Tris-乙酸 配制

1.

称量Tris

48.4g，Na2EDTA·2H2O

7.44g

于1L烧杯中；

2.向烧杯中加入约800ml去离子水，充分搅拌溶解；

3加入11.4ml的冰醋酸，充分搅拌；

4.用去离子水定容至1L后，室温保存，待用。

1、使用液（0.5×）

0.045mol/L Tris-硼酸 0.001mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀，溶液体积为1L。

2、浓贮存液（5×）

54gTris碱 27.5g硼酸 20ml 0.5mol/L EDTA 采用无菌水溶解混匀，NaOH调pH至8.0，溶液体积1L。

组成缓冲溶液的两组分的比值不为1∶1时，缓冲作用减小，缓冲能力降低，当c（盐）/c（酸）为1∶1时△pH最小，缓冲能力大。不论对于酸或碱都有较大的缓冲作用。缓冲溶液的pH值可用下式计算：

此时缓冲能力大。缓冲组分的比值离1∶1愈远，缓冲能力愈小，甚至不能起缓冲作用。对于任何缓冲体系，存在有效缓冲范围，这个范围大致在pKaφ（或pKbφ）两侧各一个pH单位之内。

弱酸及其盐（弱酸及其共轭碱）体系pH=pKaφ±1

弱碱及其盐（弱碱及其共轭酸）体系pOH=pKbφ±1

参考资料来源：百度百科-tbe

参考资料来源：百度百科-缓冲液

三羟甲基氨基甲烷试剂，三羟甲基氨基甲烷（Tris）是一种应用非常广泛的有机试剂，它的有效缓冲范围在pH7.0到9.2之间。它及其衍生物被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备，可用于制作药物、有机合成、生物缓冲剂等。

其中在生化实验中，许多蛋白质及核酸相关的实验都需要用Tris作为生物缓冲剂。它甚至有超过磷酸盐缓冲液的趋势，因为它有好的缓冲能力、毒性低、对生物反应的干扰极低，而且纯度很高。有超过磷酸盐的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中都已开始实验TRIS缓冲液，很少再用磷酸盐。

TRIS（三羟甲基氨基甲烷）的应用

① 在电泳缓冲液中同甘氨酸构成缓冲体系稳定P值；

② 在凝胶中使用TRIS-HCL缓冲体系稳定PH值；

③ 被广泛用作核酸和蛋白质的溶剂；

④ TRIS缓冲液的低离子强度特点还可用于线虫的中间纤维的形成；

⑤ 在TRIS盐酸缓冲液中加入EDTA制成“TE缓冲液”，可用于DNA的稳定和储存；

⑥ 将调节PH值的酸溶液换成乙酸，获得“TAE缓冲液”，换成硼酸可获得TBE缓冲液。这两种溶液常用于核酸电泳实中。

242g Tris碱

57.1ml冰乙酸

100ml 0.5mol/L EDTA（pH8.0）

是配置1L 50x的缓冲液

使用的时候取决于你的容器有多大，一般用一个2L的试剂瓶的话，就是40ml储存液+水补满到2L，然后拼命混匀就可以倒进电泳槽作电泳缓冲液或者配置agarose TAE胶了

TAE缓冲液组份浓度：2M Tris-醋酸,100mM EDTA

TAE缓冲液配方体积：1L

TAE缓冲液配制方法：

称量下列试剂,置于1 L烧杯中.

Tris：242g

Na2EDTA·2H2O：37.2g

向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解.

加入57.1 ml的醋酸,充分搅拌.

加去离子水将溶液定容至1 L后,室温保存.

一、SDS-PAGE电泳所用溶液：

　    1）30 %聚丙烯酰胺溶液 (100 mL)

丙烯酰胺 (Arc)                            29 g

N,N’-亚甲双丙烯酰胺 (Bis)                  1 g

用双蒸水定容至100mL，过滤备用，4℃存放

丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。

　    2）5×Tris-甘氨酸缓冲液 (1 L)

Tris碱                                 15.1 g

甘氨酸(电泳级)                          94 g

10 %SDS                               50 mL

使用时稀释5倍使用

3）2×SDS凝胶加样缓冲液(10mL)

0.5 mol/L Tris-Cl  (pH 6.8)         2 mL

10％(W/V)SDS                  4 mL

甘油                           2 mL

β-巯基乙醇                    1.0 mL

(DTT（二硫苏糖醇）            0.31g)

溴酚兰                        0.02g

双蒸水                       0.5 mL

室温存放备用

4）考马斯亮蓝染色液

考马斯亮蓝R-250 （G-250）             1.0 g

甲醇                                 450 mL

冰醋酸                               100 mL

ddH2O                               450 mL

0.2g考马斯亮蓝R250+84mL 95％乙醇+20mL冰醋酸，定容至200mL，过滤备用

5）考马斯亮蓝脱色液（甲醇脱色液效果好，但有毒性）

甲醇                                 100 mL

冰醋酸                               100 mL

ddH2O                                800 mL

医用酒精：冰醋酸：水=4.5：0.5：5(V：V：V)

