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转录组测序和表达谱测序的区别是什么

鳗鱼康乃馨
简单的含羞草
2023-01-27 13:00:48

转录组测序和表达谱测序的区别是什么

最佳答案
温柔的大地
敏感的月饼
2026-04-27 13:23:08

转录组测序和数字表达谱测序相比,主要有如下不同:

第一,测序目标不同。

转录组测序可以测定特定组织中全部mRNA,而表达谱测序只是测定mRNA的酶切标签序列(21 bp)。

第二,代表性不同。数字表达谱测序只测定21bp序列,而转录组测序测定转录本全长,因而可以更准确地代表样品转录表达情况。

第三,应用范围不同。转录组测序应用范围广泛,不仅可以检测表达量差异,而且可以发现新的转录本和可变剪切等。而表达谱测序只能粗略检测表达量差异,不能反映基因转录表达的特点和规律。

第四,参考序列要求不同。转录组测序不仅可以适用于基因组序列已知的物种,而且也适用于基因组序列未知的物种。而表达谱测序只适用于基因组序列已知的物种。因此,对于想要检测表达量差异的客户,我们推荐进行转录组测序,以获知更精确的转录组信息。

最新回答
甜蜜的羽毛
雪白的翅膀
2026-04-27 13:23:08

CRISPR-CAS在进化中不是为基因编辑而生的,而是一个敌我识别的免疫系统,它的切割不是那么精确,只要不误伤细菌自己的DNA就算完成任务了。用于基因编辑的难度,就像用青龙偃月刀做手术。

所以,在实用中,CRISPR-CAS有几个问题,第一是它对靶点的结合不精确,它的识别序列是20bp,面对整个基因组的所有类似序列来说不怎么长。碱基匹配就是个氢键生成的化学平衡,ΔH越大匹配概率越大,而识别序列的长度就限制了找到相似序列的概率下限和焓变的上限,也就限制了脱靶概率的下限。结合时的检测就不像真正的人类复制转录翻译酶系那么精确,可能会跑到本来不想要它结合的序列上面去。中国科学家编辑人类胚胎的尝试就发现了很多非特异性切割,造成了一大堆乱七八糟的突变。

第二是识别序列以后的切割操作并不精确。因为CRISPR-CAS不是哺乳动物酶系,跟人类DNA修复系统缺乏配合,所以操作以后留下的序列是非常随机的,根本无法预测会切割在哪里。根据我们实验室的测序结果来看,CRISPR-CAS处理后靶序列的缺失位置变化非常大,从21bp的巨大缺失,到根本无变化的都有,实际编辑位点左右偏移可以达到20bp,有的造成frame shift,有的只缺失1个或几个氨基酸,有的是一个或数个点突变,有的根本没变化。而因为人类基因有两个拷贝,这两个等位基因不是同时被切割的,有可能只切割一个,另一个还是原样,也有可能两个都切割了,但位点和产生的序列还各自不同。

第三是对切割位点进行精确编辑非常困难。前面已经说了CRISPR-CAS的切割位点十分混乱,而且编辑是依靠引入一段外源DNA同源修复,但它跟人类DNA修复系统缺乏配合,所以外源DNA能参与修复的可能性很小,位置很不明确,而且修复结果也差强人意。

有了这些问题,用于做实验、制造细胞系和转基因小鼠的话可以做十几个群落筛选,但用于医疗还是距离太远了

这是一个例子,来源WY Hwang et al. Heritable and Precise Zebrafish Genome Editing Using a CRISPR-Cas System. PloS one, 2013

从加亮序列就能看出编辑结果五花八门,很难控制。

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编辑于 2018-12-01

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现在才看到邀请,抱歉。其实我不是做这块的。

好吧,通俗会漏掉很多细节,我决定牺牲所有细节。

大家都知道人的遗传信息是DNA,如果DNA不正常了,可能人也会不正常。举个例子,我们以前生物都学过镰刀型细胞贫血症,镰刀型细胞贫血症是由于DNA链上一个脱氧核糖核苷酸发生了改变,导致了产生的血红蛋白中有一个位置的氨基酸由谷氨酸变成了缬氨酸,最终的结果就是血液里面红细胞形状跟正常的不一样,血细胞携氧能力下降,简单地说得了这个病,终生都需要输血,病人很痛苦。

