现在有色谱纯乙酸 纯度为99.5% ，要配置0.08%的乙酸，该怎么配呢

所谓的分析纯等是指试剂的纯度级别，也就是作为试剂的一种含量与纯度的区别。而试剂往往是小瓶包装，通常为500g/瓶。分析纯是指做分析测定用的试剂，杂质非常少，不妨碍分析测定；化学纯是指一般化学试验用的，有较少的杂质，也不妨碍实验要求；而色谱纯是指进行色谱分析时使用的标准试剂，在色谱条件下只出现指定化合物的峰，不出现杂质峰。而且对于化学纯，分析纯，优级纯，不同的产品要求往往也不一样。

1、食醋的主要成分，食醋以醋酸溶液为主

2、醋精一般是指浓度比较高的食醋，也是醋酸溶液通常为30%

使用时要加水稀释。

据中国国内文献报道，酸性橙II的测定方法有纸层析法和分光光度法等，这些方法操作时间长，定量精度差。经过大量实验摸索，建立了高效液相色谱（HPLC）法测定食品中酸性橙Ⅱ的方法，本方法快速、准确，适用于食品中合成食用色素与非食用色素酸性橙II的同时测定。

原理：食品中非食用色素酸性橙Ⅱ经提取制成水溶液，注入高效液相色谱仪，经反相色谱分离，根据保留时间定性，采用外标法进行定量。

仪器：高效液相色谱仪:Waters515泵，Waters紫外可见波长检测器，KQ-100DB型数控超声波清洗器，离心机。

试剂：重蒸馏水、乙酸、甲醇（色谱纯）、聚酰胺粉（过200目筛）、乙酸铵溶液（0.02mol/L）、柠檬酸溶液、无水乙醇-氨水-水溶液。酸性橙Ⅱ:美国Aldrich公司柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄:国家标准物质中心。

酸性橙Ⅱ标准溶液：准确称取干燥的酸性橙标样0.1000g，蒸馏水溶解，定容至100ml，此溶液1ml含1.00mg酸性橙Ⅱ。临用时，用蒸馏水稀释至1ml含10mg的酸性橙Ⅱ标准使用液。混合着色剂标准溶液:准确称取按其纯度折算为100%质量的柠檬黄、日落黄、苋菜红、胭脂红、酸性橙Ⅱ各0.100g，置100ml容量瓶中，加pH6水到刻度，配成水溶液（1.00mg/ml），临用时，用水稀释经0.45μm滤膜过滤，配成每毫升含各种标准物质10μg的混合着色剂标准使用液。

高效液相色谱参考条件

色谱柱：Diamonsil TM （钻石）C 18 5μm，200mm4.6mm色谱柱（迪马公司产品）；

流动相：甲醇（A）：0.02mol/L醋酸铵（B）；

流速：1.0ml/min，梯度洗脱如表1所示；

进样量：20μl；

柱温：室温；

紫外可变波长检测器：λ=484nm。

试样制备及测定

结果判断示意图液体样品：饮料实验前，对于含二氧化碳试样应预先加热驱除二氧化碳；配制酒类加热驱逐乙醇，可不经稀释，过0.45μm滤膜后测定。

固体样品：糕点类、卤制品类、灌制品类、辣椒面等样品，称样5.00～10.00g，粉碎混匀，加无水乙醇-氨水-水（70+1+29）溶液20ml，振摇0.5h，过滤，洗滤渣2次，合并滤液，用水（pH=6）定容，过0.45μm滤膜测定。

奶制品：可称量5.00g试样，按GB5009.23-2003聚酰胺吸附法提取色素，经0.45μm滤膜过滤测定。

色谱条件对测定的影响：酸性橙II在波长484nm测定，样品中常见的苯甲酸、山梨酸、糖精钠、咖啡因、维生素C、乙酸、柠檬酸等（1mg/ml）在可见波长下无响应，不干扰测定。

流动相的选择：采用甲醇+醋酸铵体系作流动相，试剂价格便宜、易得，采用梯度洗脱可以同时测定柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄。

