乳酸、丙酮酸和乙酸如何鉴定？
丙酮酸检测试剂盒可测各种动物血清（浆）、组织以及培养细胞、细胞培养上清液等样本中丙酮酸含量。丙酮酸与显色剂反应，反应产物在碱性溶液中显红棕色，颜色深浅与丙酮酸含量成正比，通过比色可以测定出丙酮酸的含量。
原理：丙酮酸盐检测试剂盒提供了一种简单、直接和可自动化操作的程序来测量不同生物学标本中丙酮酸的含量。适用标本类型包括：食物、细胞、培养基和发酵培养基。丙酮酸盐检测试剂盒基本原理如下：丙酮酸盐被丙酮酸酶氧化，在酶反应过程中产生颜色（λ=570 nm）或者荧光（Ex/Em=535/587 nm），可使用酶标仪或荧光计检测到。光的强度与丙酮酸含量是成正比的，因此通过检测光的强度即可精确的得到丙酮酸的含量。试剂盒检测范围为1-10 uM丙酮酸。
丙酮酸检测试剂盒
丙酮酸分子式CH3COCOOH，原称焦性葡萄酸(德Brenztr-aubensure)，是参与整个生物体基本代谢的中间产物之一。丙酮酸可通过乙酰CoA和三羧酸循环实现体内糖、脂肪和氨基酸间的互相转化，因此，丙酮酸在三大营养物质的代谢联系中起着重要的枢纽作用。
丙酮酸是糖无氧代谢的产物，研究工作者将丙酮酸和乳酸一同测定，并用二者的比值推测循环衰竭的严重程度；此外，它还对维生素B1缺乏有一定的研究意义，同时作为一种重要的精细化工中间体,广泛应用于医药、农药、食品等领域,尤其是作为医药中间体,具有良好的发展前景。
应用[4][5]
用于大肠杆菌丙酮酸代谢途径改造及丙酮酸高产菌株培育
丙酮酸作为最重要有机酸之一,在医药、食品、化工等领域以及科学研究中都具有广泛的用途。目前高质量的丙酮酸在国内市场缺口较大,丙酮酸工业化生产的前景十分广阔。
从野生型大肠杆菌K-12 MG1655菌株出发,利用CRISPR/Cas9技术敲除了乳酸脱氢酶基因（ldh A）,截断了乳酸合成途径敲除了丙酮酸氧化酶基因（pox B）、磷酸转乙酰基酶基因（pta）和乙酸激酶基因（ack A）,截断了乙酸合成途径敲除了丙酮酸-甲酸裂解酶基因（pfl B）,截断了甲酸合成途径敲除了磷酸烯醇丙酮酸合成酶基因（pps A）,减少了丙酮酸生成磷酸烯醇式丙酮酸敲除了磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶基因（ppc）,减少了磷酸烯醇式丙酮酸的消耗通过敲除延胡索酸还原酶复合体基因（frd BC）,削弱了三羧酸循环途径。最后得到了一株可以初步积累丙酮酸的基因工程改造菌株MG1655-GP7（E.coli K-12 MG1655Δldh AΔpfl BΔack AΔptaΔpox BΔppcΔfrd BCΔpps A）,这株菌在使用5 L发酵罐发酵68小时后丙酮酸产量达到32.07 g/L。
这表明只利用基因工程的手段是可以使大肠杆菌积累丙酮酸的。大肠杆菌利用葡萄糖作为碳源时,葡萄糖经糖酵解途径会产生过量的ATP与NADH从而抑制丙酮酸的积累,使用氧化程度较高的葡萄糖酸作为碳源可解决此问题当葡萄糖进入细胞后不经EMP途径而是进入Entner-Doudoroff（ED）途径,产生的ATP与NADH的量只有前者的一半,会相应的促进丙酮酸的积累。为了进一步提高产量,作者又敲除磷酸葡萄糖异构酶基因（pgi）以抑制糖酵解途径同时敲除6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因（gnd）以抑制磷酸戊糖途径,并减少6-磷酸-葡萄糖酸的消耗还在敲除磷酸葡萄糖转移酶基因（pts G）和磷酸烯醇丙酮酸葡萄糖转移酶基因（pts I）的基础上敲入运动发酵单胞菌中葡萄糖转运蛋白基因（glf）来改良葡萄糖转运系统,减少大肠杆菌细胞转运葡萄糖时磷酸烯醇式丙酮酸的消耗。
并计划上调葡萄糖-6-磷酸脱氢酶基因（zwf）、葡萄糖酸-6-磷酸脱水酶基因（edd）和2-酮-3-脱氧葡萄糖酸-6-磷酸醛缩酶基因（eda）的表达以强化ED途径,平衡ATP和NADH的水平,引导碳流更多的流向丙酮酸合成方向。
目前通过基因编辑的方法得到了一株生产丙酮酸能力理论上较MG1655-GP7菌株有所提高的MG1655-GP12（E.coli K-12 MG1655Δldh AΔpfl BΔack AΔptaΔpox BΔppcΔfrd BCΔpps AΔgndΔpgiΔpts GΔpts I::glf）菌株,该菌株的生产能力正在评估中。但经多次基因改造后,基因工程菌株MG1655-GP12出现了较野生型菌株生长缓慢的现象,本实验对该菌株进行了实验室适应性进化,经多次传代后筛选到一株生长速度恢复到野生型菌株75%的MG1655-GP12-1菌株。
