次，到材料全部沉于水底后，投入分离液内，分离时间是

24

～

48

小时。

5

、植物根尖细胞分离液

配方一

盐酸—酒精溶液

在

1

份

95%

酒精中慢慢的加入

1

份浓盐酸，即成盐酸—酒精溶液，装瓶密闭保存。

把植物根尖部位截下一小段，投入以上溶液中分离。

配方二

4%

盐酸溶液

配制

4%

盐酸溶液。

截下植物根尖部位，

投入盛有

4%

盐酸溶液的小烧杯内，

在

60

摄氏度温水中隔水温热

1

～

2

分钟，

使根尖软

而不酥，这时分离效果最好。

6

、植物纤维分离液

取

10

克氢氧化钠（或氢氧化钾）

，溶解在

90

毫升水里，制成

10%

氢氧化钠（或氢氧化钾）溶液，放在瓶里

密闭保存。

把植物茎纵切成细条，剪成小段后，投入分离液内。

7

、植物细胞质壁分离液

配方一

30%

蔗糖溶液

取

30

克蔗糖，溶解在

70

毫升蒸馏水里，装瓶备用。

取固绿

0.1

克，溶于

100

毫升

95%

酒精中，即成

0.1%

固绿—酒精溶液。

该液能染色纤维素细胞壁，还用于动植物中作浆质染色剂。

配方二

纤维素细胞壁染液（Ⅱ）

氯化锌

20

克

碘化钾

6.5

克

碘

1.5

克

蒸馏水加至

100

毫升

先把氯化锌溶于少量蒸馏水中，再加入

6.5

克碘化钾，在碘完全溶解后，用蒸馏水稀释到

100

毫升，即成

碘—氯化锌溶液。

该染液能把细胞壁染成紫色，胞质染成淡黄色，胞核染成棕色。

配方一

纤维素细胞壁染液（Ⅲ）

甲液

取

1

克碘和

1.5

克碘化钾，溶于

100

毫升蒸馏水中，即成

1%

碘液。

乙液

取

7

份硫酸和

3

份蒸馏水相混，即成

66.5%

硫酸溶液。

染色时，在材料上滴加甲液，再加一滴乙液，纤维素细胞壁就染成黄色。

配方四

木质化细胞壁染液（Ⅰ）

硫酸化苯胺（或盐酸话本安）

1

份

蒸馏水

70

份

95%

酒精

30

份

硫酸

30

份

将上述各组分相混，将细胞材料放入混合液里染色，可是木质化细胞壁呈鲜黄或姜黄色。

配方五

木质化细胞壁染液（Ⅱ）

取间苯三酚

4

～

5

克，溶于

100

毫升

95%

酒精中，即成间苯三酚—酒精液。

先在材料上滴上

1

滴浓盐酸，然后滴上间苯三酚—酒精液

1

滴，木质化的细胞壁就染上樱红或紫红色。

配方六

木质化细胞壁染液（Ⅲ）

取

1

克番红，溶于

99

毫升蒸馏水中，即成

1%

番红溶液。

4

、细胞质染色剂

配方一

伊红染液

伊红染液一般配用水溶液和酒精溶液两种。

（

1

）取

1

克伊红，溶于

99

毫升蒸馏水中，即成

1%

伊红水溶液（市售红墨水内含伊红成分，可以用红墨水

稀释液来代替本溶液）

。

（

2

）取

1

克伊红，溶于

99

毫升

70%

酒精中，即成

1%

伊红—酒精溶液。

配方二

甲基蓝染液

取

1

克甲基蓝，溶于

29

毫升

70%

酒精中，加入

70

毫升蒸馏水，即成

1%

甲基蓝染液。

配方三

亮绿染液

取

0.5

克亮绿，溶解在

100

毫升蒸馏水中，即成

0.5%

亮绿溶液。

5

、细胞核染色剂

配方一

甲基绿染液

取

1

克甲基绿，溶于

99

毫升蒸馏水中，加入

1

毫升冰醋酸。本染液能染细胞核，还用来染木质化细胞壁。

配方二

龙胆紫染液

取

1

克龙胆紫，溶于少量

2%

醋酸溶液中，加

2%

醋酸溶液，直到溶液不呈深紫色止。

配方三

美蓝（亚甲基蓝）染液

取

0.5

克美蓝，溶于

30

毫升

95%

酒精中，加

100

毫升

0.01%

氢氧化钾溶液，保存在棕色瓶内

。

此溶液能染细胞核，还用来染细菌、血和神经组织等。

配方四

硼砂—洋红染液

取

4

克硼砂，溶于

96

毫升蒸馏水中。再加入

2

克洋红，加热溶解后煮沸

30

分钟，静置

3

日，用

100

毫升

70%

酒精冲淡，放置

24

小时后过滤。

此染液能染细胞核，还用来染糊粉粒和一般动物、植物的整体染色，如水螅、血吸虫等整体标本。

配方五

德氏（

Delafield

’

