| 中文名称 | 水浴摇床 | 外形尺寸 | 700×550×490 |
|---|---|---|---|
| 水箱尺寸 | 490×390×170、 | 温控精度 | 0.5℃ |
| 市场价 | 信息价 | 询价 |
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其产品可用于各大中院校、油化工、卫生防疫、环境监测等科研部门作生物、生化、细胞、菌种等各种液态、固态化合物的振荡培养。
1, 使用前请详细阅读本说明书。 2、 机器的工作平面不能过度平滑(例如瓷砖等)。 3、 用户提供的插座的电气额定参数应不小于本机的电气额定参数,并有良好的接地措施。 4、 整机严禁在阳光直射的环境中使用。 5、 调速应从低速向高速慢慢起动。 6、 机器在高速振荡时可能会有一定的移位,因此在使用时应有人看管。
1、 器具应放置在较牢固的工作台面上,环境应清洁整齐,通风良好。 2、 用户提供的电源插座应有良好的接地措施。 3、 严禁在正常工作的时候移动机器。 4、 严禁物体撞击机器。 5、 严禁儿童接近机器,以防发生意外。 6、 更换熔断器前应先确保电源已切断。 7、 使用结束后请清理机器,不能留有水滴、污物残留。
及时加水,注意关闭电源
如果水浴锅没水了,应该及时加水,注意在没水的情况下不要开启电源。
恒温水浴锅具有自动恒温作用,锅内水在充足的情况下,连续开48小时应该没关系,但锅内水源必须充足。如锅内水源本身就少,时间一久肯定会烧毁加热管,精达仪器建议还是关闭电源为好。
水浴锅别称气浴候温摇床,它是一种量度可控的候温气浴槽和振荡器相联合的理化仪表,水浴锅是社会各个生产单位作精细造就制备必不可少的一种试验室设备。
振荡器与摇床的区别:
摇床具有不锈钢万用夹具、数显控温、无级调速和良好的热循环功能,是一种多用途的生化器,是植物、生物、微生物、遗传、病毒、环保、医学等科研,教育和生产部门作精密培养制备不可缺少的实验室设备,适用于各大中院校、油化工、卫生防疫、环境监测等科研部门作生物、生化、细胞、菌种等各种液态、固态化合物的振荡培养。
振荡器的种类有用空气恒温的气浴恒温振荡器、用水恒温的水浴恒温振荡器和0℃至50℃的全温恒温振荡器,其产品可用于植物、生物、微生物、遗传、病毒、医学、环保、食品、石油、化工等科研、教育部门作各类生物的精密培养、基因工程的研究、石油化工的受热等等。
SMMC-7721细胞系是于1977年建立,材料取自一名50岁男性原发性肝细胞癌HCC患者的手术切除标本进行体外培养而得。其生物学特性如下: 细胞系生长较迅速稳定,在原代细胞开始传代阶段增殖缓慢,以后趋于稳定而迅速生长;细胞形态为上皮样;贴壁生长;细胞的亚微结构形态符合癌细胞的一般特征;甲胎蛋白(α-fetoprotein, AFP)免疫荧光染色呈阳性;LDH同工酶谱的变化与肝癌细胞的一般特征一致;免疫缺陷小鼠体内可成瘤率高,动物异种后瘤结节经病理切片检查,其组织形态和原手术切除标本类似。
Bel-7402于1974年建立,来源于一位53岁男性肝癌患者的手术切除标本,属于HCC。生物学特性如下: 细胞增长迅速而恒定,6-7 d可传代1次;细胞形态以多边形上皮样占绝大多数;贴壁生长;细胞染色体中有一大而长的近端着丝点染色体,出现频率高,是本株细胞的标记染色体;AFP免疫荧光反应阳性;LDH、G6PD、TAT等酶代谢及细胞的超微结构基本上保持临床人体肝癌的特性;异种接种后成瘤率高,3-4d可成瘤,瘤块组织学病理与临床HCC相近。
