| 中文名称 | 凝胶电泳 | 外文名称 | Gel electrophoresis |
|---|---|---|---|
| 或称 | 胶体电泳 | 用于 | 分离不同物理性质 |
| 分为 | 琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳 | ||
| 市场价 | 信息价 | 询价 |
聚丙烯酰胺凝胶电泳原理是什么
聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacryamide gel electropHoresis, PAGE)是由丙烯酰胺单体和交联剂甲叉...
什么叫电泳漆
电泳漆又叫电泳涂料。 早期以阳极电泳涂料为主，目前逐渐被阴极电泳涂料取代。 电泳涂料又可分为单组份和双组份两种，目前以双组份为主。 从颜色可分：黑色、灰色、白色和彩色。 从原料...
怎么去除电泳漆
您说的是烘烤过的呗？一般比较常用是发烟也就是浓，这个便宜一些，哪都有卖，就是操作起来得小心；另外还有专用脱漆剂也可以，不过价格比较贵；再如果又抛丸设备就可以用机器走一遍就OK了。就想到这些，希望能帮到...
电泳槽怎么使用
电泳槽的使用方法1、 将凝胶密封条框放在平板上，然后将凹型玻璃板与平板玻璃重叠2、 将两块玻璃立起来使其底端接触桌面，用手将两块玻璃板夹住放入电泳槽内，然后插入斜楔板（直面对玻璃，斜面对槽）到适中程度...
什么是电泳？
带电颗粒在电场作用下，向着与其电性相反的电极移动，称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。• 电泳原理： 电泳是电...
聚丙酰胺凝胶电泳
中性聚丙烯酰胺凝胶电泳
安装电泳装置和配制凝胶溶液
1.将0.8%的琼脂糖在0.25×TBE中熔化后冷却至50~60℃，立即注入凝胶框架中，并插入梳子。
2.凝胶固化后小心地拔出齿梳，用2把无菌手术刀将DNA凝胶块上样。若用不同内切酶消化凝胶块，则取不同样品时应将手术刀片烧灼后冷却。将DNA大小标志物上样至凝胶的两旁。
3.用1%液态低熔点琼脂糖凝胶(0.25×TBE配制)密封狭槽。
4.若有气泡存在，用注射器驱赶气泡。
5.一旦密封的低熔点琼脂糖已固化(大约10min)，可将凝胶搁入腔室，并用电泳缓冲液覆盖过胶面。
6.应设定合适的电压及转换时间(参考《分子医学技术》84页表8.1)并开始电泳。两个不同电泳方向的电流应相等。
7.电泳结束后，凝胶用0.25×TBE配制成的EB(0.4μg/ml)染色。
8.用泵自槽中排除缓冲液，续以双蒸水冲洗电泳槽。
9.凝胶成像:DNA在曝光的过程中可能会形成缺口。
10. 用0.25mol/L HCl漂洗凝胶30min，让DNA脱嘌呤，并有利于转移。
11. 凝胶用碱(变性溶液中)变性20min，两次，续以中性溶液1~5min。
12. 采用标准Southern印迹方案将DNA转印至尼龙膜上。一般来说，印迹PFGE凝胶的时间较普通凝胶印迹时间长(约48h)。
以凝胶(如聚丙烯酰胺凝胶、琼脂糖凝胶
等)为支撑物的区带电泳。
聚丙烯酰胺凝胶电泳与琼脂糖凝胶电泳的区别为：支持介质不同、用途不同、优势不同。
一、支持介质不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳：是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种常用电泳技术
2、琼脂糖凝胶电泳：是用琼脂或琼脂糖作支持介质的一种电泳方法
二、用途不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳：用于分离蛋白质和寡核苷酸
2、琼脂糖凝胶电泳：用于分子量较大的样品，如大分子核酸、病毒等
三、优势不同
1、聚丙烯酰胺凝胶电泳：有较高的分辨率
2、琼脂糖凝胶电泳：它制备容易，分离范围广
参考资料来源：
百度百科——聚丙烯酰胺凝胶电泳
百度百科——琼脂糖凝胶电泳
1、醋酸纤维素薄膜电泳 ：醋酸纤维素薄膜电泳是以醋酸纤维素薄膜为支持物,它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成醋酸纤维素膜薄是一种细密而又薄的微孔膜醋酸纤维素膜对样品的吸附性较小,因此,少量的样品,甚至大分子物质都能得以较高的分辨率又由于醋酸纤维素薄膜亲水性较小,故电渗作用也较小,并且它所容纳的缓冲液也较少,因此电流的大部分由样品传导,可以加速样品分离,大大节约电泳时间醋酸纤维素具有操作简单、快速、价廉、定量容易等优点,尤其较纸电泳分辨力强、区带清晰、灵敏度高和便于保存、照相等,目前醋酸纤维素薄膜电泳己取代纸电泳而被广泛应用于科学实验、生化产品分析和临床化验,如分析检测血浆蛋白、脂蛋白、糖蛋白、胎儿甲种球蛋白、体液、脊髓液、脱氢酶、多肽、核酸及其他生物大分子,为心血管疾病、肝硬化及某些癌症鉴别诊断提供了可靠的依据,因而已成为医学和临床检验的常规技术
