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恒温培养箱原理是什么
恒温培养箱原理：培养箱控温系统由传感器（Pt100铂电阻）、温度控制器、加热器等组成，当温度控制器接受传感器输出电阻信号（0℃时为100Ω，0.3Ω/℃）后，在PV屏显示工作室内测量实际温度，当输入信...
培养箱有霉菌污染怎么清理?
不知道是不是培养箱带灭菌功能不 如果不带就只能用常规办法了 1. 培养箱消毒：先用纯水擦洗，再用95的酒精擦洗，再照紫外就可以拉！注意周围环境的清洁就不会那么容易污染的拉！ 2. 我的经验是在补充水时...
人工气候培养箱和光照培养箱一样吗？它的用途是什么？
两种培养箱有点相近，区别是人工气候箱带湿度控制，光照培养箱没有。人工气候培养箱具有光照、加湿功能的高精度冷热恒温恒湿设备，可根据实验需要分时段设定不同的温度、湿度和光照度，是一个理想的人工气候实验环境...
恒温箱与培养箱的区别
恒温箱 在一定的温度,用以饲养或培养生物或生物的一部分(细胞等)的箱型器具。以前用于孵卵的恒温器,有的是通过热水加热(水温式),但实验用的大部分为电热式,装有电热器和温度调节器,是一种外壁上装有绝热...
恒温摇床培养箱价格多少
看你买多大的，还有就是看你买什么品牌的吧，还有就是材质，这些都影响价钱的
恒温培养箱具有哪些特点？
在培养细胞菌类的样品时，由于恒温培养箱有着出色的温度环境控制，直接成为了首选。我们在市场上要如何选择呢？现在我们来看看恒温培养箱的参数吧！
温度范围
在我们培养一些细胞样品的时候，首先要考虑的便是我们希望该样品在怎样的温度状况下经行培养。一般来说，温度范围在20-60℃为宜。大多数细胞培养在33℃左右。许多需要考察样品在比较极端情况下的培养情况则需要较高温度如65℃甚至80℃，这都可以根据客户自己的要求来选择。
容积
其次比较重要的便是容积这个参数。作为可以进行对比的培养箱，容积越大当然是越优秀。如，可能50L的只能放5-8个样品经行培养对比。但是100L的培养箱则能够经行12个以上同类型样品的同时培养。然后能够无差别的得出不同浓度，试剂下的影响。增加了实验的准确性和比较性。也能够大幅度减少用户的操作时间。
加热方式
下面一个客户比较关心的问题就是内部的加热方式。主流的加热方式可分为两种：水套式以及电热膜式。电热膜则是通过贴在内壁的电热膜经行直接加热供热，水套式则是通过对外面的水层加热再使内部受热。这两种加热方式各有优点。电热膜加热比较迅速，可在短时间内使内部达到理想温度经行培养。水套式则胜在稳定性。面对一些突发情况如断电等，能够在较长时间内保持内部的温度不会变化太大，维护了样品的稳定培养。一般来说，水套式现在应用的较多。还有一些如材质等，目前都采用比较优质的不锈钢等材料，对客户的影响已经越来越小。
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电热恒温培养箱由于其出色的温控环境及完善的性能，已经成为培养一些细胞菌类的不二选择。那么我们如何在面对市场上纷乱复杂的品牌型号中选择到一款适合我们自己的恒温培养箱呢?下面我们来谈谈恒温培养箱的一些重要参数。
隔水式电热恒温培养箱主要用于微生物的培养，例如霉菌、酵母菌、乳酸菌以及其他微生物，都可以使用隔水式电热恒温培养箱进行培养。隔水式电热恒温培养箱具有温度稳定的特点，其温度可以达到20℃~60℃，能够满足微生物的培养温度。
隔水式电热恒温培养箱的原理是利用水箱内的水经电加热后，传导至箱内，使箱内温度升高。因采用了水热式的方法，箱体内温度比较恒定，升温和降温比较均衡，且过程较缓慢。此类温度环境非常适宜细菌等微生物的培养。
隔水式电热恒温培养箱的箱体体外壳采用薄钢板焊接而成，水箱内外层均用铜皮制造，绝热层填玻璃棉有良好绝热性能，外部烘锤纹漆、零件均经镀铬。培养箱装有双道门，内门采用玻璃门与箱门框密合，便于观察试验物情况。电器零件，均装于箱左侧空间内，便于检修和调换零件。
在42℃的温度时，大肠杆菌出现热休克，质粒可通过大肠杆菌细胞膜上形成的空隙进入菌体内。
