苯酚硫酸法测定葡萄糖的标准曲线，以及具体方法！！

花痴的灯泡

2022-12-22 00:49:36

最佳答案

迷路的往事

2026-01-26 22:01:22

标准液的制法：取100mg葡萄糖（104℃烘干至恒重）在100ml的容量瓶定容。分别取溶液1ml、2ml、3ml、4ml、6ml、8ml至100ml的容量瓶中，制成10ug/mg、20、30、40、60、80ug/mg的标准液。

苯酚溶液的制法：称取5g的苯酚，加入95ml蒸馏水，溶解。

反应液：分别取1ml的标准液，加入1ml的苯酚溶液，迅速加入5ml的浓硫酸，震荡摇匀。在沸水浴中加热15min后冷却到室温，在490nm波长下测定其吸光值。

我这两天刚做出来的，但是我的浓度是用的20ug/mg、40、60、80、100、120，其他的细节都是一样的。我只是按照我做的给你说的，你也可以灵活变通，比如沸水浴的时间，波长的选择都是按照自己的实验具体确定的，但是还是有些细节不能忽视的，比如苯酚要求用182℃蒸馏后得到的馏分，如果试验经费允许可以直接买重蒸酚，普通苯酚和重蒸酚价格相差有点大。具体我们可以讨论，我也是试验很多方法自己总结出来的，用苯酚测定糖是个技术活，而且冒着有毒的危险。

最新回答

欣慰的小懒猪

2026-01-26 22:01:22

您好！

①

苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。再以比色法测定。

②

绘制葡萄糖标准曲线来得出单糖浓度与比色值的线性关系。

③

通过线性关系得出测定样品中单糖浓度从而可以反推出多糖的含量。

百度教育团队【海纳百川团】为您解答。

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O(∩_∩)O

。如有疑问，欢迎追问。

甜美的煎饼

2026-01-26 22:01:22

1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。

2．样品含量测定：

①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5%TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5%TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。最后一次将残渣一起到入离心管。注意：总的溶液不要超出10毫升。（既不要超出离心管的容量）。

②离心，转速3000转/分钟，共三次。第一次15分钟，取上清液。后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。最后滤液保持18毫升左右。（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。因为其脂肪含量大容易夹带残渣。）

③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。

④定容取样。水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。定容至25毫升的容量瓶中。吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置20分钟以后于490nm测光密度。每次测定取双样对照。以标准曲线计算多糖含量。