2、 琼脂糖凝胶电泳 ：琼脂糖凝胶电泳是一种以琼脂糖凝胶为支持物的凝胶电泳,其分析原理与其它支持物电泳的最主要区别是：它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用琼脂糖凝胶具有网络结构,直接参与带电颗粒的分离过程,在电泳中,物质分子通过空隙时会受到阻力,大分子物质在泳动时受到的阻力比小分子大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅依赖于净电荷的性质和数量,而且还取决于分子大小,这就大大地提高了分辨能力琼脂糖系天然的琼脂加工制得,天然琼脂是一种多聚糖,主要由琼脂糖（约占80%）及琼脂胶组成琼脂糖是由半乳糖及其衍生物构成的中性物质,不带电荷而琼脂胶是一种含硫酸根和羧基的强酸性多糖,由于这些基团带有电荷,在电场作用下能产生较强的电渗现象所以常用于血清蛋白、血红蛋白、脂蛋白、糖蛋白、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶等同工酶的分离和鉴定,为临床某些疾病的鉴别诊断提供了可靠的依据与免疫化学反应相结合发展成为免疫电泳技术,用于分离和检测抗原可对目前常用的琼脂糖进行某些修饰,如引入化学基团羟乙基,则可使琼脂糖在65℃左右便能熔化,被称为低熔点琼脂糖该温度低于DNA的熔点,而且凝胶强度又无明显改变以此为支持物进行电泳,称为低熔点琼脂糖凝胶电泳,主要应用于DNA研究如DNA鉴定,DNA限制性内切酶图谱制作等,为DNA分子及其片段分子量测定和DNA分子构象的分析提供了重要手段
3、聚丙烯酰胺凝胶电泳 ：聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺和交联剂又称为共聚体的N,N’-甲叉双丙烯酰胺（简称Bis）在加速剂和催化剂的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶,以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称PAGE)应用范围广,可用于蛋白质、酶、核酸等生物大分子的分离、定性、定量及少量的制备,还可测定分子量、等电点等
4、等电聚焦电泳 ：等电聚焦电泳是利用具有pH梯度的电泳介质来分离等电点(pI)不同的蛋白质的电泳技术这是六十年代后期才发展起来的新技术,基本原理是在制备聚丙烯胺胶凝胶时,在胶的混合液中加入载体两性电解质(商品名Ampholine)这种载体两性电解质是一系列含有不同比例氨基及羧基的氨羧酸混合物,其分子量在300～1000范围内,它们在pH25～110之间具有依次递变但相距很近的等电点,并且在水溶液中能够充分溶解含有载体两性电解质的凝胶,当通以直流电时,载体两性电解质即形成一个从正极到负极连续增加的pH梯度如果把蛋白质加人此体系中进行电泳时,不同的蛋白质即移动并聚焦于相当其等电点的位置好的载体两性电解质应具有以下特点：在等电点处有足够的缓冲能力,不易被样品等改变其pH梯度；必须有均匀的足够高的电导,以便使一定的电流通过；分子量不宜太大,便于快速形成梯度并从被分离的高分子物质中除去；不与被分离物质发生化学反应或使之变性等Ampholine是一种常用的载体两性电解质要取得满意的等电聚焦电泳分离结果,除有好的载体两性电解质外,还应有抗对流的措施,使已分离的蛋白质区带不致发生再混合要消除这种现象,办法之一加入抗对流介质,用得最多的抗对流支持介质是聚丙烯酰胺凝胶
等电聚焦电泳与其它区带电泳比较具有更高的分辨率,等电点仅差001pH的物质即可分开；具有更好的浓缩效应,很稀的样品也可进行分离,并且可直接测出蛋白质的等电点所以此技术在高分子物质的分离、提纯和鉴定中的应用日益广泛但是等电聚焦电泳技术要求有稳定的pH梯度和使用无盐溶液,而在无盐溶液中蛋白质易发生沉淀
琼脂糖凝胶电泳marker的作用是分子标记。