大肠杆菌的转化原理及方法 ：
大肠杆菌转化可以：（1）将重组DNA分子导入大肠杆菌受体细胞进行复制，增殖和表达，以获得目的基因；（2）验证大肠杆菌感受态细胞效果；（3）用于分子生物学其他研究。
实验方法原理：质粒DNA或重组DNA粘附在细菌细胞表面，经过42°C短时间的热击处理，促进吸收DNA然后在非选择培养基中培养一代，待质粒上所带的抗菌素基因表达，就可以在含抗菌素的培养基中生长。
实验步骤
一、实验材料准备
1 器材
旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，15 ml 微量离心管，双面微量离心管架，干式恒温气浴（或恒温水浴锅），制冰机，恒温摇床，培养皿（已铺好固体LB-Amp），超净工作台，酒精灯，玻璃涂棒，恒温培养箱。
2 试剂
培养基（不加抗菌素），LB培养基（加抗菌素），无菌ddH2O，IPTG，X-gal。
3 材料处理
无菌ddH2O，15 ml 离心管装入铝制饭盒（灭菌）、移液器吸头装入相应的吸头盒（灭菌），20%IPTG（M/V），2% X-gal（M/V，用N,N-二甲基甲酰胺配）。
二、操作步骤
1 事先将恒温水浴的温度调到42℃。
2 从-70℃ 超低温冰柜中取出一管（100 μl）感受态菌，立即用手指加温融化后插入冰上，冰浴5~10 min。
3 加入5 μl 连接好的质粒混合液（DNA含量不超过100 ng），轻轻震荡后放置冰上20 min。
4 轻轻摇匀后插入42℃水浴中1~2 min进行热休克，然后迅速放回冰中，静置3~5 min。
5 在超净工作台中向上述各管中分别加入500 μl LB培养基（不含抗菌素）轻轻混匀，然后固定到摇床的弹簧架上37℃震荡1 h。
6 在超净工作台中取上述转化混合液100-300 μl，分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
7 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。
8 在涂好的培养皿上做上标记，先放置在37℃恒温培养箱中30~60 min 直到表面的液体都渗透到培养基里后，再倒置过来放入37℃恒温培养箱过夜。
9 在被细菌污染的桌面上喷洒70%乙醇，擦干桌面，写实验报告。
10 观察平板上长出的菌落克隆，以菌落之间能互相分开为好。注意白色菌斑。
动物实验室主要是作什么检验用的，有哪些功能间，喜格实验室建设这里以兽医动物实验室举例：
（一）样品处理室
解剖台、离心机、混合研磨器、冰箱等。
本实验室主要用于动物尸体解剖，观察动物临床症状及表现，试验前样品处理及保存等工作。
（二）细菌分离培养室
超净工作台、恒温生化培养箱、显微镜、微波炉等。
本实验室主要用于细菌分离培养、药敏试验。
（三）常规血清学检测室
酶标仪、洗板机、恒温培养箱、微量移液器、微量震荡器、冰箱等。
本实验室主要用于常规血清学抗原（或抗体）检测、药物残留检测。
（四）分子生物学检测室
PCR仪及其配套设备、超净工作台、4℃高速离心机、水浴锅、冰柜、工作台、物品架等。
本实验室主要利用PCR技术检测细菌/病毒抗原。
（五）病理学检测室
石蜡切片机、冷冻切片机、荧光显微镜等。
本实验室主要用于制作病理组织切片（如石蜡切片、冰冻切片）检测细菌或病毒抗原、组织学病理变化。
要看你是什么细胞，是想过表达还是knock down一个基因，稳转还是瞬转。
细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。随着分子生物学和细胞生物学研究的不断发展，转染已经成为研究和控制真核细胞基因功能的常规工具。在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中，其应用越来越广泛。
方法
脂质体转染法
阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用，将DNA分子包裹入内，形成DNA脂复合物，也能被表面带负电的细胞膜吸附，再通过融合或细胞内吞进入细胞。脂质体转染适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中，是目前实验室最方便的转染方法之一，其转染率较高，优于磷酸钙法。由于脂质体对细胞有一定的毒性，所以转染时间一般不超过24小时。常用细胞类型：cos-7 、BHK、NIH3T3 、Hela等。
电穿孔转染法
电流能够可逆地击穿细胞膜形成瞬时的水通路或膜上小孔促使DNA分子进入胞内，这种方法就是电穿孔。当遇到某些脂质体转染效率很低或儿乎无法转入时建议用电穿孔法转染。一般情况下，高电场强度会杀死50%-70% 的细胞。现在针对细胞死亡开发出了一种电转保护剂，可以大大的降低细胞的死亡率，同时提高电穿孔转染效率。
病毒感染
对于脂质体转染与电穿孔转染都无法成功转染的细胞系建议用病毒感染，此法可以快速100%感染，检测成功率高。
常用步骤
1 转染试剂的准备
① 将400ul去核酸酶水加入管中，震荡10秒钟，溶解脂状物。
② 震荡后将试剂放在－20摄氏度保存，使用前还需震荡。
2 选择合适的混合比例(1：1－1：2/脂质体[1] 体积：DNA质量)来转染细胞。在一个转染管中加入合适体积的无血清培养基。加入合适质量的MyoD或者EGFP的DNA，震荡后在加入合适体积的转染试剂，再次震荡。
3 将混合液在室温放置10―15分钟。
4 吸去培养板中的培养基，用PBS或者无血清培养基清洗一次。
5 加入混合液，将细胞放回培养箱中培养一个小时。
6 到时后，根据细胞种类决定是否移除混合液，之后加入完全培养基继续培养24－48小时。
是中央长不满，还是中央有和边缘相同密度的细胞，但是大部分都是死细胞？如果是前者，也许不是技术问题，而是物理问题了。我是选择孔内铺盖玻片，在玻片上种植。每次换液都用PBS洗，必要的步骤吗？另外，也有可能和细胞种类有关或者和培养液有关？我想你的培养液可能加的太少了。由于表面张力的作用，培养板的边缘液体会向上走，造成培养液面呈现一个凹面（就像量筒的液体凹面一样），中央的细胞正好在凹面的最低处，培养液少，细胞的营养不够，甚至干涸掉，空气中的氧气也 会造成损伤，即使有增值过来的细胞也会死掉。估计你的培养液里可能有贵重的银子（因子）啊，想少用点吧，结果就 ：）另外，检查一下培养箱底部的水是否少了，如果少了，箱内的空气湿度不够，会造成培养液挥发加快，这样即使刚加的液体不少，过一段时间，由于蒸发，液 体量会减少，造成中央干涸。并且这样会改变了培养液的成分浓度，造成渗透压过高。个人经验认为这是物理问题:24孔板小，细胞接种进去后是很难摇均匀的，结果导致细胞重贴壁后呈现四周密中间稀的状况至于中间较多死细胞，如果是悬浮状的话，也一样是物理问题。接种后比较粗暴的碰撞，似乎对摇均匀细胞有一定效果在为多孔板培养的细胞换液时一定要注意，不要把培养基吸得太干，如果完全吸取，很容易造成细胞干涸，这样的话细胞会很快死亡。我有一段时间总是遇到 这个问题，一个板子中总有一两个孔出现细胞大量死亡，后来发现是上面的原因。现在我做的时候如果必须把液体吸干，我会一个一个空来吸取，最多一次不超过3 孔，然后马上加入液体，同时在作转染时，我会在吸液和加液时将风机关掉，这样基本上会避免细胞死亡。同时你所说的细胞周围密而中间稀疏，大约有如下原因：1培养液加得太少。主要是由于液体张力的问题。2细胞接种后震荡太厉害了。由于离心力作用导致细胞分布到周围。
为研究土壤中细菌、真菌、放线菌的数目，我们利用选择培养基，以便在土壤水溶液中选出目的菌种，在用分浓度梯度法在选择培养基上培养出但菌落，以便计数。计数时可以根据不同菌种的不同形态学特征来分辨，如果出现与上述三种以外特性的菌种可以用革兰氏染色鉴别。
一、主要的实验药品与仪器
（1）实验药品:牛肉膏，蛋白胨，NaCl，琼脂；1mol/L NaOH， 1mol/L HCl, 可溶性淀粉 ， KNO3 , K2HPO4, MgSO4 ，FeSO4，KH2PO4，葡萄糖
