咪唑乙酸盐酸盐的合成中能不能用其他溶剂代替乙酸乙酯

基本理论:(1)由苯乙醇经氧化(2)由苯醋酸乙酯经还原而制得.(3)用艾塔得(Etard)反应即用氯化铬酰为氧化剂,在四氯化碳中来氧化乙苯生成苯乙醛. 基本路线:(1)一先制苯乙醇用苯乙烯与氯化氢加成得2-苯基氯乙烷,再用弱碱水解而得 答得不够完整,不能为。

甘氨酸的用途如下：

1、食品用途：

用作生化试剂，用于医药、饲料和食品添加剂，氮肥工业用作无毒脱碳剂；营养增补剂，主要用于调味等方面；对枯草杆菌及大肠杆菌的繁殖有一定抑制作用。抗氧化作用（利用其金属螯合作用）添加于奶油、干酪、人造奶油可延长保存期3～4倍。

2、医药用途：

用作医学微生物和生物化学氨基酸代谢研究的用药；用作金霉素缓冲剂\抗帕金森氏病药物L-多巴\维生素B6\以及苏氨酸等氨基酸的合成原料；与阿司匹林合用，可减少其对胃的刺激；作为生成非必需氨基酸的氮源，加入混合氨基酸注射液中。

3、农业用途：

主要作为家禽、畜禽特别是宠物等食用的饲料增加氨基酸的添加剂与引诱剂。用作水解蛋白添加剂，作为水解蛋白的增效剂；在农药生产上用于合成拟除虫菊酯杀虫剂的中间体甘氨酸乙酯盐酸盐，也可合成杀菌剂异菌脲和除草剂固体草甘膦。

4、工业用途：

用于制药工业、生化试验及有机合成；用作头孢菌素的原料，甲砜霉素中间体，合成咪唑乙酸中间体等。

5、试剂用途：

用于多肽合成，用作氨基酸保护单体；用于组织培养基的制备，铜、金和银的检验；因甘氨酸为具有氨基和羧基的两性离子，故有很强的缓冲性，常用作配制缓冲液。

扩展资料：

固态的甘氨酸为白色单斜晶系或六方晶系的晶体或白色结晶粉末,无臭,无毒；在水中易溶，在乙醇或乙醚中几乎不溶。沸点：233℃ ，熔点：240 ℃，用于制药工业、生化试验及有机合成，是氨基酸系列中结构最为简单。

甘氨酸是人体非必需的一种氨基酸，在分子中同时具有酸性和碱性官能团，在水中可电离，具有很强的亲水性，但属于非极性氨基酸，溶于极性溶剂，而难溶于非极性溶剂，而且具有较高的沸点和熔点，通过水溶液酸碱性的调节可以使甘氨酸呈现不同的分子形态。

参考资料来源：百度百科-甘氨酸

固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子，例如锌。铜，镍，铁等形成复合物。因此，该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以，结合的强度是和缓冲液的PH和金属离子决定的。

金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料，借助醚长生7个原子的空间。

全部容量：24-30um的含有zn的干胶

柱料结构：6%的高铰链的琼脂糖

柱料大小：45-165um

平均微粒：90um

直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小时可达700厘米

最大压强：0.3MPa

PH变化：长期3-13

短期2-14

化学稳定：通用含水缓冲液

0.01M盐酸，1.0M NAOH, 20%乙醇（保存7天）

物理性质：可以忽略在PH或者离子变化下的体积变化

耐热性能：121度下0.1M乙酸钠作用半小时

金属螯和柱料保存于事先填充于20%乙醇。所以要搅拌驱除20%乙醇溶液。换成去离子水。比例是25%去离子水和75%处理胶。

处理金属螯和柱料：

1 平衡所有用到的材料于室温。

2 搅拌金属螯和柱料

3 倒水进柱子，驱除气体。用无离子水液封几厘米。

4 将金属螯和柱料连续倒进柱子，用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形成。

5 然后立即用无离子水液封，装上柱盖，连接上泵。

6 打开柱子底部的开关，然后调节泵的流速。通常是不超过0.3MPa的。

7 经过一个稳定的柱床填鸭后，维持填压速度为3个柱床。

使用adaptor

1 经过上溯填鸭后，关闭柱床下面开关，移开上面的薄膜，小心的加上去离子水进行液封。

2 一定角度插入adaptor，确保没有气泡。

3 确保所有的连接都没有问题，柱子/泵/样品接受器

4 倾斜插入活塞确保没有气泡和管道充满液体。利用活泵正反向的流动确保没有气泡。

5 固定adaptor，打开柱子开关，开始缓冲液的流动。先以填鸭的速度直到柱床稳定后。

固定金属离子：

金属螯和柱料通过水来螯和金属的，避免发生沉淀在胶上。

1 确保柱子已经平衡好。如果有必要可以洗2个柱床（去离子水）

2 选择金属离子和0.1-0.3M中弱性酸。例如铁离子PH 3左右就好，避免形成沉淀和共沉。

3 加入一倍柱床的金属离子溶液

4 5倍柱床的去离子水洗涤

5 至少2倍柱床的平衡缓冲液

结合：

发生于PH5.5-8.5之间.最强反映发生于最后

初始缓冲液的选择决定于金属离子和样品的结合性质。乙酸钠或者磷酸钠是比较好的缓冲液中不能使用EDTA或者柠檬酸盐

最通用缓冲液：

0.01-0.2M磷酸钠

0.05M乙酸钠

强烈推荐加入0.15-0.5M NaCl用于防止离子交换。

通常如果不知道一个蛋白的结合能力，最好的就是使用锌离子和中性的磷酸或者乙酸盐，同时含有0.15-0.5M NaCl

去垢剂不会影响蛋白质的结合能力

金属离子的取代意味着蛋白发生了结合。这种现象可以通过颜色来决定

洗脱蛋白：（3种方法）

1 降低PH(一步或者分步)，大部分蛋白溶解于PH4-6最终3-4是可容的。可选择柠檬酸盐，磷酸或者乙酸盐。

2 逐步提高咪唑的浓度（0-0.5M），梯度变化最好是在初始缓冲液的PH范围。

3 加入EDTA或者EGTA可洗脱蛋白质。但是不是通用的。

利用离心或者重力作用纯化组氨酸位点蛋白

通过上镍进行选择性结合含有组氨酸位点蛋白，然后利用含有咪唑的缓冲液洗脱蛋白。

以下的实验是为了最大化将组氨酸位点蛋白结合到金属螯和柱料，然后确保能够洗脱下来。当结合和洗脱的条件尚未明了时，这些方法也是很好用的。

为了获得高纯度的蛋白，必须摸索咪唑的缓冲液在样品上柱和洗脱时的浓度。通常使用10mM-500mM范围的咪唑的缓冲液进行剃度洗脱，然后通过收集和SDS-PAGE 蛋白电泳确定洗脱浓度。