哪位高手用novagenhis-Binding蛋白纯化试剂盒
1. 前处理
蛋白质原组织或溶解状态释放保持原状态并丢
失物性用：匀浆器破碎、超波破碎、纤维素酶处理及溶菌酶等
超声波破碎：声波达定频率使液体产空穴效应使细胞破碎技术超声波引起快速振使液体局部产低气压低气压使液体转化气体
即形气泡由于局部压力转换压力重新升高气泡崩溃崩溃气泡产振波并传送液体形剪切力使细胞破碎
2． 粗级
离用盐析、等电点沉淀机溶剂级离等些特点简便、处理量
3． 细级
品进步纯化品经粗离般体积较杂蛋白部已除进步纯化般使用层析包括凝胶滤、离交换层析、吸附层析及亲层析等必要选择电泳、等电聚焦等作纯化步骤
结晶步
离纯化：1．；2.溶解度；3.电荷；4.吸附性质；5.配体物亲力等
()根据同纯化
1. 透析
利用蛋白质能通半透膜使蛋白质其物质机盐、单糖等
2. 密度梯度离
蛋白质颗粒沉降系数仅决定于且取决于密度
3. 凝胶滤
利用蛋白质凝胶滤所用介质凝胶珠其内部孔网状结构同蛋白质流凝胶层析柱比凝胶珠孔径进入珠内网状结构排阻凝胶珠外随溶剂凝胶珠间空隙向移并先流柱外比网孔能同程度底自由入凝胶珠内外由于同所经路径同离先洗脱洗脱
(二)利用溶解度差别纯化
1．等电点沉淀PH控制
蛋白质处于等电点其净电荷零由于相邻蛋白质间没静电斥力聚集沉淀其条件相同溶解度达底点利用等电点离蛋白质种用
2. 蛋白质盐溶盐析
性盐增加蛋白质溶解度种现象称盐溶盐溶作用由于蛋白质吸附某种盐类离带电层使蛋白质彼排斥蛋白质与水相互作用加强溶解度增加
溶液离强度增加定数值蛋白质溶解度始降离强度足够高蛋白质水溶液沉淀种现象称盐析
抗小鼠Ly-6C单克隆抗体（克隆号ER-MP20） Ly-6C；抗体是机体在抗原物质刺激下，由B细胞分化成的浆细胞所产生的、可与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。 1.对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在 -20 度 or -80 度对绝大多数抗体来说，保存在-20 度是完全足够了。没有任何证据显示保存在-80度 会有更多的好处！ 2.绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。尽量将抗体保存在冰箱里层，而不是门上。
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ELISA-kit for TTX
本测试盒用间接竞争免疫分析法定量测定河豚鱼中的河豚毒素（TTX）。该测试盒反应孔可拆卸，可测单份样品，也可测多份样品。定量分析时需有含450nm波长的微孔板酶标仪。
1 概要
河豚毒素（TTX）是一种强神经毒素，其性质稳定，加热、盐腌及高温烹煮均不易使其被破坏。河豚鱼中常含有河豚毒素。我国沿海居民素有食用河豚鱼的习惯。因误食或食用加工不当的河豚鱼而发生人畜中毒的事件每年都有发生。故准确检测河豚鱼中的河豚毒素对预防和控制河豚毒素中毒，具有重要意义。本检测方法具有灵敏、快速、简便、特异性好、取样量小并可同时检测大量样品等优点。
2 测定原理
本试剂盒采用固相酶联免疫吸附原理，利用间接竞争ELISA法进行测定。用抗原包被微孔板，加入河豚毒素标准品或样品、抗河豚毒素单克隆抗体进行孵育后，将未与包被抗原结合的抗体洗去；再加入酶标记的抗鼠IgG抗体孵育，加入显色液，经过终止液终止后，用酶标仪在450nm处测定OD值。
3 提供的物品
微孔板
5个浓度的TTX标准溶液（各0.5mL）
标准1：0ng/mL ……………………………………………………………直接使用
标准2：10.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
标准3：20.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
标准4：50.0ng/mL ………………………………………………………直接使用
标准5：200.0ng/mL………………………………………………………直接使用
抗体溶液(6mL) …………………………………………………………………直接使用