s

）苏木精染液

甲液

取

1

苏木精，溶于

6

毫升无水酒精中，即成苏木精—酒精溶液。

乙液

取

10

克铵矾溶于

90

毫升蒸馏水中，即成

10%

铵矾水溶液。

取甲液逐滴加入到乙液中，用纸遮盖，放在阳光明亮处，使它充分氧化。

3

～

4

天后将溶液过滤，在滤液中

加入

25

毫升甘油和

25

毫升甲醇，保存在密闭玻璃瓶内。静置

1

～

2

个月，待该液颜色变深时过滤，可长久

保存。

本染液是染色体的优良染色剂，除能染细胞核外，还用来染纤维素、细胞壁和动植物组织。

配方六

席夫（

Schiff

’

s

）试剂

称取

0.5

克碱性品红，加到

100

毫升煮沸的蒸馏水中，再微微加热

5

分钟，不断搅拌，使它溶解。在溶液

冷却到

50

摄氏度时过滤，

滤液中加入

10

毫升

1N

盐酸。

再冷却到

25

摄氏度时加入

0.5

克偏重亚硫酸钠

（

）

或无水亚硫酸氢钠（

）

。把溶液装入棕色试剂瓶内，摇荡后，塞紧瓶塞，放在黑暗中

24

小时。在溶液颜色

退到淡黄色时，加入

0.5

克活性炭，用力摇荡

1

分钟，过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内，塞紧瓶塞，滤液

应该是无色的。

在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光

（瓶外用黑纸或暗盒遮光）

。

如溶液变成红色，

即失去染色能力。

碱性品红是较强的核染色剂，在孚尔根氏（

Feulgen

’

s

）反应中作为组织化学试剂，以检查

DNA

。

6

、染色体染色剂

配方一

醋酸—洋红染液

取

45

毫升冰醋酸，加蒸馏水

55

毫升，煮沸后徐徐加入洋红

1

克，搅拌均匀后加入

1

颗铁锈钉，煮沸

10

分

钟，冷却后过滤，贮存在棕色瓶内。

配方二

醋酸—地衣红染液

取

45

毫升醋酸，跟

55

毫升蒸馏水相混，加热，徐徐加入地衣红粉末

1

～

2

克，搅拌溶解后，缓缓煮沸

2

小

时。冷却后过滤，贮存在棕色瓶里。

配方三

龙胆紫染液

取

1

克龙胆紫，用少量蒸馏水溶解后，加蒸馏水，稀释到

100

毫升，保存在棕色瓶内。

配方四

甲苯胺蓝染液

取

0.5

克甲苯胺蓝，溶解在

100

毫升蒸馏水中，即成

0.5%

甲苯胺蓝水溶液。

50%

酒精

85

毫升

福尔马林

10

毫升

冰醋酸

5

毫升

这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织，昆虫和甲壳类动物。液组织在这溶液里固定

12

小时，木质化

组织要固定

1

周，材料也可在此液中长期保存。固定后的材料放在

50%

酒精中冲洗

1

～

2

次。

10

、克来宁堡氏（

Kleinenberg

’

s

）液

配方

在

20%

硫酸水溶液内加入苦味酸，直到饱和。

这种固定液适用于鸡胚的固定，也用于许多小型海洋生物的固定。

11

、包因氏（

Bouin

’

s

）液

配方

苦味酸饱和水溶液

75

毫升

冰醋酸

5

毫升

福尔马林

25

毫升

这是常用的良好固定剂，渗透迅速，固定均匀，组织收缩少，染色后能显示一般的微细结构。一般动物组

织、无脊椎动物的卵和幼虫以及一般组织学、胚胎学的材料，如植物组织的根尖和胚囊都可用它来固定。

一般组织固定

24

～

48

小时，小块组织固定

4

～

16

小时，动物材料能在这种固定液中长期保存。固定后，动

物材料用

70%

酒精冲洗净苦味酸，到无黄色为止（用酒精冲洗时，加几滴氨水，可加快除去黄色）

；植物材

料用

20%

酒精冲洗几次。

12

、绍丁氏（

Schaudinn

’

s

）液

配方

甲液

升汞饱和水溶液

66

毫升

95%

酒精

33

毫升

乙液

冰醋酸

1

毫升

甲、乙液要在临用前混合。

这种固定液适用于固定有鞭毛的原生动物、植物的精子和游动孢子等。

材料如制作涂布装片，

可在

40

摄氏

度下固定

10

～

20

分钟。

13

、眼球固定液

配方

丙酮

40

毫升

冰醋酸

1.5

毫升

升汞

2

克

甲醛

10

毫升

蒸馏水

40

毫升

这种固定液适用于眼球的固定，并可在固定液中长期保存。

14

、纳瓦兴氏（

Nawaschin

’

