苏木精染液配置时加入的硫酸铝钾起什么作用
苏木精染液配置时加入的硫酸铝钾起媒染作用。
添加氧化汞,能使氧化汞完全分解于苏木素液中,又不会很快完全氧化,使染液一直处于染色力最强的三氧化苏木素状态,达到Harris苏木素染液长期最佳使用效果。硫酸铝钾起媒染作用(媒染剂:凡能与染料与组织结合,生成色淀,并促进染色的金属离子盐类或金属原子的含氧酸)。
原理
易于被碱性或酸性染料着色的性质称为嗜碱性( basophilia )和嗜酸性( acidophilia );而对碱性染料和酸性染料亲和力都比较弱的现象称为中性(neutrophilia)。
构成组织内蛋白质的氨基酸的种类很多,它们有不同的等电点。在普通染色法中,染色液的酸碱度为pH6左右,细胞内的酸性物质如细胞核的染色质、腺细胞和神经细胞内的粗面内质网及透明软骨基质等均被碱性染料染色,这些物质称为嗜碱性。
铁苏木素染色主要用于各种阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊的鉴定。
铁苏木素染色方法:
用竹签挑取粪便少许,按一个方向在洁净的载玻片上涂成薄粪膜,立即放入60℃的肖丁固定液2分钟。依次将标本放入碘酒精、70%及50%酒精中各2分钟,用蒸馏水洗1次。再置于40℃2%铁明矾溶液2分钟,流水冲洗2分钟,放入40℃0.5%苏木精溶液中染色5~10分钟,再流水冲洗2分钟,放入冷2%铁明矾溶液中退色2分钟。将载玻片置显微镜下检查退色情况(观察时勿使玻片干燥),如颜色偏深,应继续退色,直至核膜、核仁均清晰可见为止。然后,流水冲洗15~30分钟,至标本显现蓝色,再用蒸馏水洗1次。继而,依次在50%、70%、80%、95%酒精(2次)中逐渐脱水各2分钟。在二甲苯中透明3~5分钟后用中性树胶封片。染色后,原虫胞质呈灰褐色,胞核、包囊内的拟染色体及溶组织内阿米巴滋养体吞噬的红细胞均被染成墨色,糖原泡则被溶解呈空泡状。
染色试剂准备/铁苏木素染色:
苏木精染液的配制
苏木精粉10g,溶于95%酒精100ml中,装入250ml大口玻瓶内,加塞置室温中6~8周,使之充分氧化。如将玻瓶晒于阳光下,每日振摇,可加速成其氧化,便于应急使用。氧化成熟的染液滴于水中呈鲜艳紫色,未氧化成熟染液则呈淡红或红紫色。此为原液,使用时,按1∶19加蒸馏水配成0.5%染液,此染液可保存3~6个月。
碘酒精配制
先用碘化钾10g溶于100ml蒸馏水中,再加结晶碘5g,溶解后贮于棕色瓶中,该液即为卢戈碘液。在70%酒精中加数滴卢戈碘液即为碘酒精。2%铁明矾溶液配制:硫酸铁铵2g,溶于100ml蒸馏水中,临用前配制。
肖丁固定液配制
饱和氯化高汞水溶液2份加95%酒精1份配成100ml,用前再加冰醋酸5ml,并加热至40℃。
1、组织固定于 10%福尔马林固定液,常规脱水包埋。2、切片厚 6μm,常规脱蜡至水。3、天狼星红染色液滴染 1h。4、流水稍冲洗,去除切片表面染液。5、Mayer 苏木素染色液染细胞核 8~10min。6、流水冲洗 10min。7、常规脱水透明,中性树胶封固。