（2）实验仪器:试管，三角烧瓶，烧杯，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅，pH试纸（pH 55—90），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。
二、实验方法
1、细菌分离：取土样1g，加入99ml无菌水中，震荡10min，制成10-2 土壤稀释液，再取05ml 10-2 土壤稀释液加入45ml无菌水中，制成10-3 土壤稀释液，以此类推··· ···。取10-5 ，10-6 ，10-7 土壤稀释液01ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。在30度恒温培养箱中培养24h后观察结果。
2、放线菌分离：取土样1g，加入99ml无菌水中，震荡5min，制成10-2 土壤稀释液，再取05ml 10-2 土壤稀释液加入45ml无菌水中，制成10-3 土壤稀释液，以此类推··· ···。取10-3 ，10-4 ，10-5 土壤稀释液01ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。在28度恒温培养箱中培养5~7d后观察结果。
3、霉菌分离：取土样5g，加入95ml无菌水中，震荡5min，制成10-2 土壤稀释液，再取05ml 10-2 土壤稀释液加入45ml无菌水中，制成10-3 土壤稀释液，以此类推··· ···。将以灭菌的培养基融化，加入链霉素溶液，但培养基凝固后，取10-2 ，10-3 ，10-4 土壤稀释液01ml加入相应编号培养基中，涂平板，每个稀释度两个平板。在28度恒温培养箱中培养3~5d后观察结果。
三、结果与讨论 当培养结束后，观察培养基上的菌落，由于本次试验的各种经济，效果，作用等等方面的原因，培养基并不能完全分离土壤中的各种菌类，例如，土壤中除了细菌，霉菌，放线菌外还有大量的杂菌，如：酵母菌、真菌、藻类等，微生物，如：各种寄生虫（卵）等，所以我们要根据细菌，放线菌，霉菌的宏观物理特性来分别。当进行显微观察时，霉菌不用染色，放线菌、细菌要进行简单的染色，然后再显微镜下观察菌体形态。
mtt实验步骤：
1 胰酶消化对数期细胞，血清中止消化，移液枪吹打至细胞悬浮，细胞悬液1000rpm离心5分钟，弃上清，重悬沉淀制成细胞悬液。细胞计数调整其浓度至5×104/ml（具体细胞密度根据需求适当调整）。
2 将细胞悬液制备好后，轻轻混匀，植入96孔板。推荐每个实验分组设一列（6个复孔），每孔加入100ul细胞悬液,即植入的细胞量为5000/孔。具体每孔植入的细胞数量通常为3000至8000，可设细胞梯度行预实验，取OD490与细胞数量成正相关的范围为佳。
3 将接种好的细胞培养板放入培养箱中培养至合适细胞密度，加入合适的药物或其他干预。我们的经验，细胞贴壁后即可加药，或两小时，或半天时间，通常培养过夜即贴壁良好。
4 每孔加入10~20μl MTT溶液（5mg/ml，即05%MTT），继续培养4~6h。经验告诉我们，时间低于4h则反应不完全，超过6h则甲瓒开始逐渐于孔底脱离。若细胞干预的药物能够与MTT能够反应（强氧化性或强还原型的药品可能与MTT发生反应），则可先弃去培养液，小心用PBS洗2-3遍后，再加入含MTT的培养液，操作务必轻柔，避免直接吹打细胞面。
5 终止培养，准备溶解结晶。吸弃上清液，每孔加入150ul DMSO，摇床中低速震荡10min使结晶充分溶解，摇床不宜过快或过慢，过慢结晶不能很好溶解，过快则液体易震荡出孔。冬季温度较低时，可于37摄氏度恒温摇床内震荡10~15分钟，再上机检测。
6 酶联免疫检测仪分别于OD490nm和OD570nm处测量各孔的吸光值。
7 在一定范围内，测量的吸光度值与细胞数目呈正相关。因此，细胞存活率公式可表示为：Survival rate = (ODtreatment group/ODcontrol group) × 100%。