s

）液

配方

甲液

铬酸

1.5

克

冰醋酸

10

毫升

蒸馏水

90

毫升

乙液

福尔马林

40

毫升

蒸馏水

60

毫升

临用前将等量甲、乙液混合。

高等植物有丝分裂材料适宜在这种固定液里固定或长期保存。

15

、绿色标本保存液

配方一

硫酸铜

5

克

水

95

毫升

这种保存液适用于绿色植物和一切植物绿色部分的保存。植物放入硫酸铜液后，由绿变黄，再由黄变绿。

这时取出材料，用清水漂洗干净，浸在

5%

福尔马林液内长期保存。

配方二

硫酸铜

0.2

克

95%

酒精

50

毫升

福尔马林

10

毫升

冰醋酸

5

毫升

水

35

毫升

先把硫酸铜溶于水中，然后加入配方中的其他组分。绿色标本能长期的贮存在该液中。

配方三

醋酸铜

15

～

30

克

50%

醋酸

100

毫升

在

50%

醋酸中逐渐加入醋酸铜，直到饱和。适用时取原液

1

份，加水

4

份，即成稀释的硫酸铜溶液。

这种保存液适用于表面有蜡质、蛙质、质地较硬的绿色植物保色。加热稀释到醋酸铜溶液，放入植物，轻

轻翻动，到植物由绿转黄再转绿色时取出植物，用清水漂洗后，浸入

5%

福尔马林液内保存。

16

、红色标本保存液

配方一

甲液

硼酸

3

克

福尔马林

4

毫升

水

400

毫升

乙液

亚硫酸

2

毫升

硼酸

10

克

水

488

毫升

把红色的果实浸在甲液里

1

～

3

天，

等果实由红色转深棕色时取出，

移到乙液里保存，同时在果实内注入少

量乙液。

配方二

氯化锌

2

份

福尔马林

1

份

甘油

1

份

水

40

份

先把氯化锌溶解在水里，然后加入配方中其他组分。溶液如果浑浊而有沉淀，应过滤后使用。红色果实能

在此液中保存。

2

、阿拉伯树胶

用阿拉伯树胶作为封藏剂的优点是便于在这种封藏剂中整理标本形态。

阿拉伯树胶作为封藏剂有多种配方，

下述配方适于小型昆虫的整体状片。

配方

阿拉伯树胶

8

克

水合氯醛

20

～

40

克

甘油

5

毫升

冰醋酸

3

毫升（可略）

蒸馏水

10

毫升

配置方法

先把纯净的阿拉伯树胶放在蒸馏水里，加热，待胶溶化后，加入水合氯醛，边加边搅拌，使它充

分溶解后加入甘油和冰醋酸，搅拌均匀后，贮存在瓶里，密闭保存。贮存时要避免灰尘或湿气浸入。

3

、乳酸—石炭酸

这种封藏剂用于整体装片，尤其适用于封藏藻类、菌类、苔藓的原叶体或其他较小材料。

配方

石炭酸

1

份

乳酸

1

份

甘油

1

～

2

份

蒸馏水

1

份

（十一）消毒剂

1

、酒精

70%

的酒精杀菌力最强，它能使蛋白质脱水和变性，在

3

～

5

分钟内杀死细菌。因此，它用于消毒和防腐，

适用于皮肤和器械、塑料制品等的消毒。高浓度的酒精（

95

～

100%

）能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保

护层，使酒精分子不易透入，因此杀菌能力反而弱。

2

、碘酒

碘酒是碘和碘化钾的酒精溶液，

2%

的碘酒在

10

分钟内能杀死细菌和芽

孢，可用于皮肤的消毒。药房出售的一般是

2%

的稀碘酒。实验室内也可自配碘酒，配方为：

碘化钾

25.