二、SDS-PAGE所需溶液:

A液——30％丙稀酰胺（W/V）：丙稀酰胺29.2g，N-N-甲叉双丙稀酰胺0.8g，加入去离子水定容至100mL，pH值不能超过7.0，过滤于棕色玻璃瓶中4℃贮存。B液——1.5mol/L Tris·HCl，pH8.8：18.17g（9.09g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约3mL(1.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至8.8，定容至100mL（50mL）。C液——1.5mol/L Tris·HCl，pH6.8：12.1g（6.05g）Tirs碱，溶于80mL（40mL）去离子水中，加入约7mL(3.5mL)以上的浓盐酸调节pH值至6.8，定容至100mL（50mL）。D液——10％SDS：10g (2g)SDS溶于去离子水中，定容至100mL(20mL)，加热至68℃助溶。E液——10％过硫酸铵：5g(0.5g)过硫酸铵，溶于50mL(5mL)去离子水中；现配现用或分装至0.5mL离心管中冷冻备用。

F液——TEMED(N-N-N`-N`－四甲基乙二胺)原液，室温保存。

三、配制Tris-甘氨酸SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶所用溶液

1LB(Luria-Bertani) 培养液、平板的配制

配制每升LB培养液，应在950ml去离子水中加入：

细菌培养用酵母提取物（bacto-yeastextract） 5g

细菌培养用胰化蛋白胨（bacto-tryptone）10g

NaCl 10g

摇动容器直至溶质完全溶解，用5mol/LNaOH(约0.2ml)调节pH值至7.0，加入去离子水至总体积为1L，在 15 1bf/in2(1.034×105Pa)高压下蒸汽灭菌 20min。

LB 琼脂平板的配制：

先按上述配方配制液体培养基，临高压灭菌前加入琼脂糖 15g /L，同法高压蒸汽灭菌 20min。从高压灭菌器取出培养基时应轻轻旋动以使熔解的琼脂糖能均匀分布于整个培养基溶液中，应使培养基降温至50℃时，加入抗生素等不耐热的物质。为避免产生气泡，混匀培养基时应采取旋动的方式，然后可直接从烧瓶中倾出培养基铺制平板。90mm直径的培养皿约需30－50ml培养基，培养基完全凝结后，应倒置平皿并贮存于4℃备用。

2 ．琼脂糖凝胶的配制

根据所需凝胶的浓度秤取琼脂糖，加入相应电泳缓冲液中，用微波炉加热煮沸至琼脂糖完全溶解，加入适量 EB 混匀，适当冷却后倾入凝胶铸槽中，插入梳子，凝胶厚度不超过梳孔，如有气泡产生则用玻璃棒驱除，不能过早拔除梳子，应待凝胶完全凝结后才能拔除梳子。

3 ． P1 、 P2 、 P3 的配制 P1 的配制

在 800ml 去离子水中溶入 Tris 碱 6.06g，Na2EDTA·2H2O 3.72g，用 HCl 调整 pH 至 8.0，用去离子水调整容积至1升，每升P1内加入RNaseA100mg。

P2 的配制：在 950ml 去离子水中溶入 NaOH 8.0g，20％SDS 50ml，调整容积至 1 升。

P3 的配制：在 500ml 去离子水中溶入醋酸钾 294.5g，用冰醋酸调整 pH 值至 5.5，用去离子水调整容积至1升。

4****．常用缓冲液

TE

pH 7.4

10mmol/L Tris·Cl (pH7.4)

1mmol/L EDTA(pH8.0)

pH 7.6

10mmol/L Tris·Cl (pH7.6)

1mmol/L EDTA(pH8.0)

pH 8.0

10mmol/L Tris·Cl (pH8.0)

1mmol/L EDTA(pH8.0)

STE(****亦称 TEN)

0.1mmol/L NaCl

10mmol/L Tris·Cl (pH8.0)

1mmol/L EDTA(pH8.0)

STET

0.1mmol/L NaCl

10mmol/LTris·Cl (pH8.0)

1mmol/L EDTA(pH8.0)

5%Triton X-100

TNT

10mmol/LTris·Cl (pH8.0)

150mmol/L NaCl

0.05% Tween 20

电泳缓冲液

Tris- 乙酸（ TAE ）

50×浓贮存液（每升）：242g Tris 碱

57.1ml 冰乙酸

100ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

使用时再稀释50倍。

Tris-磷酸（TPE）

10×浓贮存液（每升）：108g Tris 碱

15.5ml 85％磷酸（1.679g /ml）

40ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

使用时再稀释10倍。

Tris-硼酸（TBE）

5×浓贮存液（每升）：54g Tris 碱

27.5g 硼酸20ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

使用时再稀释10倍。

碱性缓冲液

1×使用液（每升）：5ml10mol/L NaOH

2ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0)