线性范围：对酸性橙Ⅱ在0.00～200μg/ml的范围内配制标准溶液系列9点，每标样进3针，以标样的峰面积的平均值为纵坐标，以标样的浓度为横坐标，绘制标准曲线，并利用最小二阶乘法进行线性回归，得到在0.00～100μg/ml范围内的线性方程为:A=85339.63C+105139.37，相关系数r=0.9997，酸性橙Ⅱ的检出限为0.05μg。柠檬黄、苋菜红、胭脂红及日落黄在0.00～50μg/ml范围内的线性方程分别为:A=74329.36C+5351.26，相关系数r=0.9987A=85428.98C+125212.42，相关系数r=0.9982A=85268.23C+112145.94，相关系数r=0.990A=929123.47C+152372.68，相关系数r=0.9972。

精密度：将酸性橙II试样（卤鸡爪）溶液应用本方法分别连续进样8次（n=8）。可以看出此方法精密度高，其变异系数为5.91%。

检出限：进样量10.0μl，酸性橙II的最小检出量为0.10μg，结果相对允许偏差<10%。

1、气相色谱法

该方法是在GB/T 5009.121-2003《食品中脱氢乙酸的测定》标准方法 上进行改进：将样品酸化后，用乙醚提取脱氢乙酸后浓缩，用气相色谱（附 氢火焰离子化检测器）进行分离测定，与标准系列比较定量。

1.1 实验部分

1.1.1 仪器与主要试剂

气相色谱仪：GC-2010（附氢火焰离子化检测器 FID），日本岛津公司。

脱氢乙酸标准品：纯度≥99.6%，购自美国。

乙醚：色谱纯，重蒸。

丙酮：色谱纯，重蒸。

脱氢乙酸标准工作溶液：准确称取脱氢乙酸标准品50mg，以丙酮溶解 定容于50mL容量瓶中，再以丙酮分别稀释至1μ g/mL、10μ g/mL、40μ g/mL、 80μ g/mL 120μ g/mL、160μ g/mL 200μ g/mL，配制标准工作溶液。

色谱条件：

色谱柱：DB-5 毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μ m）；

分流比：10：1，柱流速1.0mL/min

进样口温度：250℃、检测器温度：300℃、柱温165℃；

气流条件：氢气50mL/min、空气400mL/min、氮气40mL/min。

应用上述色谱条件，脱氢乙酸标准品溶液进样，色谱图如下：

1.1.1 样品处理 称取5～10g 试样（准确至0.0001g），加10mL 饱和氯化钠溶液，2mL 盐酸溶液（1+1）酸化，分别以50mL、20mL、20mL 乙醚提取三次，合并乙 醚层于100mL 容量瓶中定容后，分别用20mL 饱和氯化钠溶液、50mL 碳酸 氢钠溶液（10g/L）各洗涤一次，加10g 无水硫酸钠，室温下放置30min， 取 50mL 在 60℃水浴下用旋转蒸发仪浓缩至近干，用丙酮定容后供气相色谱测定。

1.1 方法讨论

1.1.1 色谱条件的选择

脱氢乙酸用气相色谱法测定，与其他同类功能的防腐剂如山梨酸、苯 甲酸、对羟基苯甲酸酯类都有很好的分离度，且在非极性柱、弱极性柱和 极性柱中都有很好的响应值。但在实验显示，脱氢乙酸在非极性柱中因低 柱温有色谱峰拖尾现象，在极性柱中因柱流失有基线漂移现象，为使定性 定量准确，选用了弱极性柱DB-5。

1.1.1 线性关系

在本实验条件下，脱氢乙酸标准工作液在 0.5～100μ g/mL 范围内与 响应值峰面积有良好的线性关系，相关系数 r=0.99995。脱氢乙酸的最低 检出浓度为0.2μ g/mL。

1.1.1 准确度与精密度

选用含脱氢乙酸的辣椒酱样品，在样品中添加不同浓度的脱氢乙酸标 液，按本方法测定，每一浓度重复测定6 次，取平均值，计算平均回收率 及变异系数，结果见下表。实验结果显示，本方法回收率满意，相对标准 偏差范围小于10%，重复性好，符合检测要求。