克

碘

3.5

克

95%

酒精

95%

酒精

蒸馏水

27

毫升

先取碘化钾溶在

2

毫升蒸馏水中，再加入碘，搅拌后加入酒精，到碘充分溶解后，补足蒸馏水，即成碘酒。

3

、高锰酸钾

高锰酸钾是强氧化剂，有很强的杀菌作用。

0.1%

水溶液用作皮肤消毒，

2

～

5%

水溶液能在

24

小时内杀死细

菌芽孢。这溶液在空气中溶液分解，失去氧化能力，要现用现配。

4

、苯酚（石炭酸）

石炭酸是有效的常用杀菌剂，

1%

水溶液能杀死大多数的菌体，

通常用

3

～

5%

水溶液作接种室喷雾消毒或器

皿的消毒，

5%

以上溶液对皮肤有刺激性。在生物制品中，加入

0.5%

石炭酸可作防腐剂。

5

、来苏尔

来苏尔即煤酚皂溶液。它的杀菌效力比石炭酸大

4

倍，通常以

1

～

2%

溶液用于手的消毒（浸泡

2

分钟）和

无菌室内喷雾消毒，

5%

溶液多用于各种器械和器皿的消毒。

6

、新洁尔灭

新洁尔灭是常用的消毒剂，主要用于皮肤、医疗器械、器皿、接种室空气等的消毒灭菌，对许多非芽孢型

病原菌、革兰氏阳性菌和阴性菌经几分钟接触即灭菌，尤其对格兰氏阳性菌杀菌力更大。本品原液的浓度

是

5%

，通常用

0.1

～

0.25%

水溶液。用新洁尔灭消毒金属器械时，要在

1

升溶液中加入

5

克亚硝酸钠，以

防生锈。

7

、福尔马林

福尔马林是常用的杀细菌、

真菌剂。

它的

2

～

5%

水溶液能在

24

小时内杀死细菌芽孢，

常用来消毒器皿和器

具。如果用作无菌室等房屋消毒，取

100

毫升福尔马林，放在盆内，用小火微热，促使蒸发，在

10

小时内

可消菌

3

立方米左右体积房屋的空气。

第一节 常用试剂及其使用方法

一、诊断用纸片

⑴ 杆菌肽纸片（0.04U/片）：抑菌圈>10mm为敏感。质控菌株: D群链球菌阴性, A群链球菌阳性。

⑵ SMZ纸片（1.25μg/片、23.75μg/片）：出现抑菌圈即为敏感。质控菌株：D群链球菌阳性， A群链球菌阴性。

⑶ 新生霉素纸片（5.0μg/片）：抑菌圈≥16mm为敏感。质控菌株：表皮葡萄球菌阳性，腐生葡萄球菌阴性。

⑷ O129纸片、奥普托欣（Optochin）纸片：参见第五节《生化试验培养基》。

二、诊断用血清

1.沙门菌属诊断血清

⑴ A-F群O多价诊断血清。

⑵ 特异O群因子诊断血清：常用的有O2，O4，O7，O9，O10诊断血清。

⑶ 特异H因子诊断血清 常用的有Ha，Hb，Hc，Hd，Hgm，Hi，Hf、Vi因子诊断血清。

2.志贺菌属诊断血清

志贺菌属4种多价血清：痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清，福氏志贺菌多价血清及分型血清（1～6型），宋内志贺菌诊断血清，鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。

3.致病性大肠埃希菌诊断血清

肠致病性大肠埃希菌（EPEC）诊断血清，产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）诊断血清，肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）诊断血清，肠出血性大肠埃希菌（EHEC）诊断血清O157： H 7。

4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清

5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清

6.链球菌分类诊断血清

7.肺炎链球菌诊断血清

8.耶尔森菌诊断血清

三、常用染色液

1.革兰染色液

⑴ 结晶紫溶液 A液：结晶紫 20g，95%乙醇20 ml； B液：草酸铵 0.8g， 蒸馏水80 ml。

染色前24h将A液、 B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。

⑵ 碘液:碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。

将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水, 使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。

⑶ 脱色液：95%乙醇

⑷ 复染液：沙黄2.5g，95%乙醇100ml为贮存液，取贮存液10ml，加蒸馏水90ml为应用液。

2.抗酸染色液

⑴ 碱性复红染色液： ①萋纳石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱和溶液10ml，5%石炭酸溶液90ml。 ②脱色液：浓盐酸3ml，95%乙醇97ml。③复染液(吕弗勒美蓝液)：美蓝乙醇饱和溶液30ml，100g/L氢氧化钾溶液0.1ml，蒸馏水100ml。

⑵ 金胺O-罗丹明B染色液： ①罗丹明B液：罗丹明B 0.1g加蒸馏水100ml。②1g/L金胺O液：金胺O液0.1g加蒸馏水95ml,再加入纯石炭酸 5ml,混匀。③3%盐酸乙醇。④稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液100ml,加蒸馏水90ml,混匀。

3.鞭毛染色液(改良Ryu法)

A液：5%石炭酸10ml，鞣酸2g，饱和硫酸铝钾溶液 10ml； B液：结晶紫乙醇饱和液。应用液A液10份,B液1份,混合,室温存放备用。

4.异染颗粒染色液

甲液：甲苯胺蓝 0.15g，孔雀绿2g/L， 95% 乙醇2.0ml，蒸馏水100ml。乙液：碘 2g，碘化钾3g，蒸馏水300ml。

先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后, 加蒸馏水至300ml。

5.荚膜染色液

⑴ 印度墨汁或50g/L黑色素水溶液

⑵ 5g/L苯胺蓝水溶液。

第二节 基础培养基

一、液体基础培养基

1.蛋白胨水

[用途]

用于细菌靛基质试验；一般细菌培养和传代。

[配法]

蛋白胨（或胰蛋白胨）10g，氯化钠 5g，蒸馏水1L。

将上述成分溶于水中，校正pH 至7.2,分装试管，每管2~3ml，置121℃灭菌15min备用。

[质量控制]

