课程设计是否需要集中答疑
课程设计需要集中答疑。课程设计包含以下方面：
一、课程计划
课程计划由教学科目的设置、学科顺序、课时分配、学年编制与学周安排这几个部分构成，其中教学科目的设置是课程计划要解决的首要问题。课程计划体现了国家对学校教育的统一要求，是学校组织教学工作、确定工作步调的依据，是指导教师进行教学和其他活动的依据。
2、课程标准
课程标准规定了学科的教学目的与任务，知识的范围、深度和结构，教学进度以及有关教学法的基本要求。课程标准由前言、课程目标、内容标准、实施和建议附录这五部分组成，且课程目标，即课程本身要实现的具体目标和意图，是课程计划的核心。
3、教材
教材是教学的材料。教材一般由目录、课文、习题、练习、实验、图表、注释、附录等分部分构成，其中，课文是教材的主体部分。除教科书以外，各类指导书、补充读物、工具书、挂图、图表、其他教学辅助用具、教学程序软件包、幻灯片、电影片和音像磁盘等都可以是教材。
课题设计三个重要环节需要把握：
1、需求分析环节，需求分析是一切课程包括项目的源头，没有结构化的、有逻辑的需求分析，就没有后面的一切内容，企业所有的培训都应该是基于企业的战略和业务出发的，需求分析不做或者做不透，就会出现很多的老师讲的都是自己擅长的，而不是企业需要的内容。
2、学习目标制定环节，学习目标制定是学习内容开发与设计的核心环节，决定了内容的取舍和应该用什么样的教学活动和测试方式。课程学习目标制定当中出现“了解、掌握、熟悉、认识”等等模糊不清的学习目标，学习目标不清晰，最直接的体现就是最后的成果产出也是不清晰的。
3、验证评估环节，验证评估环节是课程设计当中重中之重的环节之一，如何证明你的学员在课堂上或者是课后学会了你的内容，会在实际工作当中运用课堂当中的内容，这些都是需要在课程设计当中就应该设计进去的。
以上内容参考：百度百科--课题设计
装修单位施工员参与设计答疑。进行施工图会审，整理图纸疑问，参与图纸会审，根据合同和现场情况编制施工总进度计划、施工方案等，并负责对每一个分项工程进行技术交底，督促施工材料、设备按时进场，并处于合格状态确保工程顺利进行。
Q:如何选择转染方法和转染试剂？
A:我们的siRNA适用于各种转染方法。转染方法和转染试剂的选择，需要根据细胞来选择，对于容易转染的细胞，常用的转染方法是脂质体转染。
Q:对于难转染的细胞，应该如何提高其转染效率？转染效率又该如何确定？
A:1)对于贴壁细胞，推荐采用转染试剂转染即可；2)对于难转染的细胞的转染，如何提高转染效率的问题也是目前研究的技术难题。一般建议使用电转的方法，但是由于电转的方法对细胞损伤比较大，该方法也未必是最佳的。
转染效率的确定，常用的是使用荧光标记的siRNA，通过荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪检测的方法。具体可以参考我们的产品说明书。
Q:细胞的转染效率是否与siRNA序列相关？
A:转染效率的高低取决于与细胞自身及转染方法，而于siRNA的序列并没有直接关系。因此，siRNA在不同的细胞转染效率可能不一样。
Q:转染siRNA时候的细胞密度多少为宜？
A:依不同的转染方法或转染试剂而定。如使用lipofectamine 2000作为转染试剂，单独转染siRNA，30%～50%密度较佳；而siRNA与质粒共转染，密度可以到80%-90%。
Q:siRNA转染时的培养基要求，可否含血清？
A:不同的转染试剂可能有不同的要求，对于lipofectamine 2000，在配制siRNA和lipofectamine 2000混合物时不能含有血清，但细胞培养基可以含有血清，但不能含有抗生素。
Q:siRNA的储存液体浓度和工作浓度有何区别？
A:siRNA的贮存浓度就是保存的最佳浓度，锐博推荐的贮存液浓度为20 μM；而siRNA的工作浓度就是使siRNA能够达到最佳沉默效果的转染浓度，一般10～100 nM范围内，锐博生物推荐的转染浓度是50nM。
Q:转染时该如何分组？分组的目的是什么？
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Q:为什么说阳性对照在RNA干扰实验中很重要？
A:阳性对照作为一个实验系统检查是很重要的。也就是说，当您看到siRNA阳性对照的预期实验结果时，您能确保在您的实验方法中您的转染、RNA提取物和检测方法是可靠的。
Q:阳性对照及其阴性对照在RNAi实验中的作用？如何选择？
A:阳性对照指的是已经验证的针对看家基因或报告基因有效的siRNA，用于监测实验体系和实验方法的可行性。我们可以提供的阳性对照siRNA有针对GAPDH，ACTB，GFP/EGFP有效的siRNA作为阳性对照，客户可以根据具体的实验需要选择。阴性对照往往是非特异的siRNA，主要用于说明siRNA作用的特异性。阴性对照的选择可以是通用的序列（universal）或是随机打乱的序列（scramble），客户可以根据实验要求选择。