加标浓度（mg/kg） 平均回收 率（%） 精密度 RSD（%）

1.0 83.2 6.8

5.0 89.6 5.6

10.0 90.3 4.7

30.0 91.6 3.6 50.0

102.4 3.4

2、液相色谱法

该方法是在GB/T 23377-2009《食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱 法》标准方法上进行改进：用氢氧化钠溶液提取试样中的脱氢乙酸，经脱 脂、去蛋白处理后，用高效液相色谱紫外检测器测定，与标准系列比较定 量。

2.1 实验部分

2.1.1 仪器与主要试剂

液相色谱仪：LC-1260（二级管阵列检测器 DAD），美国安捷伦公司。

脱氢乙酸标准品：纯度≥99.6%，购自美国。

甲醇：色谱纯。

乙酸铵溶液（0.02mol/L）：分析纯，称取1.54g 乙酸铵用氨水（1+1） 调节pH 至9.0，加水至1000mL 溶液，经0.45μ m 滤膜过滤。

2.1.2 色谱条件

色谱柱：ECOSIL-C18 柱 （5μ m，250mm×4.6mm）；

流动相：甲醇+0.02mol/L 乙酸铵（5+95，v/v）

流速：1.0mL/min

柱温：40℃

检测波长：293nm

应用上述色谱条件，脱氢乙酸标准品溶液进样：

2.1.3 样品处理

称取 5～10g 试样（准确至 0.0001g），加 50mL 水，用氢氧化钠溶液 （8g/L）调节 pH 至 7.2，加入 5mL 乙酸锌溶液（220g/L），5mL 亚铁氰化 钾溶液（106g/L），超声提取 40min，定容至 100mL，静置 30min 过 0.45 μ m 滤膜，供液相色谱测定。

2.2 方法讨论

2.2.1 色谱条件选择

在GB/T 23377-2009 国标方法中，流动项的选择为甲醇+0.02mol/L 乙 酸铵（10+90，v/v）。在实际样品的检测中，考虑到食品中其他添加剂对 于脱氢乙酸检测（如山梨酸、糖精钠等）的影响，能过对不同比例流动相 的实验，发现流动相比例为甲醇+0.02mol/L 乙酸铵（5+95，v/v）优于国标方法条件。

2.2.2 线性关系

在本实验条件下，脱氢乙酸标准工作液在 0.5～100μ g/mL 范围内与 响应值峰面积有良好的线性关系，相关系数 r=0.99999。脱氢乙酸的最低 检出浓度为0.1μ g/mL。

2.2.3 准确度与精密度

参照 1.2.3，选用同一辣椒酱样品，按本方法测定，做加标实验，每 一浓度重复测定6 次，结果见下表。实验结果显示，本方法回收率满意， 相对标准偏差范围小于10%，重复性好，符合检测要求。

3、气相色谱质谱联用法

目前尚无气相色谱质谱联用测定食品中脱氢乙酸的国标方法，根据本实验室进行实验建立的方法：试样经乙醚提取，用气相色谱进行分离，特征离子峰进行定性定量。

3.1 实验部分

3.1.1 仪器与主要试剂

气质联用仪：GCMS-7890A-5975C，美国安捷伦公司。

脱氢乙酸标准品：纯度≥99.6%，购自美国。

正已烷：分析纯。

乙醚：色谱纯，重蒸。

脱氢乙酸标准工作溶液：准确称取脱氢乙酸标准品50mg，以乙醚溶解 定容于50mL容量瓶中，再以乙醚分别稀释至1μ g/mL、10μ g/mL、40μ g/mL、 80μ g/mL 120μ g/mL、160μ g/mL 200μ g/mL，配制标准工作溶液。