该细胞系由上海医科大学中山医院建立, 将一名我国39岁男性HCC患者的肝右叶转移病灶的手术切除标本接种于裸鼠肝内建造出人肝癌裸鼠转移模型(LCI-D20)而得。已证实, 经过再次分离得到的MHCC97H、MHCC97L及HCCLM33种细胞株,依据它们的转移特点,虽来源同一父系,但具有异质性,即具有不同的转移潜能。
MHCC97人肝癌细胞系于1998年从裸鼠人肝癌转移模型(LCI-D20)体外传代培养获得,该细胞系符合一般人恶性肿瘤的病理学和遗传学特征,细胞呈上皮样,贴壁生长,血清HBsAg、AFP高表达,成瘤率高且优先转移的靶器官是肺,肺转移率100%,故证实该细胞系为高转移特性的人肝癌细胞系。
2001年,研究者从MHCC97细胞系中发现并分离出不同转移潜能的2个细胞系MHCC97-H和MHCC97-L,前者肺转移率100%,后者40%;从生长速度上,前者细胞倍增时间较后者短;穿透人工基底膜能力前者较后者大;前者均较后者活力强、代谢旺。传代至20代后,两种形态学特征及生长速度方面均较稳定。之后又从MHCC97-H裸鼠接种后成功得到更高转移潜能的HCCLM3细胞系。
1979年,从阿根廷一名15岁高加索男孩的原发性肝胚细胞瘤中分离出并建立, 该细胞系呈上皮样; 贴壁抱团生长; 生长较快, 传代周期为1-2d; 低转移; 裸鼠中成瘤率较差;AFP阳性; HBsAg阴性, 然而目前尚未证明该细胞中有乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)基因组; 但通过实验已证实, 该细胞系分化程度较高, 细胞里代谢酶的生物转化特性较完整, 不需加入外源性活化系统。在药物作用相关研究中代谢酶保持稳定, 不会因传代次数增多而有所改变, 所含有的生物转化代谢酶与人正常肝实质细胞同源, 因此, 常被用于体外肝细胞代谢或遗传毒性试验方面的理想细胞系 其中, HepG2215是目前应用较为广泛的细胞株, 它是HepG2的衍生物是体外筛选抗HBV药物的良好模型, 并用于抗HBV新药开发的体外研究工具。
Hep3B分离自8岁美国黑人男童的肝癌组织 细胞形态跟HepG2类似, 呈上皮细胞, 电镜下观察胞浆里面很多粗大的黑颗粒, 同样喜抱团贴壁生长; 其在裸鼠中能致瘤, 但基本不转移 HBV阳性, 这与HepG2不同, 这株细胞整合了完整的HBV基因组,可用于HBV感染后发展致癌相关研究。
该细胞系于1982年从一名患有肝癌的57岁日本男性肝癌组织标本上培养而得。该细胞AFP阳性,高度分化, 细胞呈上皮样, 贴壁生长 特点是HBV阴性, 而具有丙型肝炎病毒(hepatitisC virus, HCV)易感性,故可用于HCV与肝癌的关系的研究 除了用于研究致癌性, 还用于基因表达的调节机制、新陈代谢及VLDL的分泌等 此细胞系的特别之处如下: 可用于生产重组蛋白如促红细胞生成素; 在蛋白质生物学方面用于研究在肝细胞内复制的登革病毒; 广泛用于异种移植动物模型
PLC/PRF/5人肝癌亚历山大细胞于1976年建系, 细胞来自一位患有原发性HCC的莫桑比克男性患者的标本; 为上皮样贴壁生长; AFP阳性, 不产生白蛋白; 分泌ad亚型的HBsAg而不产生HBcAg或HBeAg和Dane颗粒, 却可维持HAV的繁殖; 该细胞可能含有全部HBV基因组, 同工酶谱及核型与人类同源;裸鼠异种移植可致瘤 此细胞系因其产生HBsAg的物理化学和免疫化学特性跟HBV携带者血清中HBsAg相似, 因此, 可被用来研究HBV体外病毒及其与原发性肝癌的关联, 抗HBV疫苗所需的HBsAg颗粒的制备及抗病毒药物的制备等方面。
首先,在选择实验对象的比较上,人肝癌细胞系相较于人原代肝细胞,克服了人原代肝细胞来源困难、实验难控制、存活时间短的局限,肝癌细胞系为已获得的稳定传代的细胞,具有来源方便、操作简单、条件可控和可重复等优点,是用于肝癌疾病相关研究的理想对象。
