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请教:如何完美地回收用聚乙二醇浓缩的透析袋中的蛋白

动人的朋友
拉长的夏天
2022-12-22 03:09:51

请教:如何完美地回收用聚乙二醇浓缩的透析袋中的蛋白

最佳答案
受伤的冰淇淋
可靠的羽毛
2026-01-28 12:57:56

所谓的分析纯等是指试剂的纯度级别,也就是作为试剂的一种含量与纯度的区别。分析纯是指做分析测定用的试剂,杂质非常少,不妨碍分析测定;化学纯是指一般化学试验用的,有较少的杂质,也不妨碍实验要求;而色谱纯是指进行色谱分析时使用的标准试剂,在色谱条件下只出现指定化合物的峰,不出现杂质峰。而且对于化学纯,分析纯,优级纯,不同的产品要求往往也不一样。

所以聚乙二醇分析纯就是较高纯度(分析纯级别)的聚乙二醇。

一直在用20000的聚乙二醇浓缩我的蛋白,方法是这样的,我的蛋白通过硫酸铵沉淀后,袋里水很多,将聚乙二醇晶体洒在透析袋(排阻3500)上,直到析出水分达到要求为止。如果是非药用仅供科研使用的蛋白质,在进行分离纯化或者浓缩等操作时使用的试剂都可以是分析纯的化学试剂。

这些试剂不会影响到蛋白质在科研方面的使用。

一般来说这样做不会有影响。

1、蛋白浓缩管——快且保险的方法;

2、用电风扇对着透析袋吹,或者实验室如果有抽干室或者干燥室,放进去,过一段时间去看看,水分就会少掉很多,虽然方法有点土,但是能用(我用过),但是这样做要注意的是,要求一定要低温保存的蛋白谨慎操作,毕竟电风扇不能放进冰箱,抽干室即使有空调温度也不会很低。

还有就是注意水分去掉后,除了蛋白浓缩了外,缓冲液的离子浓度之类的也会改变,有需要的话记得要调回去。

最新回答
靓丽的柜子
友好的香菇
2026-01-28 12:57:56

下午好,PEG-2000比8000的分子量要小得多,吸水性强。PEG-8000几乎不溶于冷水也没有吸湿性,请参考。它是非常硬脆的白色石蜡状固体,溶解时需要加热到40度以上,冷却析出。

现实的冰淇淋
狂野的棒棒糖
2026-01-28 12:57:56
蛋白质浓缩

浓缩

生物大分子在制备过程中由于过柱纯化而样品变得很稀,为了保存和鉴定的目的,往往需要进行浓缩。常用的浓缩方法的:

减压加温蒸发浓缩

通过降低液面压力使液体沸点降低,减压的真空度愈高,液体沸点降得愈低,蒸发愈快,此法适用于一些不耐热的生物大分子的浓缩。

空气流动蒸发浓缩 空气的流动可使液体加速蒸发,铺成薄层的溶液,表面不断通过空气流;或将生物大分子溶液装入透析袋内置于冷室,用电扇对准吹风,使透过膜外的溶剂不沁蒸发,而达到浓缩目的,此法浓缩速度慢,不适于大量溶液的浓缩。

冰冻法 生物大分子在低温结成冰,盐类及生物大分子不进入冰内而留在液相中,操作时先将待浓缩的溶液冷却使之变成固体,然后缓慢地融解,利用溶剂与溶质融点介点的差别而达到除去大部分溶剂的目的。如蛋白质和酶的盐溶液用此法浓缩时,不含蛋白质和酶的纯冰结晶浮于液面,蛋白质和酶则集中于下层溶液中,移去上层冰块,可得蛋白质和酶的浓缩液。

吸收法 通过吸收剂直接收除去溶液中溶液分子使之浓缩。所用的吸收剂必需与溶液不起化学反应,对生物大分子不吸附,易与溶液分开。常用的吸收剂有聚乙二醇,聚乙稀吡咯酮、蔗糖和凝胶等,使用聚乙二醇吸收剂时,先将生物大分子溶液装入半透膜的袋里,外加聚乙二醇复盖置于4度下,袋内溶剂渗出即被聚乙二醇迅速吸去,聚乙二醇被水饱和后要更换新的直至达到所需要的体积。