华南农业大学实验报告 实验项目名称: 《兽医微生物》综合实习 所属课程名称: 《兽医微生物学》 学生姓名:杨滨 学号:200730330126 专业年级:07 动医(1)班 成绩: 一,实验目的 1掌握营养肉汤,血琼脂平板,麦康凯平板,普通琼脂,三糖铁层琼脂的配置方法 2细菌的分离培养技术(解剖,病料的采集,从组织中分离细菌,培养细菌,移植细菌, 纯化细菌,细菌接种) 3细菌的鉴定技术(光学显微镜油镜的技术,组织涂片,在组织材料中认识细菌,辨别细 菌,生化实验,血清学实验技术及细菌片的涂片,染色,镜检等技术) 4病毒的鸡胚分离培养技术(鸡胚死活的鉴定,鸡胚的接种,胚液的收集)病毒的血凝试 验和血凝抑制试验 5认识真菌(酵母菌,青霉菌,曲霉菌,毛霉菌,根霉菌)的形态 二,实验要求 1通过本次综合实习全面系统地掌握兽医微生物学的基本技术和细菌检验的基本程序,掌 握各种生理生化试验的原理及试验方法,将理论与实践有机统一 2加强对临床常见病原菌鉴定本领的操作训练 3熟练掌握微生物实验常用仪器的使用及培养基制备的原则和方法 4对每一步实验要认真对待,对实验结果应详细记录,仔细分析,以便得出正确的鉴定结 论,实习结束后,全面总结并写出实习报告 三,实验内容 1细菌的分离及诊断 2病毒的分离及诊断 3真菌的观察 四,实验材料与设备 1实验材料 (1) 无菌注射器,抗凝剂,健康鸡,健康兔,血琼脂基础,锥形瓶,蒸馏水,麦康凯 琼脂粉,三糖铁琼脂粉,营养琼脂粉,营养肉汤基础,雏鸡,小白鼠,木板,图钉,剪刀, 接种环,接种针,镊子,各种染色液,移液枪,葡萄糖培养管,蔗糖培养管,乳糖培养管, 甘醇培养管,靛基质培养管,硫化氢培养管,H2O2,氧化酶试纸,巴氏杆菌标准毒,巴氏 杆菌阳性血清,靛基质指示剂,载玻片,显微镜等 (2) 装有不明病毒的 80 编号小管一支,9-10 日龄鸡胚,打孔器,一次性注射器,剪 刀,记号笔,镊子,灭菌乳钵,离心管,空平皿,玻璃沙,空试管几支,西林瓶,青霉素, 移液管,锥型瓶,U 型 96 孔微量反应板,蛋架 (3)载玻片,接种环,酵母菌玻片,青霉菌玻片,曲霉菌玻片,毛霉菌玻片,根霉菌玻 片,镊子,盖玻片,显微镜 2实验设备高压消毒炉,恒温培养箱,离心机,电子天平,冰箱,轻微振荡器 五,实验方法和步骤 实验方法和步骤 (一)细菌的的分离及诊断 1实验前准备(此步分量为一组 6 个人) (1)心脏采血:触摸健康兔左前肢以下,胸骨以上,靠左的位置,通过心跳感觉心脏 位置, 用碘酒,酒精棉球消毒,用无菌注射器抽取 1ml 抗凝剂,并润湿注射器, 待酒精干后, 将针插入,边插边回抽,当有血冲上针筒时,即抽取血 9ml,用作血平板 (2)血琼脂平板:称取琼脂基础 33g,加 100ml 蒸馏水,加热溶解,倒入锥形瓶,高 压灭菌 15min,待冷却至 50℃,加入无菌脱纤维鸡兔血 10ml,摇匀,倾注至灭菌平皿 (3)麦康凯平板:称取麦康凯琼脂粉 143g,加 600ml 蒸馏水,加热溶解,倒入锥形瓶, 高压灭菌 15min,倾注至灭菌平皿 (实验室准备) (4)三糖铁琼脂:称取三糖铁琼脂粉 15g,加 240ml 蒸馏水,加热溶解,分装到试管, 每支约 10ml,高压灭菌 15min,趁热摆斜面,待其凝固 (实验室准备) (5)营养肉汤:称取营养肉汤基础 44g,加 200ml 蒸馏水,加热溶解,分装到试管,每 支约 10ml,高压灭菌 15min (实验室准备) 2分离培养取一因细菌感染而致死的小鼠,腹部向上固定于木板上,用酒精棉球消毒体表,打开腹 腔,暴露肝脏,用剪刀夹一燃烧酒精棉球,在肝脏表面烫之杀死表面杂菌,用灭菌接种环插 入烧灼部,将接种环旋转 1 圈,然后取材划线接种于血琼脂平板上,置 37℃温箱培养 24h 3形态与染色小鼠作分离培养后,用灭菌镊子和剪刀取一小块肝脏,作组织涂片,进行瑞氏染色,镜 检观察细菌形态特征 4肉汤增菌培养观察血琼脂平板上的细菌菌落形态特征, 然后用灭菌接种环挑取可疑菌落, 涂抹到载玻 片上, 进行革兰氏染色, 镜检 用灭菌接种针环挑取可疑菌落, 接种到加有血清的营养肉汤, 摇匀,置 37℃温箱培养 24h 5生化实验 观察肉汤变化情况,用灭菌接种环取肉汤中已纯化细菌,涂抹到载玻片上,进行革兰氏 