其次,肝癌细胞系均选择来源于确诊肝癌患者的病理组织,具有与肝癌患者体内相似的遗传基因组,其发生发展机制、功能蛋白表达、病毒复制能力、侵袭转移功能及抗药性等,具有与人类亲源体极其相近的特点,因此更适合应用于肝癌各领域的研究
HepG2人肝肿瘤细胞株广泛应用于遗传毒理学及病毒 培养 等方面的研究,研究肝脏疾病发病机理及其临床应用有着重要意义。由于其与肝细胞具有相同的生物学活性,还被用于胰岛素抵抗的研究。本文对肝癌 细胞培养 的最佳条件做一简单综述。
1HepG2细胞的复苏条件
11 复苏温度的选择
唐孟萱等采用下述方法进行细胞复苏:快速将所冻存细胞40℃水浴摇床60转/ min慢摇至其溶解,溶解后马上转入 37 ℃水浴箱,手工慢摇 恒温 2~3min复苏 ,复苏后 800 转/ min 离心 5min,吸去上清加入 10ml 含 15%胎牛 血清 DMEM 培养基 ,混匀后加入细胞培养板 ,每孔 1 ml,5%CO2温箱 37℃培养。唐孟萱等将上述方法与细胞专著所述方法相比较,传统 37 ℃水浴方法复苏后细胞存活率为 684%,先40℃溶解后37℃恒温方法复苏后细胞存活率为857%。证明其所用方法优于传统方法。
12 复苏用培养基的选择
钟志宏等使用培养基培养基RPMI-1640和DMEM两种培养基对HepG2细胞进行培养,结果发现,用DMEM培养基培养的细胞结果在接种密度为1×104/cm2、血清含量为15%时,经6h培养后细胞开始贴壁,12h后大部分细胞贴壁,且增值速度最快,4d后可以按1:3的比例传代。
而用RPMI-1640培养基培养的细胞在接种密度为1×104/cm2、血清含量为20%时,时,经6h培养后细胞贴壁不明显,但12h后部分细胞贴壁,24h后亦大部分细胞贴壁,且增值速度相对较慢,5天后可以按1:3的比例进行传代。以上结果说明,使用DMEM培养基既可以节省血清,细胞贴壁所用时间短、增殖速度快,并且传代细胞培养也使用DMEM培养基,使用DMEM培养基进行复苏,避免了配制不同培养基所带来的麻烦,因此在HepG2细胞复苏中推荐使用DMEM培养基。
13 复苏时的接种密度
甘起霓等研究发现当接种密度为1×104/cm2,血清含量为20%时, 细胞24 后大部分贴壁, 且增殖速度最快, 5d后可按1:3比例传代;当接种密度大于1×104/ cm2和(或)血清含量少于20%时, 细胞表现为贴壁困难, 出现进行性退化; 当接种密度小于1×104/ cm2 血清含量为20%时, 细胞24h后大部分贴壁, 但增殖速度明显减慢, 约7d后才可按1:3比例传代。
2消化酶及消化时间的选择
唐孟萱等研究发现, EDTA +胰酶的消化能力太强,消化时间不好把握,传代消化后细胞死亡较多;EDTA消化能力太弱,消化时间太长且不易将细胞消化完全;用PBS将细胞洗3次,再加入 025%胰酶,覆盖细胞约30s后吸去胰酶,37℃放置 2~3 min, 显微镜 下可观察到细胞消化适度。钟志宏等将待传代细胞不用PBS洗涤和用pH72的PBS洗涤一遍、二遍、三遍后分别用025%的胰 蛋白酶 溶液、005%胰蛋白酶-053mmol/L EDTANa溶液进行消化(消化液用量为盖满瓶底),观察时间为30秒,1、2、3、4、5、6、7、8、9、10分钟。结果发现:不用PBS洗涤的细胞分别用上述两种酶消化,10分钟后细胞仍然消化不完全。