为了纯化不可容的含有his位点的蛋白质，（包含体），可以在变性条件下进行。利用8M尿素或者6M盐酸呱进行溶解蛋白。

样品处理：

样品要经可能溶解，避免出现堵塞现象，所以可以利用0.45uM虑膜过滤杂志

如果样品时溶解于20mM磷酸缓冲液中（含有0.5M Nacl,PH7.4），必须调整PH到7－8。

上柱前准备：

洗柱料：

1 亲柔震动胶瓶充旋胶料

2 利用吸管吸出足量柱料用以纯化目的。每毫升柱料可以吸纳5毫克蛋白

3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

4 小心去除上清

5 加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。

6 再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

7 再次小心去除上清

挂镍：

1 加入0.5倍柱床体积0.1M硫酸镍，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3 小心去除上清

洗柱：

1加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料，来回倒置5分钟

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3小心去除上清

4 再洗两次柱料（一共3×5柱床去离子水）

5 最后用一倍体积起始缓冲液充旋柱料（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）

利用离心来纯化：

上样：

1 在起始缓冲液中加入样品，然后使整体胶浓度达到50％

2 亲柔搅拌，室温离心5－30分钟，结合能力取决于蛋白和样品浓度。

3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

4 取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳

洗胶：

1 加入5倍体积起始缓冲液，搅拌5分钟

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳

4再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白

电泳

洗柱：

1 加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟

2再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN

利用流速和重力纯化：

1 在柱子底部加上滤器

2 加水排气

3 加柱帽，去除残余水。推荐是最多2 Ml柱料就可以了

样品结合：

1 倒胶进入柱子

2 小心上样，用波棒室温搅拌5－30分钟

3 打开柱帽，收集流出峰用于分析

洗胶：

1 加入5倍体积起始缓冲液，收集流出液用于SDS-PAGE 蛋白电泳

2再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白

电泳

洗柱：

1 加上柱帽，加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟。打开柱帽，收集流出峰

2再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN

注意：0.5M咪唑的280nM吸光值＝0.5

常见问题：

1 样品太粘稠

答：核酸存在影响，可以继续超声，加入RNA酶至10ug/ml DNA酶至5ug/ml。然后冰浴1

0－15分钟。或者也可以用注射器来回充旋。这样可以防止堵塞柱料。

2 平衡时样品洗脱了下来

答: 检查PH和缓冲液成分，如果缓冲液成分不正确，EDTA加入，强还原剂加入，都会导致这个现象出现。

加大胶的量，如果胶料承载能力过头，也绘出出现这现象。

准备新鲜的柱料，如果柱料断裂，也挂不上蛋白。

3 在洗脱液中不含有组氨酸蛋白

答：如果SDS-PAGE 蛋白电泳已经发现蛋白存在于超声液中

超声可能不完全。可以用显微镜观察超声情况。AD260/280比值。（通常是超声前将10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCL，PH6-8），避免发泡以降解融合蛋白。

蛋白可能是是包含体，可以使用4－6M盐酸呱或者4－8 M尿素溶解。

尿素溶解的可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，盐酸呱溶解的不可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，必须换缓冲液。

洗脱液浓度太稀，可以加大咪唑浓度或者降低PH 来决定最佳洗脱条件如果在平衡前的洗柱发现了目的蛋白，证明起始缓冲液中的咪唑浓度太高，可适当降低。

4 考马氏亮蓝或者银染发现多条带

答：加入蛋白激酶抑制剂。可能是蛋白降解。用凝血酶切割前必须去除丝氨酸蛋白酶抑制剂采用梯度咪唑来洗脱蛋白。在平衡洗脱液中加入10mM咪唑可以洗脱大量杂质而不会洗脱融合蛋白。低于500mM咪唑可以洗掉绝大部分杂质。

在洗脱步奏往起始缓冲液加入去垢剂（2％TRITON x-100或者2％Tween20）50% 葡萄糖，20mM B-巯基乙醇。记得杂质通常没有特意结合能力，可以改变缓冲液来洗脱。

如果杂志和目的蛋白有相同结合能力，那就不能用于纯化。因此可以使用别的纯化系统，例如含有GST尾巴就用谷胱甘肽琼脂糖4B

柱料再生，清洁和保存

柱料再生：

1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl来洗脱镍离子。然后用3柱床的0.5M NaCl来洗干净EDTA

2如果是铁离子可以用0.05M EDTA泡过夜

3 这一步可以洗脱上面未能洗脱的残余结合蛋白

清洗柱料：

1 0.5倍柱床2M NaCl，反向洗脱10－15分钟

2 1M NaOH洗1小时去除残余蛋白

3 每一步都要用3倍柱床起始缓冲液清洗

4 4倍柱床70%乙醇洗脱强亲水蛋白和脂类蛋白。

也可以使用2倍柱床去垢剂。0.1-0.5%非离子去垢剂溶于0.1M乙酸。浸泡1－2小时。最后用5个柱床的70％乙醇去除去垢剂。

清洁：

1 尽可能去除微生物

2 0.5-1M NaOH反向流动半小时

3 再用3－5倍柱床消毒的起始缓冲液平衡

4 这个清洁步奏不一定能够提高纯化能力

保存：

长期保存于20％乙醇或者0.01M NaOH 于4度

1)乙酸的酸性促使它可以与碳酸钠、氢氧化铜、苯酚钠等物质反应.

2CH3COOH + Na2CO3 =2CH3COONa + CO2 ↑+ H2O 2CH3COOH + Cu(OH)2=Cu（CH3COO）2 + 2H2O CH3COOH + C6H5ONa =C6H5OH (苯酚）+ CH3COONa

2)自己：乙酸的晶体结构显示,分子间通过氢键结合为二聚体

3)对于许多金属,乙酸是有腐蚀性的,例如铁、镁和锌,反应生成氢气和金属乙酸盐.因为铝在空气中表面会形成氧化铝保护层,所以铝制容器能用来运输乙酸.金属的乙酸盐也可以用乙酸和相应的碱性物质反应,比如最著名的例子：小苏打与醋的反应.除了醋酸铬（II）,几乎所有的醋酸盐能溶于水.

1. 用做调味剂 、甜味剂,与 DL- 丙氨酸 、枸橼酸等配合使用于含醇饮料中；合成清酒和精良饲料时用作酸味矫正剂 、缓冲剂；在腌制咸菜 、 甜酱 、 酱油、醋和果汁时用做添加剂,以改善食品风味、味道 、保持原味 、提供甜味源等；

2. 用作鱼糜制品、花生酱等的防腐剂,能抑制枯草杆菌及大肠杆菌的繁殖；

3.利用它本身的氨基和羧基,对食盐和醋等味感起缓冲作用；

4.用作饲料添加剂中的诱食剂(引诱剂)；

5.食品酿造 、肉食加工和清凉饮料的配方及糖精钠的去苦剂；

6. 用作奶油 、干酪、人造奶油 、速食面 、小麦粉和猪油等的稳定剂；

7.用作食品加工中对维生素 C 进行稳定；

8.在味精中有 10% 的成份为甘氨酸；

9.可用作防腐剂,起到重要的防腐作用.