染色,镜检进行生化试验 (1)用灭菌接种环取肉汤中已纯化细菌,分别在麦康凯平板,营养琼脂上划线 (2)用灭菌接种针取肉汤中已纯化细菌,分别在葡萄糖培养管,蔗糖培养管,乳糖培养 管,甘醇培养管,靛基质培养管,硫化氢培养管进行穿刺 (3)用灭菌接种针取肉汤中已纯化细菌,在三糖铁琼脂上进行划线并穿刺 将所有生化培养管及培养皿,置 37℃温箱培养 24h 6氧化酶和触酶试验用氧化酶试纸按压于菌落之上,若试纸变色则为阳性 取过氧化氢滴加菌落,若产生气泡,则为阳性 7观察生化实验结果 往靛基质培养管滴加指示剂,观察变化,其它生化管直接进行观察 (二)病毒的实验诊断 1实验前准备 (1)心脏采血:触摸健康鸡左翼以下,胸骨以上,嗉囊靠左的位置,通过心跳感觉心脏 位置,用碘酒,酒精棉球消毒,用无菌注射器插入,边插边回抽,当有血冲上针筒时,即抽 取鸡血 2~3ml,装入密封管中,用于血清得制备;用无菌注射器抽取 1ml 抗凝剂,并润湿注 射器,用同样方法取鸡血 9ml,并装入离心管中,用于鸡红细胞的制取 (2)血细胞悬浮液:往无菌离心管注入 2~3ml 鸡血,再加入 4ml 生理盐水,摇匀,放入 离心机以 2000r/s 离心 10min,然后取出离心管并用无菌注射器吸去其上清液,重复 4 次 用移液枪吸取 1ml 血细胞到 100ml 无菌玻璃瓶中,再加入 99ml 生理盐水,冷藏 2病毒病料的采集通过无菌手术,取病鸡的脾脏,肝脏,肺,脑的组织块,将其剪碎后,加入少量玻璃砂 研磨,然后加入 4ml 生理盐水和双抗各 001ml,用注射器将其注入离心管,以 10000r/s 进 行离心 10min 3 接种接种鸡胚,采用绒毛尿囊腔接种,通过照胚检测鸡胚死活,在气室边缘避开胚体和血管 处作一记号,作为接种的部位,碘酒,酒精消毒,并用打孔器在此处打孔;用 1ml 注射器吸 取病毒液 01ml,注射器沿小孔插入鸡胚约 15CM,注入病毒液以胶布封孔,置于 37 C 温箱中直立培养 4观察已接种鸡胚 24 小时后观察鸡胚未死亡 5处理已接种鸡胚接种 48 小时后观察鸡胚已死,将鸡胚置 4 C 冷冻过夜 6收胚收获病毒液采用无菌手术去气室顶壳,开口直径为整个气室大小,用无菌镊子撕去 部分蛋膜, 撕破绒毛尿囊膜而不撕破羊膜, 用镊子轻轻按住胚胎, 用消毒注射器吸取尿囊液, 置于西林瓶中,备用解剖胚胎 7血凝及血凝抑制试验采用 1%红细胞,以及新城疫的血清和禽流感血清,按下表操作 ①血细胞凝集试验(HA) (单位:ūl) 孔号 稀释 度 生理 盐水 病毒 鸡红 细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 弃 1 1:2 50 2 1:4 50 3 1:8 50 4 1: 16 50 5 1: 32 50 6 1: 64 50 7 1 : 128 50 8 1 : 256 50 9 1 : 512 50 10 1 : 1024 50 11 1 : 2048 50 12 对照 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 用轻微震荡器震荡 1~2min, 放入 37℃箱中 15~30min判断 1 个单位血凝价,并配成 4 个单位病毒溶液 2 ○血细胞凝集抑制试验(HI) (单位:ūl) 孔号 稀释 度 生理 盐水 新城 疫血 清 1 1:2 50 2 1:4 50 3 1:8 50 4 1: 16 50 5 1: 32 50 6 1:64 50 7 1 : 128 50 8 1 : 256 50 9 1 : 512 50 10 1 : 1024 50 11 1 : 2048 50 12 对照 50 弃 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 4 单 位病 毒 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 用轻微震荡器震荡 1~2min,放入 37℃培养箱中 