用pH72的PBS洗涤一遍、二遍、三遍后的细胞,再用025%的胰蛋白酶溶液消化时,分别经3分钟、1分钟和05分钟能完全消化好细胞。而用005%胰蛋白酶-053mmol/L EDTANa溶液进行消化时,完全消化好细胞约需3分钟、15分钟、1分钟。二者的结果相符。根据上述结果可知,在进行HepG2细胞的消化时,先用pH72的PBS洗涤三遍后,再用025%的胰蛋白酶溶液消化05分钟效果比较好。费洪新[5]等人则推荐使用如下方法进行消化:果明显,对细胞的影响小。一般适宜的消化方法是:用1×PBS将细胞洗涤2次 再加入适量的015%胰蛋白酶(含有002%EDTA并以7:3的体积比混合)覆盖细胞约20秒后吸去胰蛋白酶 (含有002%EDTA并以7:3的体积比混合)。
3培养基中血清浓度的选择
由于人肝癌 细胞株生长缓慢,恶性程度较高,对于血清的要求比较严格,其培养时所需要胎牛血清的浓度要比一般的肿瘤细胞高一些。些经验,费洪新等人认为在含15%胎牛血清的DMEM培养基中HepG2人肝癌细胞生长迅速。钟志宏、王爽等人的实验结果也支持上述结果。甘起霓则认为血清含量为20%时, HepG2细胞贴壁后增殖速度最快。当HepG2细胞增殖数代后, 待其状态稳定时, 可将血清含量逐渐降至10%。唐孟萱[1]等人则认为12%的血清浓度足以满足HepG2细胞的生长。
4双抗浓度的选择
王爽等通过正交实验优选发现,双抗浓度为05%时传代效果较好,条件易于控制,且细胞能顺利生长。
5培养基pH条件的选择
钟志宏等人实验发现复苏细胞和传代细胞在pH68-74、5%CO2条件下培养,其贴壁和增值速度无明显变化。
而无CO2条件下培养时,复苏细胞在不同pH值条件下均表现为培养液逐渐变碱性,细胞不能贴壁,且逐渐缩小,退化;传代细胞在不同pH值条件下培养,其培养液逐渐变酸性,当pH值﹥70时,经24h培养后,细胞基本贴壁,但增值缓慢,经48h培养后大部分细胞已伸出伪足,细胞数量明显增多;当pH值﹤70时,细胞贴壁困难,经72h培养后,细胞缩小、呈退化趋势。王爽等通过正交实验优选发现,pH72时传代效果较好,条件易于控制,且细胞能顺利生长,与上述结果相符。
6细胞传代条件的选择
王爽等通过正交实验对HepG2细胞的传代条件进行优选,他推荐在细胞汇合度达95%-1000%时进行传代。
唐孟萱等人的研究结果表明HepG2 细胞生长至汇合度50%~95%时是对数生长期,死细胞相对较少;而当汇合度达到 100%时 ,生长趋于平台期 ,死细胞数开始增加;特别是汇合度 100%以后再继续培养,死细胞数明显增加而活细胞数减少。据此可确定 HepG2 细胞培养最佳的传代时期是在汇合度 95%~100%之间。二者的实验结果相符,推荐在汇合度在95%-100%时进行细胞传代。
技术参数 技术参数示例 最大容量 100ml×23
250ml×12
500ml×9
1000ml×5 标准配置 500ml×3
250ml×3
100ml×4
50ml×4 托板尺寸 450×410mm 定时范围 (h) 0-999 温控范围 RT+5~60℃ 温控精度 ±01℃
(恒温状态) 温度均匀度 ±05℃
(恒温状态) 显示方式 LCD
(液晶显示) 托盘数量 1块 外型尺寸 740×710×510mm 功率 550W 电源 AC220±10﹪50~60Hz 环境温度要求 5~30℃
是可以的。培养微生物,关键是满足微生物生长所需要的一切条件,比如温度和其他营养成分。采用适合的培养基,并提供恒定的适合目标微生物生长的温度,当然还要注意避免被外界环境的杂菌污染,就能够进行微生物培养。实际上,恒温水浴也是可以培养微生物的。
实验目的
(1)了解实验的常规仪器、设备、耗材。
(2)掌握本实验所用仪器的功能和使用方法。
实验内容
一、验室的常规仪器、设备
(一) 温度控制系统:
1 冰箱: 根据药品、试剂及多种生物制剂保存的需要,必须具备不同控温级别的冰箱,最常使用的有:4℃、-20℃、-80℃冰箱。