医药级甘氨酸

1.用作医学微生物和生物化学氨基酸代谢研究的用药；

2.用作金霉素缓冲剂\抗帕鑫森氏病药物L-多巴\维生素B6\以及苏氨酸等氨基酸的合成原料；

3. 用作氨基酸营养输液；

4. 用作头孢菌素的原料；甲砜霉素中间体；合成咪唑乙酸中间体等等；

5.用作化妆品原料.

饲料级甘氨酸

主要作为家禽、畜禽特别是宠物等食用的饲料增加氨基酸的添加剂与引诱剂.用作水解蛋白添加剂,作为水解蛋白的增效剂.

工业级甘氨酸

作农药中间体,如做为除草剂草甘磷的主要原料；电镀液添加剂；PH 调节剂

尿毒症是肾功能衰竭晚期所发生的一系列症状的总称。慢性肾功能衰竭症状主要体现为有害物质积累引起的中毒和肾脏激素减少发生的贫血合骨病。早期最常见的是恶心、呕吐食欲减退等消化道症状。进入晚期尿毒症阶段后，全身系统都会受累，出现心力衰竭、精神异常、昏迷等严重情况，危及生命。过去认为尿毒症是不治之症，自本世纪0年代之后开展了透析方法及肾移植手术，使尿毒症病人的寿命的以明显延长。

尿毒症是肾功能衰竭晚期所发生的一系列症状的总称。慢性肾功能衰竭症状主要体现为有害物质积累引起的中毒和肾脏激素减少发生的贫血合骨病。早期最常见的是恶心、呕吐食欲减退等消化道症状。进入晚期尿毒症阶段后，全身系统都会受累，出现心力衰竭、精神异常、昏迷等严重情况，危及生命。过去认为尿毒症是不治之症，自本世纪0年代之后开展了透析方法及肾移植手术，使尿毒症病人的寿命的以明显延长。

在尿毒症期，除上述水、电解质、酸碱平衡紊乱、贫血、出血倾向、高血压等进一步加重外，还可出现各器官系统功能障碍以及物质代谢障碍所引起的临床表现，兹分述如下。

（一）神经系统症状

神经系统的症状是尿毒症的主要症状。在尿毒症早期，患者往往有头昏、头痛、乏力、理解力及记忆力减退等症状。随着病情的加重可出现烦躁不安、肌肉颤动、抽搐；最后可发展到表情淡漠、嗜睡和昏迷。这些症状的发生与下列因素有关：①某些毒性物质的蓄积可能引起神经细胞变性；②电解质和酸碱平衡紊乱；③肾性高血压所致的脑血管痉挛，缺氧和毛细血管通透性增高，可引起脑神经细胞变性和脑水肿。

（二）消化系统症状

尿毒症患者消化系统的最早症状是食欲不振或消化不良；病情加重时可出现厌食，恶心、呕吐或腹泻。这些症状的发生可能与肠道内细菌的尿素酶将尿素分解为氨，氨剌激胃肠道粘膜引起炎症和多发性表浅性小溃疡等有关。患者常并发胃肠道出血。此外恶心、呕吐也与中枢神经系统的功能障碍有关。

（三）心血管系统症状

慢性肾功能衰竭者由于肾性高血压、酸中毒、高钾血症、钠水潴留、贫血及毒性物质等的作用，可发生心力衰竭，心律失常和心肌受损等。由于尿素（可能还有尿酸）的剌激作用，还可发生无菌性心包炎，患者有心前区疼痛；体检时闻及心包摩擦音。严重时心包腔中有纤维素及血性渗出物出现。

（四）呼吸系统症状

酸中毒时患者呼吸慢而深，严重时可见到酸中毒的特殊性Kussmaul呼吸。患者呼出的气休有尿味，这是由于细菌分解睡液中的尿素形成氨的缘故。严重患者可出现肺水肿，纤维素性胸膜炎或肺钙化等病变，肺水肿与心力衰竭、低蛋白血症、钠水潴留等因素的作用有关。纤维素性胸膜炎是尿素剌激引起的炎症；肺钙化是磷酸钙在肺组织内沉积所致。

（五）皮肤症状

皮肤瘙痒是尿毒症患者常见的症状，可能是毒性产物对皮肤感受器的剌激引起的；有人则认为与继发性甲状旁腺功能亢进有关，因为切除甲状旁腺后，能立即解除这一痛苦的症状。此外，患者皮肤干燥、脱屑并呈黄褐色。皮肤颜色的改变，以前认为是尿色素增多之故，但用吸收分光光度计检查，证明皮肤色素主要为黑色素。在皮肤暴露部位，轻微挫伤即可引起皮肤淤斑。由于汗液中含有较高浓度的尿素，因此在汗腺开口处有尿素的白色结晶，称为尿素霜。

（六）物质代谢障碍

1．糖耐量降低 尿毒症患者对糖的耐量降低，其葡萄糖耐量曲线与轻度糖尿病患者相似，但这种变化对外源性胰岛素不敏感。造成糖耐量降低的机制可能为：①胰岛素分泌减少；②尿毒症时由于生长激素的分泌基础水平增高，故拮抗胰岛素的作用加强；③胰岛素与靶细胞受体结合障碍，使胰岛素的作用有所减弱；④有关肝糖原合成酶的活性降低而致肝糖原合成障碍。目前认为引起上述变化的主要原因可能是尿素、肌酐和中分子量毒物等的毒性作用。

2．负氮平衡 负氮平衡可造成病人消瘦、恶病质和低白蛋白血症。低白蛋白血症是引起肾性水肿的重要原因之一。引起负氮平衡的因素有：①病人摄入蛋白质受限制或因厌食、恶心和呕吐而致蛋白质摄入减少；②某些物质如甲基胍可使组织蛋白分解代谢加强；③合并感染时可导致蛋白分解增强；④因出血而致蛋白丢失；⑤随尿丢失一定量的蛋白质等。

尿毒症时大量尿素可由血液渗入肠腔。肠腔细菌可将尿素分解而释放出氨，氨被血液运送到肝脏后，可再合成尿素，也可合成非必需氨基酸，后者对机体是有利的。因此有人认为，尿毒症病人蛋白质的摄入量可低于正常人，甚至低于每天20g即可维持氮平衡，但必须给予营养价值较高的蛋白质，即含必需氨基酸丰富的营养物质。近年来有人认为。

