苯酚硫酸法测葡萄糖含量的原理及影响因素有哪些？谢谢！
淀粉、纤维素的构成单位是葡萄糖，但植物多糖的话，种类就很多了，构成的单元也很多，多种单糖---果糖、半乳糖、木糖、甘露糖等等都可以作为构成单位。比如银耳多糖、香菇多糖，成分极为复杂。
苯酚硫酸法师利用糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物。在波长490 nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量。
此时，对于杂聚多糖，只用葡萄糖溶液做标准曲线，是不准的。有时用多种单糖标准品作标准曲线，但不同单糖标准品在相同浓度下其吸收值相差较大（葡萄糖显色最大），分别制作标准曲线对杂多糖测定的结果也就不同。因此，苯酚硫酸法对于成分复杂的多糖来说，只能是一个参考。
对杂多糖往往不用单一的苯酚硫酸法。比如，采用气相色谱法对杂多糖的组成进行分析，再配合苯酚硫酸法可以得到更可靠的结果，比单用苯酚 硫酸法更可靠、准确。
苯酚硫酸法测多糖含量步骤如下：
1、目的要求：测量蒽酮硫酸法不能测量的血清型的过程样品中的多糖含量。
2、方法原理：糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙黄色化合物，且颜色稳定，在波长490nm处和一定的浓度范围内，其吸光度与多糖含量呈线性关系正比，从而可以利用分光度计测定其吸光度，并利用标准曲线定量测定样品的多糖含量。
3、主要实验仪器及材料：浓硫酸，苯酚，蒸馏装置，分光光度计，电子天平，坐标纸或电脑等。
注意：
（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。
（4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
DNS 法为在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物。在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系，利用比色法可测定样品中的含糖量。
苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物，再以比色法测定。
1、制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1。8ml，各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml。
摇匀静置30分钟以后于490nm测吸光度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2、取多糖样品1.0ml，加1.0ml蒸馏水，然后加入6%苯酚1.0ml，迅速加入浓硫酸5.0ml，在涡旋仪上震荡，充分混匀，静置30分钟，于490nm测定吸光度，并将测得的吸光度带入标准曲线中，可获得多糖浓度。
注意
（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。
（4）测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1—0.3之间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
1、制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
2、对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算。
3、测定时根据光密度值确定取样的量。光密度值最好在0.1——0.3之间。比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
扩展资料：
苯酚法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100ug范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。
苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。
参考资料来源：百度百科-苯酚法测可溶性糖
参考资料来源：百度百科-苯酚-硫酸法
2、原因如下：
苯酚硫酸法测定多糖原理是：多糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg/ml范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收，因而可用比色法在此波长下测定。而上述反应过程不受蛋白质影响。
3、补充：
苯酚-硫酸比色法是Dubois M等在1951年提出并建立的一种用于多糖含量测定的方法，也被称为苯酚-硫酸分光光度法或苯酚-硫酸法，其应用广泛。具体方法是待测定多糖样品液1
mL，加入5%苯酚溶液1.0mL，摇匀后迅速加入浓硫酸5mL，再次迅速摇匀，然后置沸水浴加热30min，冷水迅速冷却至室温，按分光光度法在490nm波长处测定吸光度值。该法操作简便，快捷灵敏，且不需贵重仪器，但准确性和重现性受实验条件影响较大，其原理是利用多糖在浓硫酸作用下水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，进而和苯酚缩合成有色化合物，在490nm处进行比色测定。
最好用标样否则你怎么确定测定结果与真实结果的偏差除非高效液相测一下样品纯度(你不是有标样吗)很麻烦，得摸条件
这个实验意义不大，一般每个实验室都有自己加量而且固定，一般硫酸是苯酚5倍，苯酚6%和样品1:1或1:2，不用水浴，硫酸溶解会释放大量的热，多糖测定使世界难题，如果确定是什么多糖可以用酶法，别的还是水提醇沉，溶解，苯酚硫酸
原理
多糖在硫酸的作用下先水解成单糖,并迅速脱水生成糖醛衍生物,然后与苯酚生成橙黄色化合物.再以比色法测定.
试剂
1． 浓硫酸：分析纯,95.5%
2． 80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解,可置冰箱中避光长期储存.
3． 6%苯酚：临用前以80%苯酚配制.（每次测定均需现配）
4． 标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖.
5． 15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解,可置冰箱中长期储存.
6． 5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解,可置冰箱中长期储存.
7． 6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水.
8． 6mol/L 盐酸