4℃适合储存某些溶液、试剂、药品等。
-20℃适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和DNA、蛋白质样品等。
-80℃适合某些长期低温保存的样品、纯化的样品、特殊的低温处理消化液等的保存。
0-10℃的冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。
2.液氮罐:有些实验材料、某些器官组织、细胞株、菌株及纯化的样品等,要求速冻和长期保存在超低温环境下,就需要一个液氮罐(-196℃)具有经济、省力和较好地保持细胞生物学特性的优点。
3.培养箱:37℃恒温箱用于细菌的固体培养和细胞培养。
CO2培养箱适用于培养各种细胞,可恒定地提供一定量的CO2(通常5%),用来维持培养液的酸度(pH值)。
37℃恒温空气摇床可进行液体细菌的培养。
4 水浴锅:用于保温。
25-100℃水浴摇床可用于分子杂交试验,各种生物化学酶反应等试验的保温。
25-100℃水浴箱用于常规试验。
5 烘箱:主用于烘干实验器皿,有些需要温度高些,有些需要温度低些。用于RNA方面的实验用具,需要在250℃烤箱中烘干,有些塑料用具只能在42-45℃的烤箱中进行烘干。
(二)水的净化装置:随着分子生物学的飞速发展,许多实验对水纯度的要求越来越高。
1 蒸馏水皿:单蒸水常难以满足实验要求。双蒸水、三蒸水配液,许多实验要去离子水。
多次蒸馏水可除去水中挥发性杂质,不能完全除去水中溶解的气体杂质(Mn2+、Cu2+、Zn2+、Fe3+、Mo(Ⅵ))。
2 离子交换器:去离子水—用离子交换法制取的水,称去离子水。
去离子效果好,但不能除去水中的非离子型杂质,其中常含有微量的有机物(树脂等)。
1
3.超纯水:用蒸馏水、离子交换水、反渗透纯水做为供水,磁铁耦合齿轮泵作用使水循环。用于PCR、PCR氨基酸分析、DNA测序、酶反应、组织和细胞培养等。
(三)菌消毒设备:分子生物学所用大部分试剂,而且实验用具都应严格消毒灭菌。。
1.蒸汽消毒锅:用于小批量物品的随时消毒。大批实验物品、试剂、培养基可使用大型消毒且定时进行消毒
2 紫外线:75%乙醇 、01%SDS(消毒剂)
一些耐高压、高温消毒且可用紫外线照射或乙醇和SDS浸泡。
紫外线照射使用方便,且很方便,但灭菌效果与距离有关,且产生臭氧污染安全,用于无菌室,超净台和塑料用具的消毒。
3 滤器滤膜:不耐高温、高压的试剂用其处菌。
4 煮沸消毒:主用于金属器械和针急需时采用。
(四) 计量系统:
1 称量系统:(各种天平)台秤、托盘天平、钮力摆动天平、
光电分子天平、精密电子分析天平
2 液体体积的度量:精:量筒、移液管、微量取液器
粗:刻度试管、烧杯、锥形瓶
3 pH值测量:
pH计:测定溶液中H+的直接电位的仪器,主要通过一对电极,在不同的pH溶液中产生不同的电动势用pH值表示出来。
pH试纸:只适用于培养液、酚饱和液、缓冲液或其它试剂溶液的pH值的粗略估计。而大部分试剂的配制要求严格的pH值,需精确度高(小数点后两位)的pH计。
4 OD值测量:光密度、分光光度计是利用物质在可见光和紫外线区域中的吸收光谱来鉴定该物质的性质及其含量的一种仪器。它是由光源、单色器、吸收池、接收器、测量仪表或显示屏幕所组成。OD值是许多溶液中溶质定量的方便指标之一,通过所产生的单色光而测定某一溶液对该单色光的吸收值,利用它可进行核酸溶液定量和纯度的初步判断。