为了维持尿毒症病人的氮平衡，蛋白质摄入量应与正常人没有明显差异；而且认为，单纯为了追求血液尿素氮的降低而过分限制蛋白质的摄入量，可使自身蛋白质消耗过多，因而对病人有害而无益。 3．高脂血症 尿毒症病人主要由于肝脏合成甘油三酯所需的脂蛋白（前β-脂蛋白）增多，故甘油三酯的生成增加；同时还可能因脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase）活性降低而引起甘油三酯的清除率降低，故易形成高甘油三酯血症。此种改变可能与甲基胍的蓄积有关。

尿毒症病因和发病机制

尿毒症时含氮代谢产物和其他毒性物质不能排出乃在体内蓄积，除造成水、电解质和酸碱平衡紊乱外，并可引起多个器官和系统的病变。

1．消化系统 体内堆积的尿素排入消化道，在肠内经细菌尿素酶的作用形成氨，可刺激胃肠粘膜引起纤维素性炎症，甚至形成溃疡和出血。病变范围广，从口腔、食管直至直肠都可受累。以尿毒性食管炎、胃炎和结肠炎较为常见。病人常有恶心、呕吐、腹痛、腹泻、便血等症状。

2．心、肺病变 水钠潴留、肾缺血、肾素分泌增加引起的高血压长期作用于心可引起心力衰竭。血液内尿素过高渗入心包和胸膜可引起纤维素性心包炎和纤维素性胸膜炎，听诊时可听到心包和胸膜摩擦音。心力衰竭可引起肺水肿。血尿素从呼吸道排出可引起呼吸道炎症，有时沿肺泡壁可有透明膜形成；肺毛细血管通透性增加，肺泡腔内有大量纤维蛋白及单核细胞渗出，很少中性粒细胞，称为尿毒症性肺炎。

3．造血系统 主要改变为贫血和出血。贫血原因：①严重肾组织损害时促红细胞生成素产生不足。②体内蓄积的代谢产物，有些如酚及其衍生物可抑制骨髓的造血功能。另一些毒物如胍及其衍生物可缩短红细胞生存期，加速红细胞破坏并可引起溶血。③转铁蛋白从尿中丧失过多，造成体内铁的运输障碍。

尿毒症病人常有出血倾向，表现为牙龈出血、鼻衄、消化道出血等。出血的原因：①毒性物质抑制骨髓，血小板生成减少。②有些病人血小板数量并不减少,却有出血倾向。这可能是由于血液内胍类毒性物质造成血小板功能障碍,使血小板凝聚力减弱和释放血小板第3因子的作用降低所致。

4．骨骼系统 尿素症时常有低血钙。这可能由于：①肾排泄磷酸盐功能下降，故血中磷酸盐浓度升高，钙浓度下降。②体内蓄积的磷酸盐在肠内与食入的钙结合成不溶解的磷酸钙，使钙吸收减少，排出增多。③1,25-二羟胆钙化醇是维生素D在肠道内促进钙吸收的活动形式，在肾内合成。慢性肾疾病时，1,25-二羟胆钙化醇合成发生障碍，致小肠的钙吸收不良，引起低血钙。

长期尿毒症时血钙减少可引起甲状旁腺功能亢进，因而引起骨组织普遍脱钙，称为肾性骨营养不良（renal osteodystrophy），其形态与骨软化（osteomalacia）和囊状纤维性骨炎（osteitis fibrosa cystica）相似。临床上使用1,25-二羟胆钙化醇及其类似药物治疗这些与肾疾病有关的钙代谢障碍效果很好。

5．皮肤 尿毒症病人皮肤常呈灰黄色并有瘙痒，皮肤的颜色与贫血和尿色素（urochrome）在皮肤内积聚有关。体内蓄积的尿素可通过汗腺排出，在皮肤表面形成结晶状粉末称为尿素霜，常见于面部、鼻、颊等处。瘙痒的原因不清楚，可能与尿素对神经末梢的刺激有关。

6．神经系统 脑组织中大量尿素沉积，渗透压增高，可引起脑水肿，有时有点状出血和小软化灶。毒性物质并可损伤神细胞引起神经细胞变性，血管通透性增高加重脑水肿。尿毒症晚期病人可出现昏睡、抽搐、木僵、昏迷等症状。

有些病人可有周围神经的症状和感觉异常、四肢麻木、烧灼感等。其发生原因还不清楚，可能与甲基胍的含量增高有关。

引起尿毒症的毒性物质尚未完全明了。虽然血尿素含量多少可反映尿毒症的严重程度，但除尿素外，其他代谢产物和毒性物质如胍也有重要作用。尿毒症的发生不是某一种毒素单独作用引起，而是多种因素综合作用的结果。

尿毒症治疗原则

（一）积极防治原发疾病以防止肾实质的继续破坏。

（二）慢性肾功能衰竭患者的肾功能主要依靠残存的完整肾单位来维持。任何加重肾脏负荷的因素，均可加重肾功能衰竭；因此应积极消除诱发肾功能恶化的有害因素，例如控制感染，减轻高血压等。此外，还应矫正水、电解质紊乱，纠正酸中毒等以维持内环境的稳定。

（三）肾功能衰竭患者出现尿毒症时，应采取抢救措施以维持内环境的稳定。常用的措施有腹膜透析、血液透析（人工肾）等。必要和可能时也可进行同种肾移值以取代患病的肾脏。

（四）中医药、西医各有所长，但西医治疗多种肾炎、尿毒症、肾衰、多囊肾、肾积水等肾脏病没有特别好的方法， 西医激素类等药物治疗，治疗效果有限、副作用很大但不甚理想，病情反复，只能指标不能治本，患者痛苦，长期会产生诸多并发症；透析的方法治疗尿毒症、肾衰等病症，长期导致肾脏等脏器会逐渐萎缩、衰竭；最终要移植肾脏，而存活期也是有限的，另外换肾有排异反应等因素影响。

患者可采用专家组的纯中药金芪肾康方剂治疗，采用中医药治疗，疗效很好且治疗效果稳定、理想且无任何副作用，治愈后不易复发 ；专家组研究的金芪肾康方剂突破了西医采用激素治疗的传统疗法，开创了标本兼治的新路子。

中医药、西医各有所长，但西医治疗多种肾炎、肾衰、尿毒症等肾病没有特别好的方法，西医激素类等药物治疗，治疗效果有限、副作用较大，但不甚理想而费用不低，病情反复，只能治标不能治本，患者痛苦，长期会产生诸多并发症；透析的方法治疗尿毒症、肾衰等病症，长期导致肾脏等脏器会逐渐萎缩、衰竭；最终要移植肾脏，而存活期也是有限的。

