苯酚和氯仿如何分离的

加入氢氧化钠溶液。不能加入溴水。

原因：

1、苯酚与氢氧化钠反应生成苯酚钠，苯酚钠溶于水，而苯与水互不相容，可以用分液的方法将苯酚钠溶液和苯分离。

2、苯酚跟溴水在室温下生成三溴苯酚白色沉淀，而三溴苯酚溶于苯中，所以不能用溴水分离。

扩展资料：

1、苯酚：可混溶于醚、氯仿、甘油、二硫化碳、凡士林、挥发油、强碱水溶液。常温时易溶于乙醇、甘油、氯仿、乙醚等有机溶剂，室温时稍溶于水，与大约8%水混合可液化，65℃以上能与水混溶，几乎不溶于石油醚。

2、苯：沸点为80.1℃，熔点为5.5℃。苯比水密度低，密度为0.88g/cm3，但其分子质量比水重。苯难溶于水，1升水中最多溶解1.7g苯；但苯是一种良好的有机溶剂，溶解有机分子和一些非极性的无机分子的能力很强，除甘油，乙二醇等多元醇外能与大多数有机溶剂混溶。

参考资料来源：百度百科-苯

参考资料来源：百度百科-苯酚

PhOH,BnOH,PhCOOH,PhCOCH3 混合物 + 足量1M NaOH溶液，氯仿提取，分相，得：

水相A，含PhCOONa, PhONa有机相B，含BnOH,PhCOCH3.

水相A通入过量CO2气体，加入氯仿提取，得到有机相除去溶剂得到苯酚，水相用稀盐酸酸化得到苯甲酸。

有机相B加入足量饱和亚硫酸氢钠溶液，过滤收集沉淀，滤液分出有机相除去溶剂得到苯甲醇。

滤渣加入稀盐酸，充分溶解后氯仿提取，有机相除去溶剂得到苯乙酮。

上层是水。

氯仿：使有机相和水相易分层，增加核酸得率，同时可除去脂类。

1. 说明：从核酸样品中除去蛋白质时常常使用苯酚/氯仿/异戊醇（25 : 24 : 1)。氯仿可使蛋白质变性并有助于液相与有机相的分离，而异戊醇则有助于消除抽提过程中出现的气泡。

2. 配制方法：将Tris-HCl平衡苯酚与等体积的氯仿/异戊醇（24 : 1）混合均匀后，移入棕色玻璃瓶中4℃保存。

http://www.takara.com.cn/product/2005/s/s1FH11001.html

再用酚:氯仿:异戊醇抽提二次,每次回收上层水相。

http://youarezen.blogchina.com/2175456.html

氯仿是分子量比较大的有机溶剂,在提取RNA时,氯仿可以有效的使有机相和无机相迅速分离.DNA提取过程 有机相中主要是酚和蛋白结合,从而使得蛋白和DNA脱离,DNA进入水相.但是在RNA的提取过程就要避免蛋白和DNA脱离,否则DNA会释放到水相.不管有酚也好,没有酚也好,氯仿本身也对蛋白有变性作用,剧烈的震荡,很容易使得DNA的亲水基团,与水相接触.所以不要剧烈震荡.

异丙醇的作用是通过-OH的疏水作用使得RNA 或者DNA链中的亲水基团受到保护,等同于沉淀,但是这是个反应时发生在水相中,与前面的氯仿不矛盾.

氯仿的作用有多个方面,一是作为有机溶剂变性蛋白,使其沉淀并通过离心除去,同时也通过变性作用抑制RNase活性；二是RNA提取试剂中通常含有苯酚（Trizol主要成分就是苯酚,很多自己配试剂提的方法也用苯酚,抽提蛋白时也会用到苯酚）,苯酚微溶于水,抽提烷之后水相里有痕量的酚,如果不除去会损伤核酸,需要通过氯仿把水相里参与的苯酚抽提掉；三是作为溶剂抽提样品中的一些脂溶性杂质（比如油脂、脂溶性色素等）,起到一定除杂作用

通常氯仿里面会加少量异戊醇（1/25）,减少蛋白质在变性过程中由于震荡产生的泡沫,影响后续操作,不过个人经验感觉加不加没什么太大区别,也许是我的样品里蛋白不多吧

异丙醇是沉淀核酸用的,作用和乙醇一样.只不过用量少一点,0.6V~1V就够了,不像乙醇沉淀需要至少2V,一般需要2.5倍体积.在水相很多,离心管容积有限,加不下太多乙醇的时候一般会用异丙醇沉淀.不过感觉效果不如乙醇,偶尔会有沉淀不出来东西的时候

1 快速微量提取

A.取1.5ml菌体培养物于灭菌Ep管,12000rpm离1min, 丢清夜,收集菌体.