Q:用荧光对照siRNA如何检测转染效率？是不是每次实验都必须做？
A:我们提供的转染对照siRNA带有Cy3或Cy5荧光标记，可以通过荧光显微镜，共聚焦显微镜，流式细胞仪等荧光检测仪器检测。 除此之外，还应该通过阳性对照实验进一步确定。转染效率的高低主要与细胞自身相关，同等实验条件下，每次转染细胞转染效率应该是相近的，因此可以不必每次都做。但如果每次实验都做一个荧光对照组，将会更加便于排除一些实验问题。
Q:siRNA荧光染料的最大吸收率和发射率各在哪个波段？
A:FAM在495nm处有最大吸收率，在520nm处有最大发射率。
Cy3在550nm处有最大吸收率，在565nm处有最大发射率。
Cy5在643nm处有最大吸收率，在667nm处有最大发射率。
Q:转染后出现细胞死亡是什么原因？如何优化转染条件？
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Q:到了转染时间发现细胞密度太低，该如时转染还是让细胞多长一天再转染？
A:细胞生长需要一定的密度，而转染试剂对细胞有一定的毒性，如果转染时细胞密度过低，细胞可能会因此生长异常甚至死亡。转染前要求良好的细胞状态和细胞活性，一般也不建议用生长几天的细胞做转染。
Q:siRNA的作用效果应该如何检测？
A:通常可以从三个方面来相互验证siRNA的作用效果
3）根据目的基因的功能，从细胞表型的水平检测。
Q:siRNA在细胞内可以作用多长时间？什么时候才是最好的检测时间？
A:siRNA介导的RNAi属于瞬时现象，不能稳定传代，一般其作用时间不可能维持很长时间，通常建议在转染后3 4天内完成检测。最佳检测时间，因细胞、目的基因而异，多在转染后24 48小时之间检测。
Q:为什么要强调mRNA水平检测？可以直接检测蛋白和功能吗？
A:siRNA直接作用于mRNA，因此mRNA水平检测是最直接在指标。
很多客户认为，mRNA的降解直接的结果应该是对应蛋白质含量的下降，因此蛋白水平的检测结果也应该可以作为有效性的检测指标。事实上，很多情况下往往出现，mRNA下降水平与蛋白下降水平不对应的现象。其可能原因有：
Q:干扰效率多高才是好的靶点？
A:没有明确的界定，干扰效率高低因不同的细胞类型和不同的基因而异。不同细胞类型的转染效率也不尽相同，不同基因的表达水平也相差较大，主要看干扰效果而定。
Q:沉默效果不理想，应该如何处理？
A:最常见的影响沉默效果的两个原因是：转染效率低和siRNA序列设计的效果不理想。如果您初次使用siRNA或采用了新的细胞系，并发现沉默效果不佳，我们建议您对转染效率进行检测，并选择优化转染条件。如果您已经对实验转染条件进行优化但是问题依然存在，我们建议您换用另一种转染试剂或是采用其他技术，这也许能提高转染效率。如果已经提高了转染效率但是沉默效果仍然未达到要求，可能是因为siRNA序列设计的效果不理想。
Q:siRNA反而使得目的基因表达上调了，这是什么原因？该怎么解决？
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Q:我从阴性对照实验中得到和特异性RNAi相同的结果，这说明了什么？
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Q:各组阴性对照的检测结果是否应该一样？如果偏差很大该怎么办？
A:正常情况下，各组阴性对照的检测结果应该是相近的。如果偏差过大，只需考虑实验结果的准确性。另外，对于一些特定的基因，比如与细胞难受压力相关的基因，又如参与细胞免疫的基因，可能会对外界压力比较敏感，使得各组对照的基因表达发生变化不一致。
Q:用100nM 的siRNA转染时只得到50%沉默效率，我可以把siRNA的浓度增加到200nM甚至400nM吗？
A:当干扰效率不佳时，可以在一定范围内适当优化转染浓度，通常优化的范围是10~150nM，但不宜过大，高浓度的siRNA将可能增加非特异性作用的可能性并对细胞产生毒性。
Q:同样的siRNA，为什么在细胞A很有效，在细胞B则没有效果？
A:不同细胞的转染效率不一样、基因表达水平也不一样，这些都与siRNA的作用效率有关
siRNA实验方法和设计常见问题解答- 答疑集锦- 非编码RNA研究策略-锐博技术专题专题—丁香园会议频道 (dxy.cn)
但是，建筑总平面图这张图纸必须与基地坐标一致，查看坐标可以在建筑总平面图上查看，其他图纸不建议量取坐标。
比例问题就比较严重了，建筑图纸中的标注都是按照实际尺寸标注的，无论是坐标还是长度角度，无论多少比例的图纸，都严禁在蓝图上用尺量的方式进行测量，图纸中未表达的尺寸及坐标应在施工说明或备注中寻找相关信息，如果没有，应该向设计院请求答疑补充。