说到肾病，许多人也许不以为然，殊不知一旦演变成肾功能衰竭--尿毒症，它对人类的危害程度就不亚于某些癌症。肾损害可以发生于任何年龄价段，常见的有急性肾炎、慢性肾炎、尿路感染等。

面对肾病的恶魔，时到今日，国内外对于肾病的认识和医疗尚缺乏理想的方法，如透析只能维持生命，而且产生依赖性和透析综合症，肾移植成功率低，而排斥现象一时还难以解决，激素疗法副作用明显，且易复发加之透析和肾移植的费用昂贵往往使众多的患者难以承受……

供患者参考：激素类药物的副作用：1、身体发胖；2、可以引起骨质疏松，引发股骨头坏死；3、身体的抵抗力下降，血糖升高、皮质类固醇征、消化道溃疡、电解质紊乱等等。

激素和免疫抑制剂都对性功能有一定的影响。长时间、大剂量使用强的松等皮质激素会加重性功能的障碍程度。几乎所有免疫制剂都能使睾丸萎缩、卵巢损害，导致生精功能降低或消失、性欲消失、阳痿。

回答者：小冯杰 - 同进士出身 六级 3-18 21:10

--------------------------------------------------------------------------------

您觉得最佳答案好不好？ 目前有 0 个人评价

50% （0）

50% （0）

其他回答 共 3 条

尿毒症

郭卜乐 CPO生理健康网 http://www.zgxl.net

参考资料：

临床医生对尿毒症容易发生的误诊有哪些?

慢性肾功能衰竭，特别是进入尿毒症阶段时，不仅水电解质酸碱平衡全部紊乱，并且病变累及全身各系统，造成很复杂的临床表现。如果临床医生对慢性肾功能衰竭不熟悉，容易造成漏诊和误诊，具体如下：①消化系统：恶心呕吐、呃逆、吐血或便血、厌食、腹泻易误诊为肝炎、痢疾、胃炎、消化性溃疡或出血、胃肠炎。②神经肌肉系统：嗜睡、昏睡、昏迷易误诊为肝昏迷；感觉异常易误诊为末稍神经炎；失眠、忧郁、注意力不集中易误诊为神经官能症；幻觉、精神病易误诊为精神病；癫痫发作易误诊为原发性癫痫。③心血管呼吸系统：高血压易误诊为原发性高血压病；左心衰竭易误诊为冠心病、高血压性心脏病；呼吸困难易误诊为肺心病；酸中毒性呼吸易误诊为慢性支气管炎合并感染急性发作；尿毒症肺易误诊为支气管扩张、支气管哮喘。④血液系统：贫血易误诊为缺铁性贫血、再生障碍性贫血；鼻衄易误诊为流行性出血热；皮肤紫癜易误诊为血小板减少性紫癜、过敏性紫瘢。⑤骨骼系统：骨软化、骨硬化、纤维性骨炎易误诊为关节炎；肾性佝偻病易误诊为营养不良性佝偻病。⑥皮肤瘙痒：易误诊为神经性瘙痒症。⑦泌尿系统：多尿易误诊为糖尿病；夜尿多易误诊为神经性多尿。⑧合并感染易误诊为一般性细菌感染。

如何治疗尿毒症出血?

尿毒症出血，特别是颅内及消化道出血，应及时输新鲜血液及富含血小板的新鲜血浆，这样可以有效地补充血小板第Ⅲ因子和凝血因子。应早期进行血透或腹透，使尿毒症毒素降低，减少出血倾向，使血小板功能恢复正常。

(1)尿毒症时禁用或慎用可引起出血的药物：

①阿斯匹林、保泰松、消炎痛、冬眠灵、安定、潘生丁、前列腺素E1等。

②纤维蛋白溶解酶抑制剂，如6-氨基己酸(EACA)、对羟基苄胺(PAMBA)及止血环酸(AMCA)。

③磺胺类和广谱抗生素，这类药除损害肾功能外，可造成肠道灭菌综合征，干扰维生素K的吸收及合成，可通过注射途径补充维生素K。

④中分子右旋糖酐(分子量7万)，使血小板的粘附性和聚集性进一步降低。

(2)肝素治疗：尿毒症时若FDP阳性，为应用肝素的指征。肝素既有抗凝而减少纤维蛋白沉着作用，也有抗补体而抑制免疫功能作用。剂量不宜过大，每日50～100mg，静脉滴注或深部肌肉注射。

(3)输注红细胞和rHuEpo：输注红细胞对纠正贫血和延长出血时间以及止血是有效的。应用rHuEpo治疗，能缩短出血时间，改善血小板粘附性，预防和纠正贫血。

(4)冷沉淀物和1-脱氨-8-D精氨酸加压素乙酸盐(dMAVP)：冷沉淀物是一种富含因子Ⅷ、纤维蛋白原、纤维连接蛋白(fidronction)的血浆衍化物，能迅速纠正尿毒症性出血。其副作用可致输血性肝炎。也有用血管加压素衍化物dDAVP替代血衍化物，静脉输注0.3μg/kg 能暂时纠正出血时间，无副作用。

(5)其他：①出血时用安特诺新10mg，1日2次，肌注或静脉滴注。②上消化道出血应用甲氰咪胍0.2g，6～8小时肌注或静脉注射。但该药有加重CRF的危险。③尿毒症有微血管出血或需要手术预防出血倾向，可用结合型雌激素肌注或静注10mg或口服2.5mg，每日2～4次，2～5天见效。

尿毒症性脑病怎么办?

透析疗法是治疗此种脑病的主要措施。多数病人长期血液透析后，症状可改善，轻者能完全恢复。但对昏迷病人不宜作透析治疗，以防脑水肿及心血管机能不全，必须慎重。

有谵妄或兴奋躁动者，可静脉注射安定10～20mg，也可用副醛、氯丙嗪或奋乃静。癫痫发作者，在血压及心电监护下，以每分钟不超过50mg的速度静脉注射苯妥英钠1000mg或缓慢静滴安定100～150mg /24h。必要时加用利多卡因，先静脉内一次给药1mg/kg，若无效，在2分钟内再给0.5mg/kg ，抽搐停止后，予每分钟30μg/kg，作为维持量。有水中毒者应予脱水或透析，神经肌肉兴奋性高者可静脉注射10%葡萄糖酸钙20mL，若有高血压脑病，需按高血压脑病治疗。

如何控制尿毒症的消化道症状?