大肠埃希菌生长良好，靛基质阳性；伤寒沙门菌生长良好，靛基质阴性。

2.营养肉汤

[用途]

一般细菌的增菌培养，加入1%的琼脂粉亦可作营养琼脂。

[配法]

蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，蒸馏水1L。

将上述成分称量混合溶解于水中，校正pH至7.4，按用途不同分装于烧瓶或试管内。经121℃灭菌15min，作无菌试验后冷藏备用。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌、伤寒沙门菌、化脓性链球菌生长良好。

[保存]

置冰箱3周内用完。

3.牛肉浸液培养基

[用途]

细菌培养最基础的培养基，除用于一般细菌的培养外，又可以作营养琼脂及其它培养基的基础。

[配法]

新鲜除脂牛肉 500g，氯化钠5g

蛋白胨10g，蒸馏水1L。

先将牛肉清洗，除脂肪、肌腱，并切块绞碎。称取500g置容器加入蒸馏水1L，搅匀后置冰箱过夜，次日煮沸加热30min，并用玻棒不时搅拌用绒布或麻布进行粗过滤，再用脱脂棉过滤即成。在过滤中加入蛋白胨10g、氯化钠5g溶解后，用氢氧化钠溶液校正pH至7.6~7.8，并加热煮沸10min，补充蒸馏水至1L，最后用滤纸过滤，呈清晰透明、淡黄色液体，经121℃15min灭菌备用。

[用法]

根据用途不同可以制成营养肉汤，以此为基础制成其它培养基。如制作固体培养基，加入琼脂15 ~20g/L即可。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、伤寒沙门菌、痢疾志贺菌等均生长良好。

[保存]

置4℃冰箱内可以使用较长时间。

注:商品牛肉浸膏粉，一般使用量为3～5g/L。

二、固体基础培养基

1.营养琼脂

[用途]

一般细菌和菌株的纯化及传种。[配法]

蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂粉（优质）12g，蒸馏水1L。

将上述成分(除琼脂外)溶于水中，校正pH 7.2～7.4后加入琼脂，煮沸溶解，根据用途不同进行分装，经121℃灭菌15min，倾注平板或制成斜面，冷藏备用。

[质量控制]

金黄色葡萄球菌菌落呈浅黄色； 痢疾志贺菌菌落无色；铜绿假单胞菌 菌落无色或浅绿色。

[保存]

置4℃冰箱保存，2周内用完。

2.血琼脂培养基

[用途]

一般病原菌的分离培养和溶血性鉴别及保存菌种。

[配法]

pH 7.4~7.6牛肉浸液琼脂 100ml，脱纤维羊血(或兔血) 5~10ml。

将血琼脂基础经121℃灭菌15min，待冷却至50℃左右以无菌手续加入羊血，摇匀后立即倾注灭菌平皿内，待凝固后，经无菌实验冷藏备用。

[质量控制]

化脓性链球菌ATCC 19615生长良好，β-溶血；肺炎链球菌ATCC 6303生长良好，α-溶血；表皮葡萄球菌ATCC 12228 生长良好,不溶血。

[保存]

置4℃冰箱，1周内用完。

3.巧克力琼脂培养基

[用途]

主要用于嗜血杆菌的分离培养，亦可用于奈瑟菌的增殖培养。

[配法]

鲜牛肉浸出液1L， 蛋白胨10g,

氯化钠5g，琼脂粉12g，无菌脱纤维

羊血或兔血100ml。

将上述成分（除兔血外）加热溶解，调pH至7.2，置121℃15min高压灭菌，待冷至约85℃，以无菌方式加入兔血，摇匀后置85℃水浴中，维持该温度10min，使之成巧克力色。取出置室温冷至约50℃，倾注平板或制成斜面备用。

[质量控制]

流感嗜血杆菌ATCC 10211、肺炎链球菌ATCC 6305生长良好，菌落典型。

[保存]

置4℃冰箱，1周内用完。

4.胱氨酸胰化酪蛋白琼脂

[用途]

常用于测定脑膜炎奈瑟菌和淋病奈瑟菌以及营养要求较高细菌的糖发酵试验。

[配法]

胱氨酸0.5g, 胰化酪蛋白20g,氯化钠5g，亚硫酸钠0.3g，琼脂3.5g，酚红0.0175g，蒸馏水1L。

将上述成分（酚红除外）混合溶解，调pH至7.2，加入酚红指示剂。分装试管，115℃灭菌15min。

[用法]

用于测定糖发酵时，按需要加入各种糖溶液，将待检标本直接种于培养基管内，置35℃孵箱，18~24h观察结果。培养基由红色变为黄色为阳性，不变色为阴性。

第三节 保存和增菌培养基

一、菌种保存培养基

[配法]