15~30min 鸡红 细胞 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 50 用轻微震荡器震荡 1~2min,放入 37℃培养箱中 15~30min (三)真菌的形态观察 真菌的形态观察 直接在显微镜下观察酵母菌装片,青霉菌装片,曲霉菌装片,毛霉菌装片,根霉菌装片 六,实验结果与分析 实验结果与分析细菌的的分离及诊断 (一) 细菌的的分离及诊断 1瑞氏染色后,显微镜观察到蓝色,两极浓染的球杆菌 2在血琼脂平板上培养 24 小时后,长出灰白色,湿润,有光泽,露珠状的小菌落 3对血琼脂平板上的菌体革兰氏染色后,显微镜观察到红色,两极浓染的球杆菌 4在营养肉汤中培养 24 小时后,原本清亮的液体变为浑浊,说明菌体在营养肉汤中大量繁 殖 5对营养肉汤中的菌体革兰氏染色后,显微镜观察到红色,两极浓染的球杆菌,说明该菌 是革兰氏阴性菌 6生化试验结果: 培养 基类 型 现象 三 糖 铁 麦康 凯 葡 萄 糖 + 蔗 糖 + 乳 糖 — 甘 醇 + 靛 基 质 + 硫 化 氢 — + - 三糖铁琼脂:培养基底部变黄,说明产酸,但不产气,不产硫化氢,可能被污染 麦康凯平板:不生长 葡萄糖生化管:由原本的紫色变为** 蔗糖生化管:由原本的紫色变为** 乳糖生化管:原来的紫色变浅 甘醇生化管:由原本的紫色变为** 靛基质生化管:滴加指示剂后,产生玫瑰红色 硫化氢生化管:由于缺乏硫化氢指示剂,无法对硫化氢一项做出判定,该培养管并未变色 7氧化酶和触酶实验:氧化酶试纸变紫色,为阳性;而触酶试验产生气泡,为阳性 以上结果与课本对照后较为接近,极有可能是巴氏杆菌 (二)病毒的实验诊断 124 小时后检查鸡胚未死亡,说明实验操作严格无菌操作,未感染其他细菌 2鸡胚收获及解剖 打开蛋壳后,提取病毒同时接种老师提供的病毒 3HA 试验: HA 试验结果如下表: (结果第一排为自己所收病毒液,第二排为老师所给病毒: ) 孔 号 稀 释 度 结 果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 1:2048 血细 胞对 照 # # # # # # # # # # # # # # # +++ +++ ++ ++ + + - - 结果:自己所收病毒血凝价为 1:256老师所给病毒血凝价为 1:128 4HI 试验 HI 试验结果如下表: (结果第一排为自己所收病毒液,第二排为老师所给病毒) 孔 号 稀 释 度 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:1024 病 毒 对 照 结 果 + ++ # + # ++ # # # # # # # # 血 清 对 照 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 结果:自己所收病毒的 HI 效价为 1:32老师所给病毒的 HI 效价为 1:128 (三)真菌的形态观察 酵母菌 青霉菌 曲霉菌 根霉菌 毛霉菌 七,实验总结 1 通过本次实验可了解并熟悉检验位置菌种的方法, 推断菌种时要综合分析 可能污染杂菌 的实验要重复进行 病毒的接种及吸取尿囊液时, 要注意保持无菌操作, 以防带进其他细菌, 影响实验结果 2在实验过程中,我就被灌输了很强的意识:一进到实验室中,就要尽可能地做好一切保 护措施,这是保护自己的基本条件和要求 3实验中所涉及的基本实验操作,我们都要清楚了解并且知道其中的原理,这对于我们来 说尤为重要 4实验中必然会遇到一些自己难以理解的问题,这要求我们要与指导老师做好沟通工作, 并且要加强团队合作精神与加深自立意识,加强自我的动手能力 5通过本次综合实验,我们巩固了本学期所学的普通培养基制备和鲜血培养基的制备,光 学显微镜油镜的使用,细菌片的分离培养鉴定技术,病毒的鸡胚分离培养技术(鸡胚死活的 鉴定,鸡胚的接种,胚液的收集)病毒的血凝试验和血凝抑制试验方法提高我们综合运用 兽医微生物学所学知识的能力,实际动手能力及观察,分析问题的能力