(五)离心机:离心技术是研究生物的结构和功能中不可缺少的一种物理技术手段。因为各种物质在沉淀系数、浮力、和质量等方面有差异,可利用强大的离心力场,使其分离、纯化和浓缩。目前有各种各样的离心机。可供少于005ml到几升的样品离心之用。离心技术应用广泛,包括收集和分离细胞、细胞器和生物大分子等。据其转速的不同,可分为以下几种类型:
1 普通离心机:最大转速6000 r/m ,最大离心力6000g
①医用或台式离心机:是离心机中最简单而廉价的,最常用于收集快速沉降系数的物质,如红细胞、粗大的沉淀物、酵母菌和细菌等。
②低速冷冻离心机:主要用于细胞、细胞核、细胞膜和细菌的沉淀和收集等。 2
2 高速离心机:最大转速25000 r/m ,最大离心力89000g
有冷冻和常温两种,多用于制备和手收集微生物、细胞碎片、细胞、大的细胞器、硫酸铵沉淀物以及免疫沉淀物等。
3 超速离心机:最大转速9000 r/m ,最大离心力694000g。
4 台式超速离心机:最大转速12000r/m ,最大离心力625000g。
(六)超净工作台:内有紫外灯、照明灯、还应有酒精灯火焰、75%乙醇等灭菌的设备,是一种提供局部洁净度的设备。其原理是鼓风机驱动空气,经过低、中效的过滤器后,通过工作台面,使实验操作区域成为无菌的环境。超净台按气流方向的不同大致有几种类型:
①侧流式:净化后气流,从左侧或右侧通过工作台面,流向对侧,或者从上往下或从下往上流向对侧,他们都能形成气流屏障而保障台面无菌。
缺点:在净化气流和外边气体交界处,可因气体的流向而出现负压,使少量的未净化气体混入,而造成污染。
②外流式:气流是面向操作人员的方向流动,从而保证外面气体不能混入。
缺点:在进行有害物质实验时,对操作人员不利,但可采用有机玻璃把上半部分遮挡起来,使气流往下方流出。(七)电泳系统:电泳技术是检测、鉴定各种生物大分子的纯度、含量及描述它们的特征,甚至还是分离、纯化、回收和浓缩样品的工具之一。核酸和蛋白质等都带有电荷,当它们被置于电场中时,能够移动。
电泳装置由两部分组成:电源装置和电泳槽装置。
① 电泳装置:电源需经稳流通过稳压器,既能提供稳定的直流电,又能输出稳定的电压。可用于三种:
常度稳压电泳仪:输出电压0-500v 0-15mA
中度稳压电泳仪:输出电压400-1000v
高度稳压电泳仪:输出电压1000以上的电源装置。
② 电泳槽装置:分两种
水平式电泳槽:一般分为微型电泳槽和大号水平式电泳槽
垂直式电泳槽:分垂直平板电泳槽和圆柱形电泳槽装置。
(八)PCR仪:Polymerase Chain Reaction仪,也称DNA热循环仪,基因扩增,它是使一对寡核苷酸引物结合到正负DNA链上的靶序列两侧,从而酶促合成拷贝数百万倍的靶序列DNA片段,它的每一循环包括在三种不同温度进行的DNA变性,引物复性,DNA聚合酶催化的延伸反应三个过程。
(九)凝胶成像分析系统:
对电泳后含溴乙锭(EB)核酸样品的观察分析。
(十)干燥设备: 3
1 真空加热干燥箱:核酸在硝酸纤维素膜和尼龙膜上固定,用于杂交实验。
2 电泳凝胶干燥箱:电泳后的凝胶进行脱水干燥的仪器,一般可将凝胶干燥到一些玻璃纸上,干燥后的凝胶易于保存。
3 液氮冷冻干燥:适用于活性蛋白质样品的干燥与结晶。
4 真空泵:许多实验都需要抽真空。如:乙醇沉淀后核酸样品的干燥,电泳凝胶的干燥等。
(十一) 其他
1 微波炉:便于一些溶液的快速加热和定温加热,电泳琼脂糖凝胶配制、溶化等。
2 制冰机:用于制造大多数核酸、蛋白质的实验操作所需的低温环境,以减少核酸酶或蛋白质酶的水解。
3 层析装置:(色谱分离)是一种分离多组分混合物的有效物理方法。
真空印记系统,DNA合成/测序仪:这些都是对核酸进行深入研究的必备仪器。
4 磁力搅拌器:多角度旋转混匀器、快速振荡混合器:用于混合仪器。