蛋白胨10g，牛肉膏5g，氯化钠3g，磷酸氢二钠2g，琼脂粉4.5g，蒸馏水1L 。

将上述成分混合于水中，加热溶解，调pH至7.4~7.6，分装试管2/3左右高度，121℃高压灭菌15min，成为半固体培养基，备用。

[质量控制]

培养基呈淡黄色半固体状。大肠埃希菌(ATCC 25922)生长良好,动力阳性；福氏志贺菌(ATCC 12022)生长良好,动力阴性；金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)生长良好,动力阴性。

二、增菌培养基

1.葡萄糖肉汤

[用途]

用于血液增菌。

[配法]

蛋白胨(或月示 胨)10g，氯化钠5g，肉浸液（或心浸液）1L，葡萄糖3g，枸橼酸钠3g，5g/L对氨基苯甲酸水溶液10ml，1mol/L硫酸镁溶液20ml，青霉素酶1000 U。

将蛋白胨、氯化钠混合于肉浸液中加热溶解，再加入葡萄糖、枸橼酸钠、对氨苯甲酸及硫酸镁，继续煮沸5min，并补足失水，调整pH至7.8。

过滤分装，每瓶50ml，高压灭菌115℃20min后，每瓶加入青霉素酶50 U，经无菌试验合格后，冷却备用。

[用法]

将采取的血液标本，以无菌手续注入培养瓶中（血液1ml，培养液10ml），置35℃培养箱内，每天1次取出观察结果。如有细菌生长，可出现数种不同的表现，应随时作分离培养，可选用血琼脂、伊红美蓝琼脂及巧克力琼脂平板等。无细菌生长表现的培养瓶，需连续观察7d，仍无细菌生长方可弃去。在观察的过程中，至少应作两次分离培养。

注:

⑴ 枸橼酸钠为抗凝剂，可使血液加入培养基中不凝固。

⑵ 对氨基苯甲酸主要中和血液中磺胺类药物的抑菌作用。

⑶ 硫酸镁主要抑制血液中存在的四环素、金霉素、新霉素、多粘菌素及链霉素的抑菌作用。

⑷ 本培养基近年来有许多改良配方，如加入0.3%～0.5%酵母浸膏以增加营养；加0.2%核酸刺激细菌生长；加0.1%粘液素能被覆于细菌的表面，保护细菌免受抗体破坏；加入聚茴香脑磺酸钠（SPS）能中和补体的抗药作用从而提高检出率。

2.血液增菌培养基

[用途]

血液和骨髓液病原菌的增菌培养。

[配法]

蛋白胨10g，氯化钠5g，牛肉膏3g，葡萄糖1g，酵母膏粉3g，枸橼酸钠3g，磷酸氢二钾2g，5g/L对氨基苯甲酸溶液5ml，1mol/L硫酸镁溶液20ml， 4g/L酚红溶液6ml，青霉素酶50 U，聚茴香脑磺酸钠(SPS) 0.3g，蒸馏水1L。

将上述成分（除酚红指示剂、青霉素酶外）混合加热溶解，校正pH至7.4，再加酚红，过滤分装每瓶30～50ml，经121℃灭菌15min和35℃24h无菌试验备用。临用时每瓶加入1.5～2.5 U青霉素酶。

[质量控制]

伤寒沙门菌ATCC 50096、白色念珠菌ATCC 10231、化脓性链球菌ATCC 19615、肺炎链球菌ATCC 6305、金黄色葡萄菌ATCC 25923、铜绿假单胞菌ATCC 27853均生长良好。

3.亚硒酸盐增菌培养基

[用途]

沙门菌增菌培养。

[配法]

蛋白胨5g，乳糖4g，磷酸氢二钠4.5g，磷酸二氢钠5.5g，亚硒酸氢钠4g，蒸馏水1L。

先将亚硒酸盐加到200ml蒸馏水中，充分摇匀溶解。其它成分称量混合，加入蒸馏水800ml，加热溶解，待冷却后两液混合，充分摇匀，校正pH 7.0~7.1(通过调整磷酸盐缓冲对的比例来校正pH值)。最后分装于15×150mm的试管内，每管10ml。置水浴隔水煮沸10~15min，立即冷却，置4℃冰箱保存备用。

[用法]

取新鲜标本1g或棉拭子采样直接种于该培养管内。摇动后置35℃培养过夜。如发现均匀混浊，管底有红色沉淀物，表示细菌生长。然后取培养物分离在选择性培养基上，如SS琼脂、麦康凯琼脂平板等，进行培养。

[质量控制]

培养基应呈淡黄色或无色，透明无沉淀物。增菌灵敏度：伤寒沙门菌1×10-5，鼠伤寒及副伤寒沙门菌1×10-7。

[保存]

