10%三氯醋酸（TCA）的配制方法

下面的结晶是三氯乙酸，估计还没有被污染。

上面估计因为密封不良，已经吸水潮解了，变成HCL及羟基酸了，你可以取上层的液体检测下酸值，推算下是否被潮解了没有，若潮解酸值变大很多。

设需要加xmI的三氯乙酸

500×(1-10%)

=(500+x)×(1-15%)

500×0.9=(500+x)×0.85

450=425+0.85x

0.85x=25

x=29.4

需要加29.4mI三氯乙酸

三氯乙酸应该不属于强酸，强酸的话是硫酸盐酸硝酸，这也算属于强酸

三氯乙酸，有机化合物，又名三氯醋酸 ，无色结晶，有刺激性气味，易潮解 ，溶于水、乙醇、乙醚 。主要用于有机合成和制医药、化学试剂、杀虫剂。

2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，三氯乙酸在2B类致癌物清单中

1.健康危害

侵入途径：吸入、食入、经皮吸收。

健康危害：吸入本品粉尘对呼吸道有刺激作用，可引起咳嗽、胸痛和中枢神经系统抑制。眼直接接触可造成严重损害，重者可导致失明。皮肤接触可致化学性灼伤。口服灼伤口腔和消化道，出现剧烈腹痛、呕吐和虚脱。

2.毒理学资料及环境行为

毒性：属低毒类。

应急处理

（1）泄漏应急处理

隔离泄漏污染区，周围设警告标志，建议应急处理人员戴好防毒面具，穿化学防护服。不要直接接触泄漏物，将地面洒上苏打灰，然后用大量水冲洗，经稀释的洗水放入废水系统。如大量泄漏，收集回收或无害处理后废弃。

（2）防护措施

呼吸系统防护：空气中浓度超标时，应该佩带防毒口罩。必要时佩带自给式呼吸器。

眼睛防护：戴化学安全防护眼镜。

防护服：穿工作服(防腐材料制作)。

手防护：戴橡皮手套。

其它：工作后，淋浴更衣。注意个人清洁卫生。

（3）急救措施

皮肤接触：脱去污染的衣着，立即用水冲洗至少15分钟。若有灼伤，就医治疗。

眼睛接触：立即提起眼睑，用流动清水或生理盐水冲洗至少15分钟。就医。

吸入：迅速脱离现场至空气新鲜处。保持呼吸道通畅。必要时进行人工呼吸。就医。

食入：误服者立即漱口，给饮牛奶或蛋清。就医。

灭火方法：雾状水、泡沫、二氧化碳、砂土。

肝糖原的提取和鉴定

一、实验目的

1.了解肝糖原的性质并掌握其提取的方法。

2.熟悉肝糖原的鉴定方法。

二、实验原理

糖原属于高分子糖类化合物，是动物体内糖的主要储存形式，在肝脏内储量较为丰富。糖原在体内的合成与分解代谢，对血糖浓度的调节起着重要的作用。

糖原微溶于水，无还原性，与碘作用生成红色。常用的提取肝糖原的方法是将新鲜的肝组织与石英砂共同研磨以破坏肝组织，加入三氯醋酸溶液沉淀其中的蛋白质，离心除去沉淀。上清液中的肝糖原则通过加入乙醇沉淀而得。将沉淀的糖原溶于水，取一部分加入碘观察颜色反应，另一部分经酸水解成葡萄糖后，用斑氏试剂(Benedict)检验。

三、仪器和原料

仪器

研钵、离心机、离心管、电炉、广泛试纸、滤纸、试管等。

原料

新鲜动物肝脏（猪肝）

四、试剂

1. 10%的三氯醋酸溶液

2. 5%的三氯醋酸溶液

3. 95%乙醇

4. 浓盐酸

5. 20%的NaOH 溶液

6. 碘液：碘1g、碘化钾2g 溶于500mL 蒸馏水中。

7. 配制班氏试剂：将硫酸铜17.3g 溶于100mL 温蒸馏水中；将柠檬酸钠173g 和无水碳酸钠100g 溶于700mL 温蒸馏水中，冷却；将硫酸铜溶液搅拌下缓缓加入柠檬酸和碳酸钠混合液中，最后用蒸馏水稀释至1000mL。

五、操作步骤

(一)肝糖原的提取

称取1g 左右新鲜动物肝脏至研钵中，加入少许石英砂以及1mL10%的三氯醋酸溶液，研磨至糜状再加入2mL5%的三氯醋酸继续研磨片刻，使成均匀糜浆，转入离心管中，2500r/min 离心10min。取上清液于另一离心管中，加入等体积的95%乙醇，混匀后静置片刻，使糖原呈絮状析出，再放入离心机2500r/min 离心10min。弃去上清液，将离心管倒置于滤纸上。

(二)肝糖原的鉴定

向肝糖原沉淀中加入1mL 蒸馏水，用细玻棒搅拌至溶解，得糖原溶液。

1.取小试管2支，一支加入糖原溶液10滴，另一支加入蒸馏水10滴，然后两管再各加入碘液2滴，混匀。观察管中颜色变化，并解释现象。

2.在剩余糖原溶液内加入浓盐酸3滴，放入沸水浴中加热10min，取出冷却，用20%的NaOH 溶液中和至中性(pH 试纸检测)。加入斑氏试剂2mL，再置沸水浴中加热5min，取出冷却。观察管中沉淀的生成，并解释现象。

（步骤简化：

（一）提取

1、称取肝脏约1g+10﹪三氯醋酸溶液1mL＜研磨＞→加5%三氯醋酸2mL＜研磨至肉糜烂状＞过滤（滤液收集在带刻度的离心管中）→加入等体积的95%的乙醇，混匀、静置10min→离心→弃去上清液、留沉淀，此步骤重复两次＜加蒸馏水1mL＞→搅拌溶解得到肝糖原待用