酶标物(12mL) …………………………………………………………………直接使用
显色液(12mL) …………………………………………………………………直接使用
终止液(6mL) ………………………………………………………………………直接使用
浓缩洗液(30mL) …………………………………………………………………稀释使用
4 盒中未提供，需自备物品
微孔板酶标仪（含450nm）、离心机、电炉、微量移液器、磁力搅拌器
量筒、漏斗、容量瓶、快速定性滤纸、分液漏斗
乙酸、氢氧化钠、去离子水或蒸馏水、PBS缓冲液
5 操作者注意事项
标准溶液中含有TTX毒素，应特别小心。
终止液为0.5M硫酸，避免接触皮肤。
每次加样后立即将所有试剂放回2~8 ℃。
每步加样时间应控制在5min内。
孵育过程中应避光。
不要使用过期试剂盒。
不要交叉使用不同批号试剂盒中的试剂。
6 储存条件
保存试剂盒于2~8℃。不要冷冻
显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
将不用的微孔板放进原铝箔袋中，置2~8℃保存。
7 试剂变质的标志
标准1的吸光度值小于0.5个单位（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。
8 样品处理
8.1 鲜河豚鱼中河豚毒素的检测
----称取5g河豚鱼样品(肌肉、皮或内脏)，剪碎，加入25mL 0.1%的乙酸，用烧杯在电炉上煮沸搅拌10min。此步骤应注意不要让液体沸出容器，应控制加热温度，并不断搅拌。
----待冷却至室温后，上清用快速定性滤纸过滤于50mL离心管中
----沉淀用20mL0.1% 乙酸洗到烧杯中，再煮沸3min
----冷却至室温后，所有的液体及煮沸的样品都加到离心管中，3000rpm离心10min。
----取上清，量体积，置分液漏斗中
----加入等体积乙醚，振摇1分钟，静置分层。放出水层，量体积后至另一分液漏斗中，再加入等体积的乙醚，振摇1分钟，静止分层。
----将水层放入50mL容量瓶中，用1M氢氧化钠调节提取液中的pH值至6.5~7.4，然后加入PBS至50mL，提取液4℃保存备用。
8.2 鱼片、鱼干制品中河豚毒素的检测
-----样品中的TTX用0.1%乙酸在水浴中超声提取，提取液中的TTX用ELISA方法进行检测，若样品中TTX含量低于检出限则报告为<100mg/kg；样品中TTX含量在100~3000mg/kg之间，直接按ELISA实验结果报告；如果样品中TTX含量达到3000mg/kg，则需采用小鼠生物测定法进行验证，确认毒性反应后再按照ELISA实验结果报告。
9 酶免疫分析程序
----浓缩洗液为10倍浓缩液，使用时与去离子水或蒸馏水按体积比1:9稀释后使用。
----取所需数量的板条插入微孔架，用洗液洗涤微孔板3min×2次，记录样品及标准的位置。
----加入50mL标准品或处理好的样品到微孔，每个标准和样品必须使用新的吸头。
----加入50mL抗河豚毒素单克隆抗体溶液到每个微孔（注意移液器管尖不要接触到孔中的液体，避免交叉污染）中，37℃孵育90min。
----甩掉孔中液体，用洗液洗涤微孔板3min×3次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
----每孔加入酶标物100mL，37℃孵育60min。
----用洗液洗涤微孔板3min×5次，最后一次应在吸水纸上拍打以完全除去孔中液体。
----每孔加入显色液100mL（2滴），37℃孵育12min。
----每孔加入终止液50mL（1滴），立即用酶标仪在波长450nm处测定吸光度值（OD值）。
注：在定量分析中，显色液和终止液需要用移液器准确量取。
10 样品浓度计算
以标准溶液OD值与标准1的OD值的比值为纵坐标（即标准品OD比），所对应标准溶液浓度（ng/mL）的对数值为横坐标，制作标准曲线。根据样品OD值与标准1的OD的比值（即样品OD比），可从曲线上得到对应点的横坐标，即为TTX浓度的对数值，求得反对数即为测定液中TTX浓度C（ng/mL），按下列公式计算出样品中TTX含量：
TTX含量（mg/kg）= 10×C×K
式中：C：测定液中TTX浓度（ng/mL）
K：提取液的稀释倍数
11 主要技术指标及参数
11.1 最低检出浓度10.0 ng/mL。
11.2 加标回收率在70~120%，条内变异系数＜10%，条件变异系数＜15%。