那刚好现在出来了一个技术,叫基因编辑,简单说就是通过一个酶和一段引导序列,在DNA链上找出不正常的位点,通过剪切和同源重组来改变这个位点。回到刚才的例子,就是可以通过这个技术,把突变了的核苷酸又变回来,通过这样的方式就可以从根本上治疗这个疾病(当然这只是基因编辑很小的一个应用)。

那脱靶效应,说的是定位的问题,编辑一个基因,需要引导序列把要编辑的位置找出来,如果找错了,就是脱靶。脱靶的问题可大可小,严重的会影响其他重要基因的功能,轻微的可能会定位到没有基因的DNA位置上,可能对人没有什么影响。

除了伦理问题,脱靶效应引起的安全性问题是影响基因编辑技术应用的最重要原因,如果能把脱靶效应降低,甚至消除,就是相当于提高了这个技术的安全性。

好吧,牺牲了所有细节,还啰啰嗦嗦的。

发布于 2016-01-28

等待的猫咪
怕黑的微笑
2026-04-27 13:23:08
是两款不现的型号。

是两款不现的型号民,原先老款22ABP是国美销售的型号带钛金的,11DBP是渠道专供的不带钛金的,按功能来讲一样,但22ABP稍微好一些,因为带钛金功能的。TCL空调我觉得还可以,挺好用的,值得购买。炎热的夏季,即便待在室内也很热,这时候空调就有很大的作用了,调节到合适的温度,这样我们再也不会因为天气热而心情烦躁了。

阔达的季节
无辜的方盒
2026-04-27 13:23:08
当导入与目的基因编码区序列相同的双链RNA时,Dicer酶会将此双链RNA切割成21-23bp的短片段(称为siRNA),siRNA与多种蛋白质结合形成RNA诱导沉默复合体(RISC),此时其中的siRNA解旋形成单链RNA。RISC被活化后,活化型RISC受已成单链的siRNA引导,序列特异性地结合在胞内存在的目的mRNA上并将其切断成小片段,引发目的mRNA的特异性分解。这些断裂的小片段能够形成新的siRNA,进而形成RISC,这样就形成了一个级联放大反应,将细胞中的目的mRNA完全裂解。

炙热的戒指
魁梧的荔枝
2026-04-27 13:23:08

作用机制:病毒基因、人工转入基因、转座子等外源性基因随机整合到宿主细胞基因组内,并利用宿主细胞进行转录时,常产生一些dsRNA。宿主细胞对这些dsRNA迅即产生反应,其胞质中的核酸内切酶Dicer将dsRNA切割成多个具有特定长度和结构的小片段RNA,即siRNA。

siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链,继之由反义siRNA再与体内一些酶(包括内切酶、外切酶、解旋酶等)结合形成RNA诱导的沉默复合物。

RISC与外源性基因表达的mRNA的同源区进行特异性结合,RISC具有核酸酶的功能,在结合部位切割mRNA,切割位点即是与siRNA中反义链互补结合的两端。被切割后的断裂mRNA随即降解,从而诱发宿主细胞针对这些mRNA的降解反应。

siRNA不仅能引导RISC切割同源单链mRNA,而且可作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶作用下合成更多新的dsRNA,新合成的dsRNA再由Dicer切割产生大量的次级siRNA,从而使RNAi的作用进一步放大,最终将靶mRNA完全降解。

RNAi的临床应用

RNAi 机制可作为真核生物的基因组免疫系统 , 抑制外源和内源有害基因的表达。人类目前对病毒 ( 如 HIV) 所致疾病缺乏理想的治疗方法 , 如果利用 RNAi 技术把与病毒基因具同源性的 siRNA 引入感染细胞将会抑制病毒的增殖 , 这为病毒相关疾病的治疗提供了新的思路。

另外 , 利用 RNAi 技术还可以高效、特异、快速的抑制细胞内癌基因的表达 , 人类的许多癌症是由于少数癌基因超表达导致细胞过度增殖所致 , 如果利用 RNAi 技术抑制过度表达的癌基因将会使癌症表型逆转或病程得以控制。

可以预测 , RNAi 技术将会很快应用于癌症和病毒疾病的治疗 , 并可能会为这些疾病治疗带来突破。