4℃保存，1周内用完。

注：

⑴ 亚硒酸盐，包括亚硒酸钠、亚硒酸氢钠均可使用，但以亚硒酸氢钠效果为好。

⑵ 磷酸盐缓冲对中，两者的用量比例与亚硒酸盐及蛋白胨的品种有关。制备前应进行调试，其总量为10g/L。

⑶ 在制备过程中，亚硒酸盐不能直接加热。隔水煮沸时间亦不能超过规定时间，否则亚硒酸盐会变质，生成红色沉淀物。

⑷ 培养基应呈淡黄色，有红色沉淀物出现时不可再用。

4.SS增菌液

[用途]

用于沙门、志贺菌的增菌。

[配法]

月示 胨 2g，蛋白胨8g，牛肉膏3.5g，酵母膏2g，葡萄糖2g，枸橼酸铁10g，硫代硫酸钠10g，亚硫酸钠0.7g，胆盐5.5g，磷酸氢二钠4g，磷酸二氢钾0.1g，去氧胆酸钠(进口) 1.5g，煌绿0.005g，蒸馏水1L。

将上述成分加热溶于水中，调pH至7.1，分装试管（15×150mm），每管5~7ml，隔水煮沸5min备用。

[用法]

取粪便标本1g直接种于增菌液内，35℃16~18h培养，取出转种于分离培养基即可。

[质量控制]

培养基应呈淡黄色或略呈淡绿色。伤寒沙门菌ATCC 50096、福氏志贺菌ATCC 12022 生长良好；大肠埃希菌ATCC 25922 生长抑制。

注：

⑴ 切勿高压，隔水煮沸时间不超过5min。

⑵ 煌绿用量应根据不同产品批号酌情增减。

5.碱性蛋白胨水

[用途]

霍乱弧菌增菌培养。

[配法]

蛋白胨 20g，氯化钠5g，蒸馏水100ml。

将上述成分溶解于水中,校正pH 至8.6，分装于试管8~10ml，经121℃灭菌15min备用。

[用法]

将待检标本接种到碱性胨水中，置35℃培养6~8h，霍乱弧菌呈均匀混浊生长，表面有菌膜出现。取表面菌液一白金环移种到碱性琼脂、庆大琼脂或TCBS琼脂平板上。必要时做第二次增菌。

[质量控制]

有条件的实验室可用标准菌株，一般临床实验室可用非01群弧菌，培养后生长良好者方可使用。霍乱弧菌E1-Tor生物型和副溶血弧菌生长良好（6h）；大肠埃希菌ATCC 25922不生长（6h）。

[保存]

置4℃冰箱，2周内用完。

注：若在每升碱性胨水中加入1%亚碲酸钾溶液0.5~1.0 ml，则成为亚碲酸钾碱性胨水，其增菌效果更为理想。

第四节 分离培养基

一、革兰阳性杆菌分离培养基

1.罗-琴改良培养基

[用途]

用于结核分枝杆菌培养。

[配法]

磷酸二氢钾2.4g，硫酸镁0.24g，枸橼酸镁(或枸橼酸钠) 0.6g，天门冬素3.6g，甘油12ml，蒸馏水600ml，马铃薯淀粉30g，新鲜鸡卵液1L，2%孔雀绿水溶液20ml。

先将磷酸盐、硫酸镁、枸橼酸镁、天门冬素及甘油，加热溶解于600ml蒸馏水中。再添放马铃薯粉，边放边搅，并继续置沸水中加热30min，待冷却至60℃左右时，加入鸡卵液1L及孔雀绿溶液20ml，充分混匀后，用无菌操作分装于灭菌试管，每支5~6ml，塞紧橡皮塞（最好是翻口塞），置于血清凝固器内制成斜面，经85℃1h间歇灭菌2次(或高压灭菌115℃20min)，待凝固后经无菌试验，4℃冷藏备用。

[用法]

取晨咳痰或其它体液标本，经消化处理和离心沉淀的浓缩液0.1ml（约2滴）滴种于培养基的斜面上，尽量摇晃，置35℃5%~10%二氧化碳温箱内培养1~4周，观察结果。凡在1周内发现生长的菌落，一般不可能是结核分枝杆菌；在2周后生长的菌落，奶油状，略呈黄色，粗糙突起，不透明，即取菌进行涂片染色镜检及鉴定。

[质量控制]

用结核分枝杆菌菌株作阳性培养试验。

[保存]

置4℃冰箱内2~4周有效。

注：

⑴ 本培养基由Lowenstein-Jenden设计的基础上改良。

（2）本培养基pH约为6.0左右，一般无须校正。

（3）间歇灭菌的温度不宜超过90℃。

2.血清斜面培养基(吕氏血清斜面)

[用途]

用于白喉棒状杆菌培养。

[配法]

1%葡萄糖肉汤(pH 7.6)100ml，无菌动物血清(牛、羊、猪、兔) 300ml。

将上述成分混合后，分装于试管内，每管约4~5ml。斜插在血清凝固器内（或蒸笼）加热80~85℃30min，使血清凝固成斜面，冷却后放4℃冰箱内。取出后采用间歇灭菌法，85℃灭菌30min，连续3天，经无菌试验证明无杂菌生长即可应用。