3.1.2 色谱条件

载气：高纯氦气（99.999%）；

色谱柱：DB-5MS 毛细管柱（30m×0.25mm×0.25μ m）；

柱流速：1.0 mL/min；

汽化室温度：250℃、柱温程序：初始温度 150℃，保持 0.5min，以 10℃/min 速率升温至180℃，保持6min。

3.1.3 质谱条件

传输线温度：220℃；离子源温度：200℃；离子化方式：EI；电子能 量：70eV；延迟时间 2.0 min；

检测方式：全扫描，质量范围：m/z 25～ 300。

应用上述质谱条件，脱氢乙酸标准品溶液进样，

质谱图如下：

3.2.1 样品处理 称取5～10g 试样（准确至0.0001g），加35mL 水、2mL 氢氧化钠溶液 （20g/L），超声提取20 min，用水定容至50mL，加10mL 正己烷提取一次， 弃去正己烷层，再加1mL 盐酸（1+1）酸化，准确加入10mL 乙醚振摇5min， 静置10min，取上清液供质谱测定。

3.2 方法讨论

3.2.1 质谱条件的选择 根据脱氢乙酸在气相色谱上的良好响应情况，用质谱测定时，仍选用 的弱极性柱 DB-5MS 柱。检测方式选择全扫描、选择离子扫描皆可，本文选择了全扫描。

3.2.2 线性关系

在本实验条件下，脱氢乙酸标准工作液在 0.5～100μ g/mL 范围内与 响应值峰面积有良好的线性关系，相关系数 r=0.99997。脱氢乙酸的最低 检出浓度为0.2μ g/mL。

3.2.3 准确度与精密度 选用同一辣椒酱样品，按本方法测定，做加标实验，每一浓度重复测 定6 次，结果见下表。实验结果显示，本方法回收率满意，相对标准偏差 范围小于10%，重复性好，符合检测要求。

4、结论探讨的三种方法，分离度好，回收率较好，都是食品中脱氢乙酸 含量的良好检测方法。相比较而言，气相色谱法与干扰物质的分离度好， 但样品前处理较复杂；液相色谱法样品前处理简便，特征峰定性较差；气 相色谱质谱联用法样品前处理较气相色谱法简便，定性较色谱更精准。 引用文件： GB/T 5009.121-2003《食品中脱氢乙酸的测定》； GB/T 23377-2009《食品中脱氢乙酸的测定 高效液相色谱法》。

试剂分类大致有 化学纯-分析纯-优级纯-色谱纯-光谱纯，是按照纯度分类的；而级别，化工级、药用级、食品级，是按照产品的使用级别分类的。

USP Grade，是美国药典级，即列入美国药典的标准品或试剂。

化工原料：

化工原料一般可分为三大级别：食品级化工原料、工业级化工原料、医用级化工原料。这三种级别分化的主要依据是化工原料本身的纯度。

纯度最高的是医用级化工原料，其次是食品级化工原料，最后是工业级化工原料。一般来说可以使用高纯度的化工原料替代低纯度的化工原料，但是低纯度的化工原料不可替代高纯度的化工原料。不过要综合考虑到生产的成本问题，很少有厂商会使用以高替低的这种生产方法。

化工原料种类很多，用途很广，化工原料一般由硫、钠、磷、钾、钙等成分组成。化学品在全世界有500～700万种之多，在市场上出售流通的已超过10万种，而且每年还有1000多种新的化学品问世，且其中有150～200种被认为是致癌物。

每一种化工原料的级别都不是固定的，而是根据不同化工原料的原料质量、生产工艺等所决定的。比如A医药级别化工原料的纯度需要在90%以上，而B医药级别化工原料的纯度则需要在95%以上。

超纯水冲洗柱——流动相分离样品——超纯水冲洗柱 ——纯乙睛保存柱

1． 电源准备

打开稳压器电源开关，须待电压指示至 220V 后，才能开启其他有关设备。

2． HP1100 高效液相色谱仪的准备

试剂：三氟乙酸

乙腈(Fisher 公司产品色谱纯)

超纯水(Millipore 超纯水)