5 组织匀浆器:超声组织及细胞破碎器,用其进行样品的分离提纯实验。
6 通风橱:很多溶剂能逸出毒气,必备柜 ,放射性试验还要有有机玻璃屏蔽。
7 玻璃蒸馏器、电热加帽、变压器:用于酚等有机溶剂的蒸馏。
8 Tip头、Eppendorf管:
微管移液器tip头(吸液尖)、Eppendorf管(微量离心管)可洗涤,硅化消毒后反复使用。对一些要求严格的实验,如RNA的提取、保存等操作,应使用新的消毒tip头与Eppendorf管。另外还应备有常用规格的离心管(1000ml、500 ml、250 ml、50 ml、7 ml等)及96孔、24孔、12孔、6孔的细胞培养塑料平板等。
9 小型设备、用具:
定时器、滤膜、保鲜膜、防护眼镜鸭嘴镊、常规的玻璃或塑料器皿(包括平皿、试管、烧杯、量瓶、试剂分液漏斗、避光保存的试剂应使用棕色试剂瓶,如饱和酚、巯基乙醇等)、记号笔、各种手套PE、乳胶、家用、防酸的等)
二、本期实验所用主要仪器、 设备的功能及操作
1 酚的重蒸馏装置:空气冷凝式玻璃蒸馏器。
一般酚是无色透明的结晶,如呈粉色或,表明其中含有酚的氧化产物,如醌、二酸等,变色的酚不能用于实验,因其中的酚氧化物可破坏核酸的磷酸二酯键,并引起DNA链的交联。使用前必须在160℃-180℃重蒸馏以去除能引起RNA和DNA断裂和交联的污染杂质,从而得到纯净的酚。
2 磁力搅拌器:81-2型恒温磁力搅拌器
将导电温度表用导线与二芯插头连接,插入后面的温度表孔内,当温度上升到预先调整好的度数时即自动停止加热(控温搅拌)。主要用于物质的快速搅拌、溶解和混匀。如配制试剂,制备酚的水饱和液等。 4
3 蒸馏水器:1810B自动双重纯水蒸馏器,石英管加热式,本器的一次及二次蒸馏均有保护装置,使用安全可靠,热继电器当冷却水突然中断或缺水的情况下,即自动切断电源。干簧继电器控制二次蒸馏瓶内的水位,其高度应以在水位降低时能自动切断电源为准,从而达到自动控制水位的目的。
该仪器主要用于制备双蒸水和三蒸水。
4 离心机:TGL-16G台式高速离心机,最大转速20000rpm,主要用于核酸提取时蛋白质的沉淀和有机相与水相的分层,PCR检测的瞬时离心。
5 微量取液器:主要用于精确量取微量液体体积和核酸水相的转移。
6 匀浆器:5ml、10ml玻璃匀浆器。
主用于组织细胞的破碎。
7 凝胶成像分析系统
主用于核酸样品琼脂糖凝胶和PCR电泳结果的紫外观察和照像。
8 PCR仪:PTC-200基因扩增仪
体外扩增核酸的仪器
9 蒸汽消毒锅:用于实验用试剂、器皿、用具等的灭菌清毒
有电加热式、电炉加热式两种。
10 超净台:JJT-1300型洁净工作台,侧流式。
原理:吸进气经过初、中级过滤皿(无纺布滤过)后,再通过风机经高级过滤器(超细玻璃纤维滤纸制成)而形成洁净空气。主要是在局部空气造成洁净空气环境,以使工作区域中的悬浮粒子及微生物控制在最低限度内。
本台操作压为垂直层流压,因此出风面与操作位置不应放置多余的物品,以免妨碍气流的正常流动,影响洁净度,台面板上的孔作为通风孔,使用时避免有液体或其他物品漏入空中,以免影响内部构件。风速可调。
使用:75%乙醇消毒2-3次,摆放好实验用品。插上电源,紫外消毒30分钟,启动风机5m后关灯,关灯后10分钟打开照明灯,即可使用。
11 电泳系统:
①电泳仪:HV-3000型高度三恒多用电泳仪(恒压、恒流、恒功率)
②电泳槽:水平式两种。
12.微波炉:主要用于琼脂糖的快速溶解。
生物实验室常用仪器设备有:恒温培养箱、霉菌培养箱、生化培养箱、超净工作台、高压灭菌器、烘箱、加热板、电炉、电子分析天平、磁力搅拌器、水浴锅、摇床、离心机、低温保存箱、移液器、PH计、分光光度计、光学显微镜、扫描显微镜、均质器等。