超滤法 超滤法是使用一种特别的薄膜对溶液中各种溶质分子进行选择性过滤的方法,不液体在一定压力下(氮气压或真空泵压)通过膜时,溶剂和小分子透过,大分子受阻保留,这是近年来发展起来的新方法,最适于生物大分子尤其是蛋白质和酶的浓缩或脱盐,并具有成本低,操作方便,条件温和,能较好地保持生物大分子的活性,回收率高等优点。应用超滤法关键在于膜的选择,不同类型和规格的膜,水的流速,分子量截止值(即大体上能被膜保留分子最小分子量值)等参数均不同,必须根据工作需要来选用。另外,超滤装置形式,溶质成份及性质、溶液浓度等都对超滤效果的一定影响。Diaflo 超滤膜的分子量截留值

膜名称

分子量截留值

孔的大的平均直径

XM -300

300,000

140

XM-200

100,000

55

XM-50

50,000

30

PM-30

30,000

22

UM-20

20,000

18

PM-10

10,000

15

UM-2

1,000

12

UM05

500

10

用上面的超滤膜制成空心的纤维管,将很多根这样的管拢成一束,管的两端与低离子强度的缓冲液相连,使缓冲液不断地在管中流动。然后将纤维管浸入待透析的蛋白质溶液中。当缓冲液流过纤维管时,则小分子很易透过膜而扩散,大分子则不能。这就是纤维过滤秀析法,由于透析面积增大,因而使透析时间缩短10倍。

务实的小懒虫
温婉的店员
2026-01-28 12:57:56
你好!!!很高兴为你解答

PCR Polymerase Chain Reaction 聚合酶链反应 是用来扩增DNA的 关键字有DNA 复制 模板 引物 底物 dNTP Taq酶

PEP phosphoenolpyruvate 磷酸烯醇式丙酮酸 糖酵解途径和糖异生途径里面的一个物质 关键字 高能磷酸键 糖酵解 糖异生

PEG 有很多种翻译 根据另外两个推测 这里应该翻译成 polyethylene glycol 聚乙二醇 常用于实验室中透析除水 蛋白质分子的修饰 关键字 聚乙二醇 浓缩 吸水 蛋白质 修饰 稳定性 半衰期 抗原性……

秀丽的书本
干净的航空
2026-01-28 12:57:56
蛋白质浓缩用的聚乙二醇20000可以是分析纯的

如果是非药用仅供科研使用的蛋白质,在进行分离纯化或者浓缩等操作时使用的试剂都可以是分析纯的化学试剂。

这些试剂不会影响到蛋白质在科研方面的使用

儒雅的早晨
坚强的路灯
2026-01-28 12:57:56
实验中提取的DNA浓度太低,有办法浓缩

一.固体聚乙二醇(PEG)浓缩:用透析袋外敷PEG至合适量。

二.丁醇抽提浓缩:DNA溶液中水可分配到正丁醇或仲丁醇,但DNA不会。因此重复几次可显著减少DNA体积。

三.乙醇或异丙醇沉淀:(1)需要阳离子盐的存在,NaAc最常用,NaCl对含SDS样品好,NH4Ac去除dNTP好。PiCl沉淀RNA好,但不能用于反转录前。(2)沉淀温度与时间;0℃一4℃,12000g,10分钟,小于100bp DNA需超速离心。

四.精胺沉淀法:与DNA结合后使DNA结构凝缩沉淀,需在无盐或低盐溶液。

欣喜的绿茶
无私的雨
2026-01-28 12:57:56
鱼精蛋白包覆的乙肝疫苗PLGA纳米粒载体

包载缺氧诱导因子-1α反义寡核苷酸纳米粒子

PLGA-PEG-FA(PTX)-NPs 叶酸偶联紫杉醇纳米粒

PLGA/TiO_2载药微球

MPEG-PLGA纳米药物载体

PLGA/纳米HA/替莫唑胺微球

DOX/N-MCNs/PLGA载药纳米纤维

阳离子型丁香苦苷PEG-PLGA纳米粒

载HIF-1α shRNA质粒的PLGA纳米粒

PLGA-PEG-Apt 适配子修饰靶向PLGA纳米

Jug-PLGA-NPs 包载胡桃醌的聚乳酸纳米粒子

PLGA-PEG-PLGA包裹辛伐他汀类药物

PLGA载克班宁纳米粒

载汉防己甲素PLGA纳米粒

PLGA纳米粒包裹阿霉素

全氟戊烷/四氧化三铁修饰聚乳酸纳米粒子

全氟戊烷/锰卟啉/紫杉醇修饰聚乳酸纳米粒子