Tris-甘氨酸

5×浓贮存液（每升）：15.1g Tris 碱

94g 甘氨酸（电泳级）（pH8.3）

50ml 10%SDS（电泳级）

2×SDS 凝胶加样缓冲液

100mmol/L Tris·HCl(pH6.8)

200mmol/L 二硫苏糖醇（DTT）

4%SDS（电泳级）

0.2％溴酚蓝

20％甘油

30％丙烯酰胺

将29g 丙烯酰胺和1gN,N’－亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中，加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。用Nalgene滤器(0.45孔径)过滤除菌查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温。

10mol/L 乙酸铵：

把770g 乙酸铵溶解于800ml水中，加水定容至1L后过滤除菌。

1mol/LCaCl2

在200ml纯水中（Milli-Q水或相当级别的水）溶解54gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成10ml小份贮存于－20℃。

2.5mol/LCaCl2

在20ml蒸馏水中溶解13.5gCaCl2·6H2O，用0.22滤器过滤除菌，分装成1ml小份贮存于－20℃。

1mol/L 二硫苏糖醇（DTT）：

用20ml0.01mol/L乙酸钠溶液（pH5.2）溶解3.09gDTT，过滤除菌后分装成1ml小份贮存于－20℃。

0.5mol/LEDTA(pH8.0)：

在 800ml 水中加入 186.1g 二水乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na·H2O），在磁力搅拌器上剧烈搅拌，用NaOH调节溶液的pH值至8.0，然后定容至1升，分装后高压灭菌备用。

溴化乙锭（10mg/ml）：

在100ml水中加入1g 溴化乙锭，磁力搅拌数小时以确保其完全溶解，然后用铝箔包裹容器或转移至棕色瓶中，保存于室温。

1mol/LMgCl2：

在800ml水中溶解203.3gMgCl2·6H2O，用水定容至1升，分装成小份并高压灭菌备用。

酚：氯仿

把酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/LTris·Cl(pH7.6)抽提几次以平衡这一混合物，置棕色玻璃瓶中，上面覆盖等体积的0.01mol/LTris·Cl(pH7.6)液层，保存于4℃。

磷酸缓冲盐溶液（PBS）

在800ml蒸馏水中溶解8g NaCl、0.2g KCl、1.44gNa2HPO4和0.24gKH2PO4，用HCl调节溶液的pH 值至 7.4，加水定容至 1 升，高压蒸汽灭菌 20min。保存于室温。

乙酸钾溶液（用于碱裂解）

在60ml 5mol/L乙酸钾溶液中加入11.5ml冰乙酸和28.5ml水，即成钾浓度为3mol/L而乙酸根浓度为5mol/L的溶液。

3mol/L 乙酸钠(pH5.2 和 7.0)

在800ml水中溶解408.1g 三水乙酸钠，用冰乙酸调节pH值至5.2或用稀乙酸调节pH至7.0，加水定容至1升，分装后高压灭菌。

1mol/LTris

在800ml水中溶解121.1gTris碱，加入浓HCl调节pH至所需值。

pH HCl

7.4 70ml

7.6 60ml

8.0 42ml

应使溶液冷至室温后方可最后调定pH值，加水定容至1升，分装后高压灭菌。

Tris 缓冲盐溶液（TBS）

在800ml蒸馏水中溶解8gNaCl、0.2gKCl和3gTris碱，加入0.015酚红并用HCl调pH值至7.4，用蒸馏水定容至1升，分装后在15lbf/in2(1.34×105Pa)高压下蒸汽灭菌20分鈡，于室温保存。

5mmol/LNH4Ac 溶液

秤取乙酸铵192.7g，加重蒸水250ml混匀，加重蒸水定容至500ml，1.1kg/cm2灭菌20min。

10mg/mlBSA（小牛血清白蛋白）溶液

秤取100mg小牛血清白蛋白溶于10ml灭菌重蒸水中。置4℃冰箱贮存备用。

10%十二烷基硫酸钠（SDS）

在900ml水中溶解100g 电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加入水定容至1L，分装备用。

242g TRIS碱

57.1ml 冰醋酸

100ml 0.05mol/LEDTA

称下列试剂，1L烧杯

tris 242g

Na2EDTA.2H2O37.2g

然后加入800ml的去离子水，充分搅拌溶解。

加入57.1ml的醋酸，充分混匀。

加去离子水定容至1L，室温保存。

需要使用的时候，稀释为1*的，

例如：需要使用200ml的1*TAE，则量4ml的50*TAE，196ml的去离子水，混匀即可。