（二）鉴定

1、取试管2支 ①加入肝糖原溶液10滴 ②加蒸馏水10滴

各加1滴碘液，混匀，观察现象

2、剩余肝糖原液内+浓HCL3滴→沸水浴10min＜冷却＞→加入10﹪NaOH3~4滴至中性偏碱性→班氏试剂2ml→沸水浴5min＜冷却＞→观察现象

三氯乙酸是一种有机酸，使多糖提取液中的蛋白质与有机酸作用而变性沉淀。 该法是 在多糖水提液中滴加 5 %～10 %与多糖水提取液等体积的三氯乙酸，混匀静置过夜，离心除 去胶状沉淀，重复以上的操作直至溶液不再继续混浊为止，得无蛋白质的多糖。 三氯乙酸浓度越大，除蛋白质效果越好，但对多糖的影响也越大，可能是三氯乙酸对多糖结构具有破坏作用，使多糖降解，而且这种破坏作用随着三氯乙酸浓度增大而增强。 植物多糖常采用三氯乙酸法除蛋白质，也可先用蛋白水解酶，使样品中的蛋白质部分降解后再用 Sevag 法效果更好；微生物多糖去除蛋白常采用 Sevag 法、三氟三氯乙烷法；也可用盐析法、有机溶剂萃取等方法除蛋白。

简单的就是用纯化水或去离子水多洗涤几次,会影响蛋白的收率

也可以使用膜渗透的办法,使用选择性膜将小分子的三氯乙酸与大分子蛋白质分离,不过此方法使用后需要物理浓缩过程,会增加能耗,而且如果蛋白质对热敏感不太适合使用

生物化学实验——糖酵解中间产物的鉴定一、实验目的

了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。

二、实验原理

利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。

三、仪器 原料和试剂

（1）仪器：试管（1.5×1.5cm）、吸量管（1ml、、2ml3ml）、恒温水浴、烧杯（50ml）。

（2）原料：新鲜酵母。

（3）试剂：

①2，4-二硝基苯肼：0.1g2，4-二硝基苯肼溶于水100ml 2mol/L盐酸溶液中，贮于棕色瓶中备用。

②0.56mol/L硫酸肼溶液：称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中，这时不会全部溶解，当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。此液也可用于水合肼溶液配制，可按其分子浓度稀释至0.56mol/L，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调pH至7.4即可。

③5%葡萄糖溶液。

④10%三氯乙酸溶液。

⑤0.75mol/LNaOH溶液。

⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。

四、操作步骤

（1）取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3g，并按下表分别加入各试剂，混匀。

杯号 5%葡萄糖加入量/ml 10%三氯醋酸加入量/ml 碘乙酸加入量/ml 硫酸肼加入量/ml 发酵时起泡多少

1 10 2 1 1

2 10 -- 1 1

3 10 -- -- --

（2）将各杯混合物分别倒入编号相同的发酵罐内，放入37℃保温1.5h，观察发酵管产生气泡的量有何不同。

（3）把发酵管中发酵液倾倒入同号小烧杯中并在2号和3号杯中按下表补加各试剂，摇匀放10min后和第一只烧杯中内容物一起分别过滤，取滤液进行测定。

杯号 10%三氯乙酸/ml 碘乙酸/ml 硫酸肼/ml

2 2 -- --

3 2 1 1

（4）取3个试管，分别加入上述滤液0.5ml，并按下表加入试剂和处理。

管号

滤液/ml 0.75mol/L

NaOH/ml

室温放置

10min 2，4-二硝基苯肼/ml

38℃水浴保温19min 0.75mol/L

NaOH/ml

观察结果

1 0.5 0.5 0.5 3.5

2 0.5 0.5 0.5 3.5

3 0.5 0.5 0.5 3.5

五、思考题

实验中哪一发酵管生成的气泡最多？哪一管最后生成的颜色最深？为什么？

￥

5.9

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生物化学实验糖酵解中间产物的鉴定

生物化学实验——糖酵解中间产物的鉴定

一、实验目的

了解糖酵解过程的某一中间步骤及利用抑制剂来研究中间代谢的方法。

二、实验原理

利用碘乙酸对糖酵解过程中3-磷酸苷油醛脱氢酶的抑制作用，使3-磷酸苷油醛不再向前变化而积累。硫酸肼作为稳定剂，用来保护3-磷酸苷油醛是不自发分解。然后用2，4-二硝基苯肼与3-磷酸苷油醛在碱性条件下形成2，4-二硝基苯肼-丙糖的棕色复合物，其棕色程度与2-磷酸苷油醛含量成正比。

三、仪器 原料和试剂

（1）仪器：试管（1.5×1.5cm）、吸量管（1ml、、2ml3ml）、恒温水浴、烧杯（50ml）。

（2）原料：新鲜酵母。

（3）试剂：

①2，4-二硝基苯肼：0.1g2，4-二硝基苯肼溶于水100ml 2mol/L盐酸溶液中，贮于棕色瓶中备用。

②0.56mol/L硫酸肼溶液：称取7.28g硫酸肼溶于50ml水中，这时不会全部溶解，当加入NaOH使pH达7.4时则完全溶解。此液也可用于水合肼溶液配制，可按其分子浓度稀释至0.56mol/L，此时溶液呈碱性，可用浓硫酸调pH至7.4即可。

③5%葡萄糖溶液。

④10%三氯乙酸溶液。

⑤0.75mol/LNaOH溶液。

⑥0.002mol/L碘乙酸溶液。

四、操作步骤

（1）取小烧杯3只，分别加入新鲜酵母0.3g，并按下表分别加入各试剂，混匀。