B.加入400ul裂解液（40mMTris-醋酸,20mM醋酸钠,1mMEDTA,1%SDS,pH7.8）混匀,置于37oC水浴1hr.

C.加入200ul5mol/L氯化钠溶液,混匀于13000rpm离15min.

D.取清液,用苯酚抽提2,氯仿抽提1.

E.加两倍体积水乙醇,1/10体积醋酸钾(3M ,pH8.0),-20度保存1,13000rpm离15min,弃清液,沉淀用70%乙醇洗2；置于室温干燥,溶于50ulTE溶液,置4oC保存备用.

2 蛋白酶/SDS制备

先用10ml含适抗素GBM夜培养Delftia sp.,第二4000rpm离10min收集菌体,用Washing TE（50mmol/LTris-HCl pH8.0,10mmol/LEDTA pH8.0）洗菌体2,菌体充悬浮5ml 1×TE缓冲液,先加入0.5ml 5mg/L蛋白酶、0.5ml 10% SDS,轻轻混匀50℃放置3h~5h,接着用等体积Tris饱苯酚抽提2,苯酚/氯仿/异戊醇抽提,氯仿抽提,乙醇沉淀DNA,用自移液器吸管絮状DNA沉淀块吸附Ep管,70%乙醇洗2,干燥溶于适1×TE或ddH2O.

3

1) 细菌培养：细菌接种于5ml液体培养基,37℃摇床（300rpm）培养液.

2) 细菌收集：取1ml培养物于1.5ml EP管,室温8000rpm离5min,弃清,沉淀重新悬浮于1ml TE（pH8.0）（用ddH2O行).

3) 菌体裂加入6μl 50mg/ml溶菌酶,37℃作用2h.再加2mol/LNaCl50μl,10%SDS 110μl,20mg/ml蛋白酶K 3μl,50℃作用3h或37℃夜.（菌液应透明粘稠液体）

4) 抽提：菌液均两1.5ml EP管,加等体积酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,室温放置5-10min.12000rpm离10min.抽提两.（清粘稠,吸取应,枪尖应剪）

5) 沉淀：加0.6倍体积异丙醇,混匀,室温放置10min.1 2000rpm离10min.

6)洗涤：沉淀用75%乙醇洗涤.

7) 抽（凉）干,溶于50μl ddH2O,取2-5μl电泳.作PCR模板用.

酚和氯仿等体积混合后用0.1mol/l tris·ci抽提，怎么抽提

感觉提问主意不是很清晰

酚:氯仿:的目的是沉淀蛋白质原理如下：酞与氯仿是非极性分子,水是极性分子,当蛋白水溶液与酚或氯仿混合时,蛋白质分子之间的水分子就被酚或氯仿挤去,使蛋白失去水合状态而变性过离心,变性蛋白质的密度比水的密度为大,因而与分离,沉淀在水相下面,从而与溶解在水相中的DNA分开.水相异戊醇的目的是减少抽提过程中的泡沫产生,原理如下：在抽提DNA时,为了混合均匀,必须剧烈振荡容器数次,这时在混合液内易产生气泡,气泡会阻止相互间的充分作用.加入异戊醇能降低分子表面张力,所以能减少抽提过程中的泡沫产生.

原理：动物和植物组织的脱氧核糖核蛋白（DNP）可溶于水或浓盐溶液（如1mol/L氯化钠），但在0.14mol/L氯化钠盐溶液中溶解度最低，而核酸核蛋白（RNP）则在0.14mol/L氯化钠中溶解度最大，利用这一性质可将其分开。

将沉淀物溶解于生理盐水，加入去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）溶液，使DNA与蛋白质分离开。加入固体氯化钠使其浓度达到1mol/L，使DNA溶解。加氯仿-异戊醇去除蛋白质，也可重复该步操作得较纯DNA。最后用95%乙醇沉淀DNA。

溶解：将离心后除去RNA的沉淀，用30ml生理盐水溶解，充分搅拌后，匀浆一次。加4毫升10％SDS溶液，使溶液的SDS浓度达到1％左右，边加边搅拌，放置60 ℃水浴保温10分钟（不停搅拌），冷却。加固体氯化钠，使溶液氯化钠浓度达到1mol/L，充分搅拌10分钟；

除杂质：加等体积氯仿-异戊醇混合液，充分震荡10分钟， 8000 r/min离心7分钟，取上层液量好体积，倒入烧杯中（离心管），加同体积的氯仿-异戊醇混合液，重复上次操作。直至界面不出现蛋白凝胶为止；

沉淀：准确量取上清液体积，加2倍体积95％冷乙醇，搅拌后，置冰箱静止冷却，待有白色丝状物出现，约10-15分钟，离心8000 r/min离心7分钟，得白色沉淀；

溶解：将沉淀物用0.1mol/L NaOH约10毫升溶解,得DNA溶液。