冰乙酸

溶液配置：贮液瓶与流动相的准备

A 液 0.1%三氟乙酸 （三氟乙酸 1ml，超纯水 999ml）室温保存

B 液 60%乙腈 （乙腈 600ml， 超纯水 400ml）室温保存

样品液 0.01%乙酸 （冰乙酸0.01ml，超纯水 100ml）室温保存

泵头冲洗液：精滤后超纯水或者是 1%色谱纯甲醇 室温保存

注：贮液瓶应用超纯水清洗干净，备用。

流动相溶剂用洁净硼砂漏斗精滤除去微小颗粒。

操作者必须清楚并注明 A、B 贮液瓶盛装为何种溶剂。

冲 洗 泵 头 ： 用 注 射 管 于 软 塑 料 管 末 端 抽 吸 至 有 水 流 出 ， 调 节 流 速 开 关 控 制 流 速 为20-30drop/min.。

① 流动相管道排气

如果管道中气泡较多，可通过弹击管道，排除气泡，并逆时针旋转脱气泵活塞使其松动，用注射管于流动相出口的塑料管末端抽吸至管道内气泡排除完全。操作时，我们通常已经打开了脱气机（气泡严重影响分离效果，所以观察管道中液体是否有气泡非常重要。）

② 开机

③ 进入 HP1100 操作系统

a.双击 WIN-95 操作界面中左下角 Instrument 1 online 图标，进入 HP1100 工作站软件操作界面。单击工作站操作界面上方 Run control 菜单，在下拉菜单中找到 Sample Info 子菜单，单击。在 Sample Info 信息框内定义操作者、样品前缀及编号、保存路径等参数。在保存路径项下，将可定义子目录分别输入操作者拼音缩写，以方便检索时互不干扰。

b.等待工作站操作界面中泵、柱温箱、检测器各指示图标由灰色转变为绿色后，单击泵、检测器各图标可从其各自弹出的菜单中设定流动相各溶剂比例、流速等。

（1）

乙腈(色谱纯)

甲醇(色谱纯)

乙腈(色谱纯)

甲酸

乙腈HPLC

缓冲液PH7.00+-0.02

硝酸根测试试剂

胰蛋白胨大豆琼脂

缓冲液PH4.00+-0.02

缓冲液 PH10

硝酸

MLB肉汤

缓冲液 PH7

正已烷

HPLC级乙酸乙酯

85%磷酸

缓冲液PH10.00+-0.5

氢氧化钠标液0.1mol/L

乙腈

异丙醇

丙酮(农残级）

正已烷(梯度级）

正己烷(色谱级)

四氢呋喃（色谱）

37%盐酸

HPLC级乙醇

Noble Sparks材料

Golden Sparks材料

氢氧化钠溶液1N

盐酸 1N

HPLC级乙腈

硝酸

乙酸乙酯

库仑法试剂(有隔膜专用)

磺酸三氟甲烷

缓冲液 PH4

MLA琼脂

硼酸

甲苯HPLC

乙酸乙酯

马钤薯葡萄糖琼脂

枯草芽孢

脱氧胆酸钠

二甲基甲酰胺

缓冲液PH9.00

乙醇

卡尔费休单组分滴定剂

四氢呋喃

丙酮

65%硝酸

二异丙胺

乙腈 色谱纯

胰蛋白大豆肉汤

正己烷（色谱纯）

吐温20

农残级丙酮

大豆卵磷脂

100%冰醋酸

奈斯勒氏试剂

均苯四甲酸二酐

盐酸0.1N

正己烷

二氯甲烷(液相色谱)

余氯药片

优级纯硫酸95-97%

高氯酸

PH浓缩液pH 12.00 ± 0.05

96%硫酸

氯仿

硝酸

四乙基硼酸钠

苯甲酸

异丙醇

25%氨水

2,8-二甲基-萘并[3,2,1-KL]占吨

1,8二氮杂-双环-十一烯-7

硝酸纤维膜

氢氧化钠

马铃薯葡萄糖琼脂

硝酸银浓缩液

HPLC级纯水

库仑法试剂(无隔膜专用)

氢氧化钠片(优级纯)

32%氨水

HPLC级甲醇

麦康凯琼脂

硼标准液1000mg/L

二氯甲烷

橙色血清琼脂

活性氧DPD试剂

丙三醇

电极保存液

光谱纯溴化钾

氯三甲基硅烷

月桂基硫酸盐肉汤

硫代硫酸钠标液

邻苯二甲酸氢钾基准

硫代硫酸钠标液0.1mol

氯化钠