患者轻度恶心、呕吐可通过饮食疗法减轻，严重者可用胃复安5～10mg口服，每日3次或肌肉注射；或氯丙嗪12.5～25mg，每日3次，口服或肌肉注射；也可用小半夏汤(半夏、生姜)随证加减； gsapride可增加胃、十二指肠的蠕动，5～10mg，每日3次，但使用前必须排除梗阻性原因。透析疗法对于改善消化道症状有确实疗效。

慢性肾衰溃疡病治疗与一般溃疡病相同。应用氢氧化铝凝胶口服，保护溃疡创面。H2受体阻滞剂，如甲氰咪胍和雷尼替丁可抑制胃酸分泌。但此类药物主要经肾排出，肾衰患者应按肌酐清除率减量使用，一般用常人的半量。

消化道出血的治疗，应避免使用可致溃疡的药物，内窥镜局部止血和应用抗酸剂。此外，尚可用血管加压素、雌激素和雌-孕激素复合物治疗。

如何治疗尿毒症肺?

对于尿毒症肺，关键是治疗原发病，改善肾功能，降低BUN和Scr及体内液体负荷。对肺本身的治疗应注意以下几点：①肺瘀血与间质肺水肿跟肺静脉压成正相关，故应尽量降低肺静脉压。可试用氨茶碱、硝酸甘油、酚妥拉明。肺毛细血管的免疫损害亦占有重要地位，有人主张用左旋咪唑和辅酶Q10。②对肺泡性肺水肿期病人以透析为主，亦可用强心利尿剂治疗，解除左心衰竭引起的肺水肿。③不宜使用肾上腺皮质激素治疗尿毒症性肺间质纤维化。④病人若出现呼吸规律和深度异常改变，多为代谢性酸中毒，应积极对症治疗。

尿毒症性皮肤瘙痒怎么办?

皮肤瘙痒可用炉甘石洗剂或止痒酒精外擦，有报道用紫外线照射亦有效。抗过敏药物疗效不确切，透析治疗部分病人可缓解，静脉注射利多卡因可减轻瘙痒。口服活性炭，可去除多种毒性物质，数周后可减轻症状，用量为6g/d。对于各种治疗措施难于缓解的瘙痒病人应考虑甲状旁腺完全切除。如仍不缓解者，肾移植可望获得满意疗效。

如何使用包醛氧化淀粉?

包醛氧化淀粉是一种常用的吸附剂，服用后能从肠道内结合尿素或胺类物质，由粪便排出，降低血氨和BUN而具有治疗作用。包醛氧化淀粉在胃肠道内不被吸收入血，对人体无毒，可长期服用，部分患者可有头晕、轻度腹泻等症状。但因包醛氧化淀粉吸附能力有限，难以缓解尿毒症症状和维持病人生命，且只能降低BUN，不能降低Scr，因此该药仅作为一种辅助药物配合治疗。

尿毒症

肾功能严重障碍，代谢废物不能排出体外，以致大量含氮代谢产物及其他毒性物质在体内蓄积，水电解质代谢及酸碱平衡紊乱，机体内环境的相对稳定被破坏，由此所引起的自身中毒和产生的综合病征称为尿毒症（uremia）。常表现为氮质血症，血尿素氮和肌酐显著升高，并伴有胃肠、神经肌肉和心血管系统的症状，如恶心、呕吐、腹泻、头痛、无力、淡漠、失眠、抽搐、嗜睡以至昏迷等症象。

引起尿毒症的原因很多。肾本身的疾病，如慢性肾小球肾炎，肾盂肾炎等；全身性疾病引起的肾疾病如高血压性肾硬化，系统性红斑狼疮等；以及尿路阻塞等引起肾实质严重损伤，大量肾单位破坏，造成严重肾功能障碍时都可出现尿毒症。

病因和发病机制

尿毒症时含氮代谢产物和其他毒性物质不能排出乃在体内蓄积，除造成水、电解质和酸碱平衡紊乱外，并可引起多个器官和系统的病变。

1．消化系统 体内堆积的尿素排入消化道，在肠内经细菌尿素酶的作用形成氨，可刺激胃肠粘膜引起纤维素性炎症，甚至形成溃疡和出血。病变范围广，从口腔、食管直至直肠都可受累。以尿毒性食管炎、胃炎和结肠炎较为常见。病人常有恶心、呕吐、腹痛、腹泻、便血等症状。

2．心、肺病变 水钠潴留、肾缺血、肾素分泌增加引起的高血压长期作用于心可引起心力衰竭。血液内尿素过高渗入心包和胸膜可引起纤维素性心包炎和纤维素性胸膜炎，听诊时可听到心包和胸膜摩擦音。心力衰竭可引起肺水肿。血尿素从呼吸道排出可引起呼吸道炎症，有时沿肺泡壁可有透明膜形成；肺毛细血管通透性增加，肺泡腔内有大量纤维蛋白及单核细胞渗出，很少中性粒细胞，称为尿毒症性肺炎。

3．造血系统 主要改变为贫血和出血。贫血原因：①严重肾组织损害时促红细胞生成素产生不足。②体内蓄积的代谢产物，有些如酚及其衍生物可抑制骨髓的造血功能。另一些毒物如胍及其衍生物可缩短红细胞生存期，加速红细胞破坏并可引起溶血。③转铁蛋白从尿中丧失过多，造成体内铁的运输障碍。

尿毒症病人常有出血倾向，表现为牙龈出血、鼻衄、消化道出血等。出血的原因：①毒性物质抑制骨髓，血小板生成减少。②有些病人血小板数量并不减少，却有出血倾向。这可能是由于血液内胍类毒性物质造成血小板功能障碍，使血小板凝聚力减弱和释放血小板第3因子的作用降低所致。

4．骨骼系统 尿素症时常有低血钙。这可能由于：①肾排泄磷酸盐功能下降，故血中磷酸盐浓度升高，钙浓度下降。②体内蓄积的磷酸盐在肠内与食入的钙结合成不溶解的磷酸钙，使钙吸收减少，排出增多。③1,25-二羟胆钙化醇是维生素D在肠道内促进钙吸收的活动形式，在肾内合成。慢性肾疾病时，1,25-二羟胆钙化醇合成发生障碍，致小肠的钙吸收不良，引起低血钙。

长期尿毒症时血钙减少可引起甲状旁腺功能亢进，因而引起骨组织普遍脱钙，称为肾性骨营养不良（renal osteodystrophy），其形态与骨软化（osteomalacia）和囊状纤维性骨炎（osteitis fibrosa cystica）相似。临床上使用1,25-二羟胆钙化醇及其类似药物治疗这些与肾疾病有关的钙代谢障碍效果很好。

5．皮肤 尿毒症病人皮肤常呈灰黄色并有瘙痒，皮肤的颜色与贫血和尿色素（urochrome）在皮肤内积聚有关。体内蓄积的尿素可通过汗腺排出，在皮肤表面形成结晶状粉末称为尿素霜，常见于面部、鼻、颊等处。瘙痒的原因不清楚，可能与尿素对神经末梢的刺激有关。