DNA分子标记具有的优越性有：大多数分子标记为共显性，对隐性性状的选择十分便利；基因组变异极其丰富，分子标记的数量几乎是无限的；在生物发育的不同阶段，不同组织的DNA都可用于标记分析；分子标记揭示来自DNA的变异；
表现为中性，不影响目标性状的表达，与不良性状无连锁；检测手段简单、迅速。随着分子生物学技术的发展，DNA分子标记技术已有数十种，广泛应用于遗传育种、基因组作图、基因定位、物种亲缘关系鉴别、基因库构建、基因克隆等方面。
扩展资料
标记（Marker），染色体上一个可以被识别的区域（比如限制性内切酶的酶切点，基因的位置等）。标记的遗传能够被检测出来。标记可以是染色体上有表达功能的部分（比如基因），也可以是没有编码蛋白质功能但遗传特性能够被检测出来的部分。
蛋白marker可分为：
未预染的Marker即宽分子量蛋白标准、高分子量蛋白标准以及低分子量蛋白标准；
预染的Marker即单色预染和多色预染。
在western Blot过程中，分子量Marker就像个螺丝钉一样虽然是个小细节，然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。
这个Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小，只有标准量精确无误，实验结果才有说服力，除此之外，蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用，所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。
参考资料来源：百度百科-Marker
参考资料来源：百度百科-分子标记
1 根据片段大小配制不同浓度的胶（改变分辨率），片段越小，需要胶浓度越大。
2 胶要现制先用
3 选择合适的Marker
4 配胶的缓冲液与电泳缓冲液要是同一种，且浓度一致（1倍）
5 点样时要加入loading buffer，并注意，不要将样点到点样孔之外（飘样），也不要将胶戳漏（漏样）
6 根据片段大小，及电泳检测目的，选择合适的电压及电泳时间
7 EB染色。可选择制胶时加入EB（要在溶玩胶后，且温度至室温时（用手握住制胶容器，不烫手即可））；或电泳结束后，将胶放入EB溶液中染色。
（1）琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳
琼脂糖是一种线性多糖聚合物，是从红色海藻产物琼脂中提取而来的。当琼脂糖溶液加热到沸点后冷却凝固便会形成良好的电泳介质，其密度是由琼脂糖的浓度决定的。经过化学修饰的低熔点(LMP)的琼脂糖，在结构上比较脆弱，因此在较低的温度下便会熔化，可用于DNA片段的制备电泳。
聚丙烯酰胺凝胶主要有两种方式:一是用于分离和纯化双链DNA片段的非变性聚丙烯酰胺凝胶。在未变凝胶中分离DNA的缺点是DNA的迁移率受碱基组成和序列的影响。由于无法得知未知DNA的迁移是否反常，故不能用未变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳确定双链DNA的大小。二是用于分离及纯化单链DNA片段的变性聚丙烯酰胺凝胶。这类聚丙烯酰胺凝胶是在核苷酸碱基配对抑制剂(尿素或甲酰胺)的存在下聚合而成，变性DNA的移动速度同其碱基组成及序列几乎完全无关，故可用于分离及纯化单链DNA片段和DNA测序等。
（2）脉冲电场凝胶电泳
普通的凝胶电泳技术显然是无法分离如此超大分子量的DNA分子的。1984年，DCSchwartz和CRCantor发明的脉冲电场凝胶电泳技术，可以成功地用来分离整条染色体这样的超大分子量的DNA分子。在常规的琼脂糖凝胶电泳中，超过一定大小范围的所有的双链DNA分子，都是按相同的速率迁移的。这是因为它们在单向恒定电场的作用下，仅以“一端向前”的方式游动穿过整个胶板。而在脉冲电场中，DNA分子的迁移方向是随着所用的电场方向的周期性变化而不断改变的。
在标准的PFGE中，头一个脉冲的电场方向与核酸移动方向成45°夹角，而下一个脉冲的电场方向与核酸移动方向在另一侧亦成45°夹角。由于加压在琼脂糖凝胶上的电场方向、电流大小及作用时间都在交替地变换着，这就使得DNA分子能够随时地调整其游动方向，以适应凝胶孔隙的无规则变化。与分子量较小的DNA分子相比，分子量较大的DNA分子需要更多的次数来更换其构型和方位，以使其可以按新的方向游动。因此，在琼脂糖介质中的迁移速率也就显得更慢一些，从而达到分离超大分子量DNA分子的目的。应用脉冲电场凝胶电泳技术，可成功地分离到分子量高达107bp的DNA大分子。