微生物学实验室常用试剂与培养基 第一节 常用试剂及其使用方法 分类:默认栏目2006.2.21 20:54 作者：hbmzhsh | 评论：2 | 阅读：1037

微生物学实验室常用试剂与培养基

第一节 常用试剂及其使用方法

一、诊断用纸片

⑴ 杆菌肽纸片（0.04U/片）：抑菌圈>10mm为敏感。质控菌株: D群链球菌阴性, A群链球菌阳性。

⑵ SMZ纸片（1.25μg/片、23.75μg/片）：出现抑菌圈即为敏感。质控菌株：D群链球菌阳性， A群链球菌阴性。

⑶ 新生霉素纸片（5.0μg/片）：抑菌圈≥16mm为敏感。质控菌株：表皮葡萄球菌阳性，腐生葡萄球菌阴性。

⑷ O129纸片、奥普托欣（Optochin）纸片：参见第五节《生化试验培养基》。

二、诊断用血清

1.沙门菌属诊断血清

⑴ A-F群O多价诊断血清。

⑵ 特异O群因子诊断血清：常用的有O2，O4，O7，O9，O10诊断血清。

⑶ 特异H因子诊断血清 常用的有Ha，Hb，Hc，Hd，Hgm，Hi，Hf、Vi因子诊断血清。

2.志贺菌属诊断血清

志贺菌属4种多价血清：痢疾志贺菌Ⅰ、Ⅱ血清，福氏志贺菌多价血清及分型血清（1～6型），宋内志贺菌诊断血清，鲍氏志贺菌多价血清及分型血清。

3.致病性大肠埃希菌诊断血清

肠致病性大肠埃希菌（EPEC）诊断血清，产肠毒素大肠埃希菌（ETEC）诊断血清，肠侵袭性大肠埃希菌（EIEC）诊断血清，肠出血性大肠埃希菌（EHEC）诊断血清O157： H 7。

4.霍乱弧菌O1、O139混合多价诊断血清及稻叶、小川、彦岛O139分型血清

5.脑膜炎奈瑟菌多价血清及分群血清

6.链球菌分类诊断血清

7.肺炎链球菌诊断血清

8.耶尔森菌诊断血清

三、常用染色液

1.革兰染色液

⑴ 结晶紫溶液 A液：结晶紫 20g，95%乙醇20 ml； B液：草酸铵 0.8g， 蒸馏水80 ml。

染色前24h将A液、 B液混合,过滤后装入试剂瓶内备用。

⑵ 碘液:碘1g，碘化钾2g，蒸馏水300ml。

将碘与碘化钾混合并研磨,加入几毫升蒸馏水, 使其逐渐溶解,然后研磨,继续加入少量蒸馏水至碘、碘化钾完全溶解。最后补足水量。也可用少量蒸馏水将碘化钾完全溶解,再加入碘片,待完全溶解后,加水至300ml。

⑶ 脱色液：95%乙醇

⑷ 复染液：沙黄2.5g，95%乙醇100ml为贮存液，取贮存液10ml，加蒸馏水90ml为应用液。

2.抗酸染色液

⑴ 碱性复红染色液： ①萋纳石炭酸复红溶液：碱性复红乙醇饱和溶液10ml，5%石炭酸溶液90ml。 ②脱色液：浓盐酸3ml，95%乙醇97ml。③复染液(吕弗勒美蓝液)：美蓝乙醇饱和溶液30ml，100g/L氢氧化钾溶液0.1ml，蒸馏水100ml。

⑵ 金胺O-罗丹明B染色液： ①罗丹明B液：罗丹明B 0.1g加蒸馏水100ml。②1g/L金胺O液：金胺O液0.1g加蒸馏水95ml,再加入纯石炭酸 5ml,混匀。③3%盐酸乙醇。④稀释美蓝液：吕弗勒美蓝液100ml,加蒸馏水90ml,混匀。

3.鞭毛染色液(改良Ryu法)

A液：5%石炭酸10ml，鞣酸2g，饱和硫酸铝钾溶液 10ml； B液：结晶紫乙醇饱和液。应用液A液10份,B液1份,混合,室温存放备用。

4.异染颗粒染色液

甲液：甲苯胺蓝 0.15g，孔雀绿2g/L， 95% 乙醇2.0ml，蒸馏水100ml。乙液：碘 2g，碘化钾3g，蒸馏水300ml。

先将碘化钾加入少许蒸馏水(约2ml),充分振摇,待完全溶解,再加入碘,使完全溶解后, 加蒸馏水至300ml。

5.荚膜染色液

⑴ 印度墨汁或50g/L黑色素水溶液

⑵ 5g/L苯胺蓝水溶液。