6．神经系统 脑组织中大量尿素沉积，渗透压增高，可引起脑水肿，有时有点状出血和小软化灶。毒性物质并可损伤神细胞引起神经细胞变性，血管通透性增高加重脑水肿。尿毒症晚期病人可出现昏睡、抽搐、木僵、昏迷等症状。

有些病人可有周围神经的症状和感觉异常、四肢麻木、烧灼感等。其发生原因还不清楚，可能与甲基胍的含量增高有关。

引起尿毒症的毒性物质尚未完全明了。虽然血尿素含量多少可反映尿毒症的严重程度，但除尿素外，其他代谢产物和毒性物质如胍也有重要作用。尿毒症的发生不是某一种毒素单独作用引起，而是多种因素综合作用的结果。

镍柱分离纯化

固定金属离子亲和柱主要用于金属螯化离子。位于许多蛋白中的组氨酸残基将会和许多金属离子，例如锌。铜，镍，铁等形成复合物。因此，该柱料能选择性螯合一些具有组氨酸残基的蛋白质。但是半胱氨酸和咯氨酸残基也能和固定化金属螯和。但是亲和力比组氨酸要弱。所以，结合的强度是和缓冲液的PH和金属离子决定的。

金属螯和柱料主要是由亚氨基的乙酰乙酸成分耦联琼脂糖柱料，借助醚长生7个原子的空间。

全部容量：24-30um的含有zn的干胶

柱料结构：6%的高铰链的琼脂糖

柱料大小：45-165um

平均微粒：90um

直流速度：25度/0.1MPa/30倍柱床/5厘米高度/每小时可达700厘米

最大压强：0.3MPa

PH变化：长期3-13

短期2-14

化学稳定：通用含水缓冲液

0.01M盐酸，1.0M NAOH, 20%乙醇（保存7天）

物理性质：可以忽略在PH或者离子变化下的体积变化

耐热性能：121度下0.1M乙酸钠作用半小时

金属螯和柱料保存于事先填充于20%乙醇。所以要搅拌驱除20%乙醇溶液。换成去离子水。比例是25%去离子水和75%处理胶。

处理金属螯和柱料：

1 平衡所有用到的材料于室温。

2 搅拌金属螯和柱料

3 倒水进柱子，驱除气体。用无离子水液封几厘米。

4 将金属螯和柱料连续倒进柱子，用玻璃棒支撑柱壁防止气泡形成。

5 然后立即用无离子水液封，装上柱盖，连接上泵。

6 打开柱子底部的开关，然后调节泵的流速。通常是不超过0.3MPa的。

7 经过一个稳定的柱床填鸭后，维持填压速度为3个柱床。

使用adaptor

1 经过上溯填鸭后，关闭柱床下面开关，移开上面的薄膜，小心的加上去离子水进行液封。

2 一定角度插入adaptor，确保没有气泡。

3 确保所有的连接都没有问题，柱子/泵/样品接受器

4 倾斜插入活塞确保没有气泡和管道充满液体。利用活泵正反向的流动确保没有气泡。

5 固定adaptor，打开柱子开关，开始缓冲液的流动。先以填鸭的速度直到柱床稳定后。

固定金属离子：

金属螯和柱料通过水来螯和金属的，避免发生沉淀在胶上。

1 确保柱子已经平衡好。如果有必要可以洗2个柱床（去离子水）

2 选择金属离子和0.1-0.3M中弱性酸。例如铁离子PH 3左右就好，避免形成沉淀和共沉。

3 加入一倍柱床的金属离子溶液

4 5倍柱床的去离子水洗涤

5 至少2倍柱床的平衡缓冲液

结合：

发生于PH5.5-8.5之间.最强反映发生于最后

初始缓冲液的选择决定于金属离子和样品的结合性质。乙酸钠或者磷酸钠是比较好的缓冲液中不能使用EDTA或者柠檬酸盐

最通用缓冲液：

0.01-0.2M磷酸钠

0.05M乙酸钠

强烈推荐加入0.15-0.5M NaCl用于防止离子交换。

通常如果不知道一个蛋白的结合能力，最好的就是使用锌离子和中性的磷酸或者乙酸盐，同时含有0.15-0.5M NaCl

去垢剂不会影响蛋白质的结合能力

金属离子的取代意味着蛋白发生了结合。这种现象可以通过颜色来决定

洗脱蛋白：（3种方法）

1 降低PH(一步或者分步)，大部分蛋白溶解于PH4-6最终3-4是可容的。可选择柠檬酸盐，磷酸或者乙酸盐。

2 逐步提高咪唑的浓度（0-0.5M），梯度变化最好是在初始缓冲液的PH范围。

3 加入EDTA或者EGTA可洗脱蛋白质。但是不是通用的。

利用离心或者重力作用纯化组氨酸位点蛋白

通过上镍进行选择性结合含有组氨酸位点蛋白，然后利用含有咪唑的缓冲液洗脱蛋白。

以下的实验是为了最大化将组氨酸位点蛋白结合到金属螯和柱料，然后确保能够洗脱下来。当结合和洗脱的条件尚未明了时，这些方法也是很好用的。

为了获得高纯度的蛋白，必须摸索咪唑的缓冲液在样品上柱和洗脱时的浓度。通常使用10mM-500mM范围的咪唑的缓冲液进行剃度洗脱，然后通过收集和SDS-PAGE 蛋白电泳确定洗脱浓度。

为了纯化不可容的含有his位点的蛋白质，（包含体），可以在变性条件下进行。利用8M尿素或者6M盐酸呱进行溶解蛋白。

样品处理：

样品要经可能溶解，避免出现堵塞现象，所以可以利用0.45uM虑膜过滤杂志

如果样品时溶解于20mM磷酸缓冲液中（含有0.5M Nacl,PH7.4），必须调整PH到7－8。

上柱前准备：

洗柱料：

1 亲柔震动胶瓶充旋胶料

2 利用吸管吸出足量柱料用以纯化目的。每毫升柱料可以吸纳5毫克蛋白

3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

4 小心去除上清

5 加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。

6 再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

7 再次小心去除上清

挂镍：

1 加入0.5倍柱床体积0.1M硫酸镍，充分振荡柱料。可以倒置来回5分钟，不要机械搅拌。

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3 小心去除上清

洗柱：

1加入5倍体积去离子水，充分振荡柱料，来回倒置5分钟

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3小心去除上清

4 再洗两次柱料（一共3×5柱床去离子水）

5 最后用一倍体积起始缓冲液充旋柱料（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）

利用离心来纯化：

上样：

1 在起始缓冲液中加入样品，然后使整体胶浓度达到50％

2 亲柔搅拌，室温离心5－30分钟，结合能力取决于蛋白和样品浓度。

3 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

4 取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳

洗胶：

1 加入5倍体积起始缓冲液，搅拌5分钟

2 500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3取出上清。部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳

4再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白

电泳

洗柱：

1 加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟

2再次500g 离心2－5分钟，沉淀柱料。

3再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN

利用流速和重力纯化：

1 在柱子底部加上滤器

2 加水排气

3 加柱帽，去除残余水。推荐是最多2 Ml柱料就可以了

样品结合：

1 倒胶进入柱子

2 小心上样，用波棒室温搅拌5－30分钟

3 打开柱帽，收集流出峰用于分析

洗胶：

1 加入5倍体积起始缓冲液，收集流出液用于SDS-PAGE 蛋白电泳

2再洗两次柱料（一共3×5柱床起始缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白

电泳

洗柱：

1 加上柱帽，加入2倍体积洗脱缓冲液（20mM Na2HPO4 /0.5MnaCl/10mM咪唑/PH7.4）搅拌5分钟。打开柱帽，收集流出峰

2再洗四次柱料（一共5×2柱床洗脱缓冲液）。记得取出上清，部分用于SDS-PAGE 蛋白电泳，280nM吸光值，ELISA,WESTERN

注意：0.5M咪唑的280nM吸光值＝0.5

常见问题：

1 样品太粘稠

答：核酸存在影响，可以继续超声，加入RNA酶至10ug/ml DNA酶至5ug/ml。然后冰浴1

0－15分钟。或者也可以用注射器来回充旋。这样可以防止堵塞柱料。

2 平衡时样品洗脱了下来

答: 检查PH和缓冲液成分，如果缓冲液成分不正确，EDTA加入，强还原剂加入，都会导致这个现象出现。

加大胶的量，如果胶料承载能力过头，也绘出出现这现象。

准备新鲜的柱料，如果柱料断裂，也挂不上蛋白。

3 在洗脱液中不含有组氨酸蛋白

答：如果SDS-PAGE 蛋白电泳已经发现蛋白存在于超声液中

超声可能不完全。可以用显微镜观察超声情况。AD260/280比值。（通常是超声前将10mg/ml溶菌酶加入25mM Tris-HCL，PH6-8），避免发泡以降解融合蛋白。

蛋白可能是是包含体，可以使用4－6M盐酸呱或者4－8 M尿素溶解。

尿素溶解的可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，盐酸呱溶解的不可以进行SDS-PAGE 蛋白电泳，必须换缓冲液。

洗脱液浓度太稀，可以加大咪唑浓度或者降低PH 来决定最佳洗脱条件如果在平衡前的洗柱发现了目的蛋白，证明起始缓冲液中的咪唑浓度太高，可适当降低。

4 考马氏亮蓝或者银染发现多条带

答：加入蛋白激酶抑制剂。可能是蛋白降解。用凝血酶切割前必须去除丝氨酸蛋白酶抑制剂采用梯度咪唑来洗脱蛋白。在平衡洗脱液中加入10mM咪唑可以洗脱大量杂质而不会洗脱融合蛋白。低于500mM咪唑可以洗掉绝大部分杂质。

在洗脱步奏往起始缓冲液加入去垢剂（2％TRITON x-100或者2％Tween20）50% 葡萄糖，20mM B-巯基乙醇。记得杂质通常没有特意结合能力，可以改变缓冲液来洗脱。

如果杂志和目的蛋白有相同结合能力，那就不能用于纯化。因此可以使用别的纯化系统，例如含有GST尾巴就用谷胱甘肽琼脂糖4B

柱料再生，清洁和保存

柱料再生：

1 使用0.05M EDTA,0.5M NaCl来洗脱镍离子。然后用3柱床的0.5M NaCl来洗干净EDTA

2如果是铁离子可以用0.05M EDTA泡过夜

3 这一步可以洗脱上面未能洗脱的残余结合蛋白

清洗柱料：

1 0.5倍柱床2M NaCl，反向洗脱10－15分钟

2 1M NaOH洗1小时去除残余蛋白

3 每一步都要用3倍柱床起始缓冲液清洗

4 4倍柱床70%乙醇洗脱强亲水蛋白和脂类蛋白。

也可以使用2倍柱床去垢剂。0.1-0.5%非离子去垢剂溶于0.1M乙酸。浸泡1－2小时。最后用5个柱床的70％乙醇去除去垢剂。

清洁：

1 尽可能去除微生物

2 0.5-1M NaOH反向流动半小时

3 再用3－5倍柱床消毒的起始缓冲液平衡

4 这个清洁步奏不一定能够提高纯化能力

保存：

长期保存于20％乙醇或者0.01M NaOH 于4度

以上来自百度文库，希望能帮到你。

甘氨酸的用途如下：

1、食品用途：

用作生化试剂，用于医药、饲料和食品添加剂，氮肥工业用作无毒脱碳剂；营养增补剂，主要用于调味等方面；对枯草杆菌及大肠杆菌的繁殖有一定抑制作用。抗氧化作用（利用其金属螯合作用）添加于奶油、干酪、人造奶油可延长保存期3～4倍。

2、医药用途：

用作医学微生物和生物化学氨基酸代谢研究的用药；用作金霉素缓冲剂\抗帕金森氏病药物L-多巴\维生素B6\以及苏氨酸等氨基酸的合成原料；与阿司匹林合用，可减少其对胃的刺激；作为生成非必需氨基酸的氮源，加入混合氨基酸注射液中。

3、农业用途：

主要作为家禽、畜禽特别是宠物等食用的饲料增加氨基酸的添加剂与引诱剂。用作水解蛋白添加剂，作为水解蛋白的增效剂；在农药生产上用于合成拟除虫菊酯杀虫剂的中间体甘氨酸乙酯盐酸盐，也可合成杀菌剂异菌脲和除草剂固体草甘膦。

4、工业用途：

用于制药工业、生化试验及有机合成；用作头孢菌素的原料，甲砜霉素中间体，合成咪唑乙酸中间体等。

5、试剂用途：

用于多肽合成，用作氨基酸保护单体；用于组织培养基的制备，铜、金和银的检验；因甘氨酸为具有氨基和羧基的两性离子，故有很强的缓冲性，常用作配制缓冲液。

扩展资料：

固态的甘氨酸为白色单斜晶系或六方晶系的晶体或白色结晶粉末,无臭,无毒；在水中易溶，在乙醇或乙醚中几乎不溶。沸点：233℃ ，熔点：240 ℃，用于制药工业、生化试验及有机合成，是氨基酸系列中结构最为简单。

甘氨酸是人体非必需的一种氨基酸，在分子中同时具有酸性和碱性官能团，在水中可电离，具有很强的亲水性，但属于非极性氨基酸，溶于极性溶剂，而难溶于非极性溶剂，而且具有较高的沸点和熔点，通过水溶液酸碱性的调节可以使甘氨酸呈现不同的分子形态。

参考资料来源：百度百科-甘氨酸